Способ получения иммобилизованного фермента Советский патент 1991 года по МПК C08F220/18 C08F8/30 

Изобретение относится к области создания иммобилизованных ферментов.

Цель изобретения - повышение удельной активности иммобилизованного фермента.

Следукнчие примеры иллюстрируют изобретение, при этом примеры 1-11 иллюстрируют получение полимера, используемого в предлагаемом способе, а примеры 12-29 - осуществление предлагаемого способа.

Пример 1. В полимеризаторе, снабженном обратным холодильником, мешалкой и термостатом, нагревают до 80°С раствор следующего состава, г: раствор фосфатного буфера (рН 7,0) 10; натриг.нпя соль 4,4 -азобис-(4дпановалериановой кислоты) 0,4; лау- рилсульфат натрия 0,3; дистиллированная вода 555.

К этому раствору добавляют каплями также при 80°С в течение 4 ч эмульсию, содержащую, г: метилметак- рилат 360; бутилакрилат 210; глици- .

дилметакрилат 30; натриевая соль 4,4 азобис-,(4-циановалериановой кислоты) 2;

лаурилсульфат натрия 3; дистиллиро-ч

ванная вода 840.

Затем перемешивают еще в течение 12 ч при 80°С, охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Получают не содержащую коагулят дисперсию. Содержание твердого вещества составляет

ОЭ

сл сп

со

см

80°С

около 30%, значение рН 7,3, вязкость 2. мПа« с .

Пример 2. В полимеризатор, снабженный обратным холодильником н термостатом, подают раствор следующего состава, г: раствор фосфатного буфера (рН 7,0) 50; лаурилсульфат натри 0,3; натриевая соль 4,4 -азобис-(4- циановалериановой кислоты) 0,3; ди- стиллированная вода 515, и нагревают до 80°С.

К этому раствору добавляют при

в течение 4 ч эмульсию, содержащую, г: метилметакрилат 300; бутил- акрилат 210; глицидилметакрилат 90; натриевая соль 4,4 -азобис-(4-циано- валериановой кислоты) 2; лаурилсульфат натрия 3; дистиллированная вода 840.

Затем перемешивают в течение 90 мин при 80 С, охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Получают хорошо фильтруемую, не содержащую коагулят дисперсию. Содержание твердого вещества составляет около 30%, значение рН /,1, вязкость 1 .

Дисперсия содержит полимер указанного в примере 1 состава.

ПримерЗ. В полимеризатор, снабженный обратным холодильником, мешалкой и термостатом, подают раствор следующего состава, г: лаурилсульфат натрия 6,5; натриевая соль 4,4 -азобис-(4-циановалериановой кислоты) 0,6; раствор фосфатного буфера (рН 7,0) 10,0; дистиллированная вода 600,0, и нагревают до

80° С.

К этому раствору добавляют каплями при 80 С в течение 3 ч эмульсию, содержащую, г: метакриламид 18; этилен- гликольдиметакрилат 11; метилметакрилат 150; глицидилметакрилат 180; лаурилсульфат натрия 1,5; натриевая соль из 4,4 -азобис-(4-циановалериа- новой кислоты) 2,0; дистиллированная вода 900.

Затем перемешивают еще в течение 30 мин при 80 С, охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Получают хорошо фильтруемую, не содержащую коагулят дисперсию. Содержание твердого вещества 19,4%, -значение рН 7,7, вязкость L мПа-с.

П р и м е р 4. Повторяют пример 3 с той ратницей, что добавляют -эмульсию следующего состава, г; метлкрил- амид 13; этиленгликолъдиметмкри тат 5о;

5

0

5

0

5

0

5

0

5

метилметакрилат 125; глицидилметакрилат 180.

Вспомогательные вещества, продолжительность полимеризации и температура полимеризации те же самые, что и в примере 3. Получают хорошо фильтруемую, не содержащую коагулят дисперсию. Содержание твердого вещества 19,7%, значение рН 7,6, вязкость 1 мПа с. v Дисперсия содержит полимер приведенного в примере 3 состава.

П р и м е р 5.

а.В реактор, снабженный обратным холодильником, мешалкой и термометром, подают 16DO г воды и нагревают до 80 С. После добавления 3 г изобу- тилметакрилата, 3 г метилметакрилата, 0,3 г этиленгликольдиметакрилата и 0,8 г лаурилсульфата натрия добавляют 4 г персульфата аммония, растворенного в 36 г воды. Затем добавляют каплями в течение 2 ч при 80°С смесь 200 г изобутилметакрилата, 200 г метилметакрилата и 20 г этиленгликольдиметакрилата .

После добавления мономера смесь перемешивают в течение 1 ч при 80 С. Получают свободную от коагулята, хорошо фильтруемую, низковязкую 20%-ную дисперсию.

б.В реактор, снабженный обратным холодильником, мешалкой и термометром, подают 330 г воды. Затем добавляют

10 мл фосфатного буферного раствора со значением рН 7 (Титризоль фирмы Мерк) и 160 г исходной дисперсии а. После нагревания до 80°С добавляют 0,4 г натриевой соли 4,4 -азобис-(4- циановалериановой кислоты) в 4 мл воды. Чатем добавляют в течение 3 ч при 80 с эмульсию, состоящую из 1000 г воды, 1 г лаурилсульфата натрия, 2 г натриевой соли 4,4 -аэо- бис-(4-циановалериановой кислоты), 160 г этилацетата и 145 г изобутилметакрилата.

Затем в течение 60 мин добавляют раствор 10 г амида метакриловой кислоты- и 0,6 г натриевой соли 4,4 -азо- бис-(4-циановалериановой кислоты) в 300 г воды, а также мономерную смесь, состоящую из 50 г этилакрилата, 45 г глицидилметакрилата. Затем перемешивают еще в течение 60 мин при 80 С. Получают свободную от коагулята низ- коня экую дисперсию с содержанием твердого вещества . 0%.

516

II р и м е р 6 . Повторяют пример 5 с той разницей, что подают в течение 3 ч при 80°С эмульсию, состоящую из 1000 г волы, 1 г лаурнлсульфата нат- рия, 2 г натриевой соли 4,4 -азобис- (4-циановалериановой кислоты), 160 г этилакрилата, 145 г изобутилметакри- лата и 1,5 г этиленгликольдиметакри- лата.

Затем в течение 60 мин добавляют раствор Ю г амида метакриловой кислоты и 0,6 г натриевой соли 4,4 -азо- бис-(4-циановалериановой кислоты) в 300 г воды, а также мономерную смесь, состоящую из 50 г этилакрилата, 45 г глицидилметакрилата и 0,5 г этилен- гликольдиметакрилата. Затем перемешиф

вают еще в течение 60 мин при 80 С.

Получают свободную от коагулята низковязкую дисперсию с содержанием твердого вещества 20%.

Лисперсия содержит полимер приведенного в примере 5 состава.

Пример 7, Повторяют пример 5 с той разницей, что используемьй на последней стадии полимеризации раствор содержит 25 г оксиэтилметакрила- та (вместо 10 г метакриламида), 70 г этилакрилата (вместо 50 г) и 5 г мет- акролеина (в опыте А) или 5 г метак- рилата N-оксисукцинимида (в опыте Б) вместо 45 г глицидилметакрилата. В обоих случаях получают свободную от коагулята низковязкую дисперсию.

П р и м е р 8. В полимеризаторе растворяют при 80°С в 530 г воды 0,5 г натриевой соли 4,4 -дзобис-(4- циановалериановой кислоты)и Т,15 г лау рилсульфата натрия. К этому раствору добавляют в течение 3 ч при 80°С эмульсию, состоящую из 156 г этилакрилата, 14,5 г изобутилметакрила- та, 1,5 г этиленгликольдиметакрилата, 0,9 г лаурилсульФата натрия, 1,8 г натриевой соли 4,4 -азобис-(4-циановалериановой кислоты) и 90;) г воды. I

Затем добавляют в течение 1 ч при 80°С эмульсию, состоящую из 70 г этил акрилата, 25 г метилметакрилата, 5 г глицидилметакрилята, 0,6 г натриевой соли 4,4 -азобис-(4-циановалериановой кислоты) и 300 г воды.

По истечении 15 мин после подачи дисперсию охлаждают до комнатной температуры.

Содержание сухого вещества 20%, значение рН 7,1.

16

II р и м ер . 15 дисперсию гоглас- но примеру 8 погружают пинцетом в теение 3 ч полистирольные шарики (диаметром О,/ мм). После вынимания эти арики кладут на Лштьтровальную бумагу и сушат в течение 3 ч при комнатной температуре. Сухие шарики хранят в холодильнике при -20 С, на шарики нанесено 32 мкг сухого лака.

Пример 10. Повторяют пример 1 с той разницей, что используют мономер состава, г: метилметакрилат 360; бутилакрилат 200; сложный N-оксисук- цинимидный эфир 6-метакрилоиламино- гексановой кислоты 40.

Получают дисперсию с содержанием твердого вещества около 30 вес.%. Пример 11.

Повторяют пример 1 с тон разницей, что используют мономер состава, т: метилметакрилат 380; бутилакрилат 200; продукт присоединения сложного 2-окси- этилового эфира акриловой кислоты к 1,6-гексадиизотиацианату 20.

Получают дисперсию с содержанием твердого вещества около 30%.

Пример 12. Иммобилизация энзима рибонуклеаза.

100 мг рибонуклеазы (Е.С.2.7.7,16) из панкреазы (удельная активность 14,6 U/мг) с рибонуклеиновой кислотой в качестве субстрата, растворяют в 1 мл 0,05 М фосфатного буфера с рН 7,5. К этому раствору добав-г ляют при перемешивании 5 мл дисперсии согласно примеру 2. Затем отстаивают в течение 3 дней при 23°С.

Переработку осуществляют путем трехкратного суспендирования в 50 мл раствора 1М хлористого натрия и последующего центрифугирования. Затем еще 2 раза промывают 50 мл 0,05 М фосфатного буфера. Выход 1,1 г влажного продукта.

Согласно анализу надосадочной жидкости и промывной воды выход иммобилизованного продукта составляет 50%.

Активность энзима определяют путем алкалиметрического титрования при 37°С и рН 7,5 с рибонуклеиновой кислотой в качестве субстрата.

Результаты сведены в табл.1.

i

Пример 13. Иммобилизация энима трипсина.

Повторяют пример 12 с той разнией, что в качестве энзима используют

716

1i)0 мг трипсина (E.G. 3.4.4 .4) от те-1 ленка (удельная активность 144/мг с использованием казеина в качестве субстрата и 51,4 U/мг с использовали- ем КАЭЭ - гидрохлорид сложного этилового эфира - N -бензоил-аргинина - к качестве субстрата).

Согласно анализу надосадочной жидкости и промывной воды выход иммо- билизоваиного продукта составляет 52%.

Определение активности энзима осуществляют ялкалиметрическим титрованием при 3/бС и рН 7,5 (БАЭЭ) или рН 8,0 (казеин).

Результаты сведены в табл. 2.

Примеры 14-19. Иммобилизация энзима трипсина.

Повторяют пример 13 с той разни- цей, что энзим и латекс берут в соотношении, указанном в табл. 3.

Согласно анализу надосадочной жидкости и промывной воды выход иммобилизованного продукта в примерах 14-19 составляет 80, 74, 88, 62, 50 и 58% соответственно.

Пример 20. Иммобилизация энзима пенициллиновой амидазы.

Повторяют пример 12 с той разницей что в качестве энзима используют 100 мг пенициллиновой амидазы (E.G. 3.5.1.11) Escherichia coli (удельная активность 10 U/мг).

Согласно анализу надосадочной жид- кости и промывной воды выход иммобилизованного :. продукта составляет 55%.

Активность энзима определяют путем измерения при 37°С и рН 7,8 (субстрат калиевая соль пенициллина).

Результаты сведены в табл.4.

Прим ер 21. Иммобилизация энзима рибонуклеаза.

Повторяют пример 12 с той разницей, что используют латекс согласно примеру 3.

Согласно анализу надосадочной жидкости и промывной воды выход иммобилизованного продукта составляет 56%.

Результаты сведены в табл. 5.

Пример 22. Фиксация энзима рибонуклеаза на бумаге, активированной путем пропитки дисперсии примера 1 .

а. 100 мл дисперсии согласно примеру 1 разбавляют 500 мл дистиллированной воды. Этой 5%-ной дисперсией пропитывают бумагу размером 100 см2.

0

5

0

0

5

0

5

Л

Затем отжимают, оставляют в течение 1 ч при комнатной температуре и затем сушат при 80 С в течение 30 мин. Обработанная таким образом бумага содержит 20 г полимера на 1 мг. Эту реактивную бумагу можно хранить при температуре ниже -15°С по меньшей мере в течение 12 мес.

б. 100 мг рибонуклеазы (из пакреа- зы) растворяют в 0,05 М фосфатного буфера (рН 7,5). Этим раствором пропитывают обработанную на стадии а бумагу и затем оставляют стоять в течение 72 ч при 23°С. Затем отжимают и 3 раза промывают 1 н. раствором хлористого натрия и 2 раза 0,05 М раствором фосфатного буфера (рН 7,5). При этом активность (третье применение) составляет 2 U/г влажной бумаги.

Условия определения активности: температура 37°С, рН 7(5. Выход ак-. тивности иммобилизованного продукта 0,4%.

. П р и м е р 23. Повторяют при-: мер 12с той разницей, что используют энзим трипсин. При этом активность (третье применение, субстрат БАЭЭ, рН 7,5, температура 37 С) составляет 2,5 U/г влажной бумаги.

При этом выход иммобилизованного продукта составляет 58%, а выход его активности 0,1%.

Пример 24. Повторяют пример 22 с той разницей, что для пропитки бумаги используют дисперсию с меньшей концентрацией (100 мл дисперсии согласно примеру 1, разбавленной 200 мл дистиллированной воды).

Условия сушки: 12 ч при 25°С в камерной сушилке с циркуляцией воз-. духа.

Твердое вещество полимера/м2 бума- г.

Затем осуществляют фиксацию энзима трипсин аналогично примеру 22.

При этом активность (третье применение) составляет 4,1 U/г влажной бумаги с применением субстрата БАЭЭ со значением рН 7,5 при 37°С, а выход активности иммобилизованного продукта 0,15%.

Пример 25. Повторяют пример 24 с той разницей, что для пропитки используют латекс согласно примеру 2 (разбавление аналогично примеру.24: 200 мл дисперсии в 200 мл дистиллированной воды).

Твердое вещество полимера/м2 бу- г. При этом активность (третье применение) составляет 7 U/r влажной бумаги (субстрат БАЭЭ, рН , 7,5, температура 37°С), а выход активности иммобилизованного продукта Oj25%.

П р и м е р 26. Повторяют при- мер 22 с той разницей, что пропитку JQ бумаги осуществляют дисперсией примера 10, доведенной до содержания твердого вещества 10% путем добавле- ния дистиллированной воды, и в качестве энзима используют трипсин. 15

При этом активность (третье применение) составляет 5,2 и 2,5 U/r влажной бумаги соответственно.

Прим ер 27. Иммобилизация Escherichia coli.20

К 10 мл 20%-ной суспензии Escherichia coli в физиологическом растворе поваренной соли добавляют 10 мл дисперсии согласно примеру 4. Затем оставляют стоять в течение 24 ч при 25 комнатной температуре. Получают сетчатый материал, который очищают путем центрифугирования.

Выход влажного продукта 4,5 г, а выход иммобилизованного продукта .. 30 100% (в надосадочной жидкости и в промывной воде больше не обнаруживается) .

Данные по активности влажного продукта и выхода активности иммобилизованного продукта сведены в табл. табл. 6.

Пример 28. Повторяют приер 13 с той разницей, что используют исперсию примеров 5-7. При этом ак- 40 ивность (третье применение, казеин качестве субстрата) составляет 30,5; 29,8 и 31,2 и/г соответственно.

Пример 29. На 100 шариков согласно примеру 9 наливают 20 мл ан- д$ тител, получаемых из антисыворотки (из коз) против человеческого глобуина путем сродственной хроматографии и последующего разбавления 0,5 М фосатного буфера (рН 7,5) до концентра- 5Q ции 30 мкг/мл.

Смесь оставляют стоять в течение ночи при 23°С без встряхивания и без перемешивания. Затем декантируют и 3 раза промывают 0,5М фосфатного бу35

55

фера. Затем альбумином сыворотки крови крупного рогатого скота (1% в О,1М фосфатного буфера, рН 7,5) инкубируют в течение 3 ч при комнатной темпера,

JQ 15

0

5

0

0

$ Q

5

5

туре и затем еще раз промыплют раз 0,1М фосфатного буфера (рН /,5 , содержащего 0,1 вес.% азида натрия). Один из обработанных таким обратом шариков подают в пробирку, диаметр которой на 1 мм больше, чем диаметр парика. В нее подают 0,2 мл разбавленной 0,02 М фосфатного буфера СрН /,5, 0,15 М NaCl) до 1:10000 человеческой сыворотки и инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем шарик промывают 0,02 М содержащего NaCl фосфатного буфера и к нему добавляют 0,2 мл продукта из перокси- дазы и античеловеческого глобулина (из коз), который предварительно разбавляют содержащим NaCl фосфатным буфером и инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем хорошо промывают содержащим NaCl фосфатным буфером, после чего к шарику добавляют 0,2 мл раствора субстрата, состоящего из смеси 5%-ного раствора пирогаллола в воде и раствора перекиси водорода (5% в О,1 М фосфатного буфера, рН 6,0). Шарик инкубируют в субстрате при комнатной температуре. Уже по истечении 15 мин наблюдается четкая желтая окраска шарика, которая в течение дальнейших 45 мин переходит в оранжевую. Желтая и оранжевая окраски вызываются образующимся на пирогаллоле вследствие энэиматической реакции пурпурогаллином, который в месте его образования (т.е. на поверхности шарика) выделяется в нерастворенном виде.

Сравнительные опыты. Трипсин, рибо- нуклеаза и пенициллиновая амидаза фиксировались на следующих носителях:

I- продукте Г-Гель-70 (сополимере на основе глицидилметакрилата и эти- ленгликольдиметакрилата), полученном от группы чехословацких исследователей под руководством профессора Швеча;

II- бисерном полимере на основе N,N - метилен-бис-(метакриламида), метакрил- амида, метакриловой кислоты, глицидилметакрилата и простого аллилглицидило- вого эфира в весовом соотношении

39,1:18,6:3,3:19,5:19,5 (полученном согласно примеру 2 выложенной заявки ФРГ N 2722751); III - полимерном латексе примера 4.

Опыты проводят следующим образом.

Опыт А. Фиксация трипсина.

240 мг трипсина (от крупного рогатого скота, активность 3,5 U/мг)

растворяют в 4 мл О,1М натриево-фос- фатного буфера с температурой 8еС и рН 8,6 и добавляют к 1000 мг указанных полимеров I, II и III (поли- мер III применялся в виде латекса) . Смесь размешивают, отстаивают при 23 С в течение 72 ч, последовательно промывают 2 раза 1М хлористого натри и 2 раза 0,05 И фосфатного буфера с рН 7,5 и затем определяют энзима- тическую активность U/r влажного продукта (в мкмоль гидролизованного субстрата/мин) путем щелочнометрическо- го титрования при 37 С и рН 7,5 (БАЭЭ в качестве субстрата) или рН 8,0 (казеин в качестве субстрата).

При этом получены следующие результаты: 22,0 и 2,4 при использовании полимера I, 194 и 11 при исполь- зовании полимера II и 276 и 28,5 при использовании полимера III (в виде латекса).

Опыт Б. Фиксация рибонуклеазы.

50 мг рибонуклеазы (5 раз крист., высокочистая, из сыворотки) растворяют в 2,0 мл 0,2 м гидрогенфосфата натрия при комнатной температуре и добавляют к 250 мг указанных полименость U/г влажного продукта (в мкмоль гидролизованного субстрата/мин) с применением калиевой соли пенициллина G в качестве субстрата.

При этом получены следующие результаты: 3,1 при использовании полимера I, 21/ при использовании полимера II и 234 при использовании полимера III (в виде латекса).

Опыт Г. Повторяют опыт А с той разницей, что трипсин подвергают аци- лированию хлорангидридом акриловой кислоты и последующей сополимеризации с акриламидом в условиях примера 1 авт. св. № 545648. Активность получаемого при этом сополимера ацилиро- ванного трипсина с акриламидом составляет 212 и 15,8 U/г соответственно

Опыт Д. Повторяют пример 29 с той разницей, что используют шарик, покрытый продуктом Г-Гель-70 и бисерным полимером.

При этом в обоих случаях наблюдается только слабо-желтоватое окрашивание шарика.

Результаты сравнительных опытов свидетельствуют о том, что предлагаемый способ позволяет повысить каче

Изобретение относится к медицине, в частности к способу получения иммобилизованного фермента. Цель изобретения - повышение удельной активности фермента. Для этого фермент, Iсодержащий нуклеофильные группы, под (вергают взаимодействию с латексом сополимера на основе мономеров, выбранных из группы, содержащей метил- метакрилат, бутилакрилат, метакрил- амид, изобутилметакрилат, этилметак- рилат, оксиэтилметилакрилат, этил- акрилат, и мономеров, выбранных из группы, содержащей этиленгликоль- диметакрилат, глицидилметакрилат, метакролеин, метакрилат N-оксисук- цинимида, сложный N-оксисукцинимидный эфир 6-метакрилоиламиногексановой кислоты, продукт присоединения сложного 2-оксиэтилового эфира акриловой кислоты к 1,6-гексадиизотиоцианату, при массовом соотношении фермента и сополимера, равном (1:1)-(1:330). 6 табл. W

35

40

ров 1, II и III (полимер III примени- зо ство фиксации, благодаря чему содер- ют в виде латекса) . Затем смесь размешивают и отстаивают при 23°С в течение 72 ч. Далее смесь последовательно промывают 5 раз 1М хлористого натрия и 2 раза 0,05 М фосфатного буфера с рН /,5, после чего определяют энзиматическую активность U/r влажного продукта (в мкмоль гидро- лнзованного субстрата/мин) путем ще- лочнометрического титрирования при 37°С и рН 7,5 (рибонуклеиновая кислота в качестве субстрата).

При этом получены следующие результаты: 9,4 при использовании полимера I, 94 при использовании полимера II и 105 при использовании полимера-Ill (в виде латекса).

Опыт В. Фиксация пеницшшиновой амидазы.

60 г энзима (E.coli, активность 23,6 U/мг) растворяют в 2,0 мл О, 1М натриево-фосфатного буфера с рН 8,0 и добавляют к 500 мг указанных полимеров I, II и III (полимер III применяют в виде латекса). Смесь разменивают, отстаивают при 23 С в течение 72 ч и 2 раза промывают 0,05 М натрнево-фосфатного буфера с рН 7,5. Затем определяют энзиматическую активжащее нуклеофильные группы вещество проявляет повышенную активность. Формула изобретения

Способ получения иммобилизованного фермента путем контактирования фермента, содержащего нуклеофильные группы, с сополимером акриловых эфи- ров и глицидилметакрилата, отличаю щ и и с я тем, что, с целью повышения удельной активности иммобилизованного фермента, в качестве акрилового сополимера используют латекс сополимера на основе мономеров, выбранных из группы, состоящей из 45 метилметакрилата, бутилакрилата, метакриламида, изобутилметакрилата, этштметакрилата, оксиэтилметакрила- Та, этилакрилата, и мономеров, выбран ных из группы, состоящей из этилен- гликольдиметакрилата, глицицилмотак- рилата, метакролеина, метякрилата N-оксисукцинимида, сложного N-окси- сукцинимидного эфира 6-метакрилоил - аминогексановой кислоты, продукта присоединения сложного 2-окси-этилово- го эфира акриловой кислоты к 1,6-гек- садиизотиоцианату при массовом соот- .ношении фермента и сополимера 1:1- 1:330.

50

55

ство фиксации, благодаря чему содер-

жащее нуклеофильные группы вещество проявляет повышенную активность. Формула изобретения

Способ получения иммобилизованного фермента путем контактирования фермента, содержащего нуклеофильные группы, с сополимером акриловых эфи- ров и глицидилметакрилата, отличаю щ и и с я тем, что, с целью повышения удельной активности иммобилизованного фермента, в качестве акрилового сополимера используют латекс сополимера на основе мономеров, выбранных из группы, состоящей из метилметакрилата, бутилакрилата, метакриламида, изобутилметакрилата, этштметакрилата, оксиэтилметакрила- Та, этилакрилата, и мономеров, выбранных из группы, состоящей из этилен- гликольдиметакрилата, глицицилмотак- рилата, метакролеина, метякрилата N-оксисукцинимида, сложного N-окси- сукцинимидного эфира 6-метакрилоил - аминогексановой кислоты, продукта присоединения сложного 2-окси-этилово- го эфира акриловой кислоты к 1,6-гек- садиизотиоцианату при массовом соот- .ношении фермента и сополимера 1:1- 1:330.

I J

III соответствует 1 мкмоль/мин (по начальной скорости).

Таблица

Активность определена каждый раз при третьем применении .

1655301

Таблица 1

1ч

1655101

Таблица4

Применение Активность, Выход актив- U/r навески ности иммо- влажного билизован- продукта кого продукта, %

Первое 42,7 4,06 Второе 4., О 4,0 Третье 41,6 3,96

Таблица5

Применение Активность, Выход актив- 11/г навески ности иммо- влажного про- билизован- дукта ного продукта, %

Первое68,55,12 Второе61,84,62 Третье61,84,62 Четвертое61,04,56

Таблицаб

Применение Активность, Выход ак- U/r влажного тивности продукта иммобили- зованного продукта, %

Первое11891

Второе6685

Третье5588

Четвертое5380

При 3 7°С с использованием калиевой соли 2%-ного пенициллина.