Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью и ингибирующих биосинтез меланина у возбудителя пирикуляриоза риса Советский патент 1991 года по МПК G01N24/10 A01N63/04 C12Q1/00 

Изобретение относится к исследованию влияния химических веществ на растения, в частности к способам определения фунгицидной активности веществ разного происхождения, и может быть использовано в сельском хозяйстве при поиске и оценке активноеги новых фунгицидов.

Цель изобретения - ускорение и упрощение процесса оценки фунгицидной активности вещества.

Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью и ингибирующих биосинтез меланина у возбудителя пирикуляриоза риса осуществляют следующим образом.

Анализируемое вещество добавляют в жидкую или агаризованную питательную среду, на которую засевают грибом Pyricularia oryzae. На жидкой среде выращивают мицелий, который отделяют от среды фильтрацией через ткань, промывают водой и отжимают. На агаризованной среде образуются колонии гриба, с которых смывают споры. Последние отделяют от среды центрифугированием, ресуспендируют в воде, центрифугируют вновь, а надосадочную жидкость отбрасывают. Полученный материал сушат при комнатной температуре, засыпают в ампулы и взвешивают. Величина навески 5-10 мг. На ЭПР-спектрометре снимают спектры образцов и рассчитывают

о со ел о ю

концентрацию парамагнитных центров в спинах на 1 мг материала.

П р и м е р 1. 50 мкг/мл трициклазола добавляют в жидкие и агариэованные питательные среды следующих составов: жидкая питательная среда N 1 содержит морковный отвар, полученный кипячением сухой моркови из расчета 50 r/л воды, а среда № 2 содержит 2,5 г/л NaNOa, 1 г/л КН2Р04,0,5 г/л MgSO4,5 г/л сахарозы, 0,2 мг/л тиамина, 5 мкг/л биотина, 3 г/л гидролизата казеина.

Для получения агаризованных сред в каждую из указанных сред добавляют 15 г/л агара.

Одновременно готовят аналогичные питательные среды без добавления трициклазола. Все среды засевают грибом Pyrlcularla oryzae

На жидких питательных средах выращивают мицелий, который отделяют от среды фильтрацией через ткань, промывают водой и отжимают. На агаризованной питательной среде образуются колонии гриба, с которых смывают споры.

Полученный материал сушат при комнатной температуре, засыпают в ампулы и взвешивают. Величина навески 5-10 мкг. На ЭПР-спектрометре снимают спектры образцов и рассчитывают концентрацию парамагнитных спектров в спинах на 1 мг материала.

В табл.1 показано влияние 50 мкг/мл трициклазола на содержание меланина в мицелии и спорах гриба Pyrlcularla oryzae на разных питательных средах (возраст культуры 10 дней (споры) и 14 дней (мицелий).

П р и м е р 2. Выращивание гриба осуществляют по примеру 1, только в качестве исследуемого вещества в питательные среды добавляют фталид в концентрациях 2 мкг/мл и 50 мкг/мл.

В табл.2 показано влияние фталида на содержание меланина в спорах гриба Pyrlcularla oryzae.

Как показано в табл.1 и 2 подавление меланизации гриба испытанными фунгицидами четко регистрируется по значительному падению сигнала ЭПР. Оно происходит на обеих средах и затрагивает как мицелий, так и споры Эффект зависит от концентрации фунгицидов, причем в одинаковых условиях трициклазол является более сильным ингибитором меланиногенеза, чем фталид. П р и м е р 3. Одновременно проводят определение фунгицидной активности трициклазола в тепличных условиях известным способом биологического заражения растений.

Испытания проводят на растениях риса сорта Клейкий 424. Фунгицид вносят в почву, а инокуляцию проводят путем опрыскивания растений суспензией спор гриба. В контроле используют 54 растения, степень развития болезни 67%. тип реакции 3-4. Трициклазолом обработано 52 растения,

степень развития болезни 0,3%, тип реакции 2-3. Можно видеть, что трициклазол уменьшает степень развития болезни приблизительно в такой же мере, как и сигнал ЭПР в клетках гриба.

Предлагаемый способ исключает такие трудоемкие операции, как выращивание растений в контролируемых условиях, заражение растений, количественный учет развития болезни по сравнению с известным способом, а также сокращает время анализа вдвое-втрое и уменьшает его трудоемкость. Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью, позволяет

легко ограничить число препаратов для окончательного подтверждения их активности согласно известному способу. Формула изобретения Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью и ин- гибирующих биосинтез меланина у возбудителя пирикуляриоза риса, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, готовят питательные

среды с исследуемым веществом и без него, засевают каждую из них микроскопическим грибом Pyricularia oryzae. выращивают его, отделяют образующиеся споры или мицелий от среды, высушивают и определяют в

них содержание меланина методом ЭПР, а оценку фунгицидной активности ведут по степени снижения содержания меланина в мицелии или спорах, выращенных на среде с добавлением исследуемого вещества по

сравнению с мицелием или спорами, выращенными на среде без добавления исследуемого вещества.

Таблица 1

Изобретение относится к исследованиям влияния химических веществ на растения, в частности к определению фунгицид- ной активности веществ разного происхождения, и может быть использовано в сельском хозяйстве и оценке активности новых фунгицидов. Цель изобретения - ускорение и упрощение процесса оценки фунгицидной активности веществ. Скрининг химических соединений, обладающих фунгицидной активностью и ингибирующих биосинтез маланина у возбудителя пирику- ляриоза риса, заключается в том, что анализируемое вещество добавляют в жидкую или агаризованную питательную среду, на которую засевают гриб Pyricularia oryzae, образующиеся споры или мицелий сушат, засыпают в ампулы, на ЭПР-спектрометре снимают спектры образцов, а оценку фунгицидной активности ведут по степени снижения содержания меланина в мицелии или спорах по отношению к контролю. 2 табл. (Л С

Таблица 2