Способ определения амилазной активности рубца жвачных животных Советский патент 1991 года по МПК C12Q1/00 

Изобретение относится к микробиологии и предназначено для ускорения определения амилазной активности микроорганизмов в рубце жвачных животных.

Цель изобретения - упрощение, ускорение и удешевление способа.

Изобретение осуществляется следующим образом.

В отфильтрованную рубцовую жидкость вносят йодкрахмальную индикаторно-суб- стратную микропленку, которая содержит крахмал, желатин, йод кристаллический и йодистый калий в соотношении, мас.%: 0,0004:0,0004:0,0033:0,0066 на 0,04 мл дистиллированной воды. Микропленку инкубируют в рубцовой жидкости до полного обесцвечивания и расщепления йодкрзх- мального комплекса черного цвета и рассчитывают количество крахмала, расщепленного в единицу времени. Желатин выполняет функцию твердофазного носителя крахмала и раствора Люголя (йода кристаллического и йодистого калия).

Внесение в рубцовую жидкость йод- крахмальной индикаторносубстратной мик- ропленки исключает многоэтэпность исполнения анализа, полное расщепление крахмала (обесцвечивание микропленки) происходит в течение 5-30 мин инкубации, что в 5-10 раз ускоряет исследования (табл. 1). Применение йодкрахмальной индикаторносубстратной микропленки позволяет повысить экономичность проводимых анализов. так как расходуется меньше реактивов (табл. 2).

Способ иллюстрируется примерами.

сь

СА) Ь

V4 vj

Пример 1. Для приготовления микропленки в пробирку 1 вносят растворимого крахмала 0,1 г, приливают 7,9 мл дистиллированной воды, взбалтывают и нагревают над горелкой, доводя до кипения, и получают прозрачный раствор крахмала (субстрата). В пробирку 2 берут 1,0 г пищевого желатина и заливают 9,0 мл холодной дистиллированной воды, выдерживают 40- 60 мин, нагревают, не доводя до кипения, при непрерывном помешивании до получения прозрачного раствора желатина. Далее в пробирку 1, содержащую субстрат, вносят раствор жетатина 1,0 мл и раствор Люголя 1,0мл.

Раствор Люголя готовят предварительно по прописи: кристаллического йода 1 г, йодистого калия 2 г. воды дистиллированной 300 мл. Сначала растворяют в небольшом количестве воды йодистый калий, после чего добавляют кристаллический код. По растворении смеси прибавляют дистиллированной воды до 300 мл.

Раствор в пробирке 1 тщательно перемешивают и получают йод крахмальную ин- дикаторно-субстратную пленочную смесь черного цвета, которую наносят с помощью пипетки-дозатора каплями объемом 0,04 мл на гидрофобную поверхность бумаги, покрытой полимерной пленкой.

Таким образом, при расчете в массовых единицах йодкрахмальная индикатор- но-субстратная микропленка содержит крахмала 0,0004 г, желатина 0,0004 г, кристаллического йода 0.0033 г, йодистого калия 0,0066 г на 0,04 мл дистиллированной воды.

Бумагу с нанесенными кьлмями оставляют при комнатной температуре на 18- 24 ч, затем выдерживают в термостате при 35-45°С до полного высыхания и образования автономных йодкрахмальных индика- торно-субстратных микропленок черного цвета, которые отделяют от поверхности бумаги. Микропленки собираю и хранят во флаконах при комнатной температуре в течение 2 лет (срок наблюдения).

Для определения амилазной активности рубца жвачных животных в пробирку приливают 0,5 мл надосадочной или отфильтрованной части рубцового содержимого. Затем вносят йодкрахмальную индикатор0

но-субстратную микропленку черного цвета с помощью бактериалогической петли, смачивают и прикрепляют ее к стенке пробирки, инкубируют при 37-39°С до полного обесцвечивания микропленки (до 30 мин). Наблюдения за сменой окраски микропленки осуществляют визуально через стеклянную даерь термостата с целью поддержания постоянной температуры. Расчет результатов амилазной активности рубцового содержимого производят по формуле

мг

амилазная активность ()

мин

где А - количество крахмала, содержащегося в микропленке, мг;

Б - время полного расщепления крахмала микропленки, мин.

Результаты представлены в табл. 1.

Пример 2. Способ осуществляют в соответствии с примером 1, варьируя содержание компонентов в составе микропленки.

Результаты представлены в табл. 3.

Из табл. 3 следует, что оптимальным соотношением крахмала, желатина, кристаллического йода и йодистого калия в составе микропленки является соответственно, мас.% 0,0004:0,0004:0,0033:0,0066 на 0,04 мл дистиллированной воды.

Формула изобретения

Способ определения амилазной активности рубца жвачных животных, предусматривающий инкубацию рубцовой жидкости с крахмалом в качестве субстрата, оценку

расщепления крахмала по реакции с йодсо- держащим реактивом и последующий расчет количества крахмала, расщепленного в единицу времени, отличающийся тем, что, с целью ускорения, упрощения и удешевления способа, инкубацию с крахмалом и оценку его расщепления осуществляют одновременно путем внесения в рубцовую жидкость крахмала и йодсодержащего реактива в виде йодкрахмальной индикаторносубстратной микропленки, содержащей крахмал, желатин, кристаллический йод и йодистый калий при массовом соотношении компонентов соответственно 0,0004:0,0004:0,0033:0,0066 на 0,4 мл дистиллированной воды, и последующей инкубации до полного обесцвечивания микропленки.

Т а б л и ц а 1

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам определения амилазной активности в рубце жвачных животных. Цель изобретения - ускорение, упрощение и удешевление способа. Для определения амилазной активности в рубцовую жидкость вносят подкрахмальную индикаторно-субстратную микропленку, содержащую крахмал, желатин, йод кристаллический и йодистый калий при массовом соотношении компонентов: 0,0004:0,0004:0,0033:0,0066 на 0,04 мл дистиллированной воды. Инкубацию осуществляют до полного обесцвечивания микропленки и оценивают количество крахмала, расщепленного в единицу времени. 3 табл. Ё

Примечание. В 1 микропленке содержится 0.4 мг крахмала.

Таблица2

Примечание. Всего исследованы 15 проб рубца жвачных животных.