Способ получения производных 4-уреидооксазафосфоринов Советский патент 1988 года по МПК C07F9/6584 A61K31/675 

Изобретение относится к способу получения новых производных 4-уреидо- оксазафосфоринов общей формулы 1

Г /в.

Т5зИ-С /Ti-ЛгН Н в

-ч. (

где при R, и R,

/ Kii

представляющим собой 2-хлорэтил, R, R4

и Rj водород, R водород, алкильньш остаток С,-С ,4 цик- логексил, фе -111Л, бензоил, нафтил, флуоренил, 9-оксо- флуоренил, фениль-« ньй остаток, заме ценный на один или два атома галогена, С,-С 4 -алкильную группу, -алкок сильную, нитро, три- фторметильную, суль- фамсильную группу, или -алкиль- ньй остаток 5 замещен- ньй на хлор, С1 С - карбалкоксильную, фенильную и/или карбоксильную группу или на группу

-роСсНз),,,,

R и Rj имеют указанные значения, группа NR j.R представляет собой пипери .

;диновое кольцо,

ли при R, представляющем собой 2 хлорэтил или 2-метил- сульфонатоэтил, R -водород, метил, Rg 2-хлор- этил или 2-метш1сульфо. натоэтилэ R, Rj- и Rg - водород, причем оба R и R. не могут быть.2- метидсульфонатоэтилом, ли при R, и R,, представляющими

собой 2-хлорэтмл, RJ - 2-хлорэтил, R, Ry и Rg- водород, или водо- род, R4 -метил, R j. - водород, Re - водород или.бензил, или R 3 и R ( - водоли R

1

R

1

10

5

0

5

0

35

40

45

50

55

род, RJ- - метил, R - метил или фенил, или их солей с основаниями, в слу чае, когда Rg в соединении формулы I содержит карбоксильную группу,

которые обладают цитостатической активностью, В силу указанных свойств соединения формулы I могут найти применение в медицинской практике для лечения злокачественных заболеваний.

Цель изобретения - разработка способа получения указанных производных 4-уреидооксафосфоринов, которые обладают высокой цитостатической активностью и повышенной стабиль - костью.

На чертеже представлена схема осуществления способа по примеру 1.

П р. и м е р 1. 1-Окси-1-{ 2- бис- (2-хлорэтил)амино -2-оксотетрагидро- 2Н-1,3,2-оксазафосдорин-4-илJ-мочевина.

15 г (54 ммоль) 4-оксициклофосфа- мида (т.а. (2-хлорэтил)-амино - 4-окситетрагидро-2Н, 1, 3, 2-оксаза- фосфорин-2-оксида) и 4,4 г (58 ммоль) оксимочевины растворяют в 70 мл ди- метилформамида (ДМФ), раствор подг . кисляют трихлоруксусной кислотой . (рН 3-4) и выдерживают в течение 20 ч в холодильнике при О С. Затем кристаллическую массу разбавляют 70 мл этилового эфира уксусной кислоты, а через 2 ч продукт отфильтро- вьшают, промывают, сушат и перекрис- таллизовывают из метилового спирта Выход 11,3 г (62% от теоретически рассчитанного значения) цис-формы. Т. пл. 139-143 С (разл.).

Пример 2. 1-Окси-1- 2- бис- (2-хлорэтшт)-амино|-2-оксотетрагидро«J«ч

2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-4-ил|-мочевина, тщс-форма.

1,1 г (4,0 ммоль) 4-оксициклофос- фамида растворяют в метиловом спирте, раствор смешивают со следами трихлоруксусной кислоты, выдерживают в течение ночи при -25 С, затем метиловый спирт осторожно отгоняют, остаток растворяют в небольшом количестве хлористого метилена, эаствор сушат и упаривают, в результате чего получают 1,2 г 4-метоксйциклофосфамида - (т.е. (2-хлорэтил)-аминЬ -4метокситетрагидро-2Н, 1, 3, 2-оксаза- фосфорин-2-оксида). Непосредственно после этого 1,2 г 4-метоксициклофос- фамида и 304 мг оксимочевины растворяют в 3 мл даФ, после чего раствор вьщерживают в течение 20 ч при -25°С в холодильнике. Кристаллическую массу разбавляют 3 мл этилового эфира v уксусной кислоты, продукт отфильтро Бывают, промывают, сушат и перекри- сталлизовьшают из метилового спирта. Выход 670 мг (50% от теоретически рассчитанного значения) такого же проуме, в результате чего получают 22 г маслообразного вещества. После растворения в смеси этилового эфира уксусной кислоты и метилового спирта в кристаллической форме вьзделяют 4,2 г продукта (т. пл. 106-110 С). Маточный раствор хроматографируют на заполненной силикагелем колонке при применении в качестве элюирующего средства смеси хлороформа и метилового спирта (10:1). После чего полученное вещество перекристаллизовывают совместно с первым кристаллическим

Изобретение касается фосфорорга- нических соединений, в частности способа получения производных 4-уреидо- оксазафосфоринов (УФП) общей формулы XZ, где X - группа формулы -CH-NRj-P(0)(NR,Ri)-0-CHR4-CH,i; Z - группа формулы -N(OH)-C(0)-NRjR6; а) при R и R - 2-клорэтил; R, R, Rg -Н, С, -С 4 злкш1, цикло- гексил, фенил (он может быть моно-или дизамещен галоидом, С -С 4 -алкилом, С -С4-алкоксш1ОМ, N0,, CF, сульфа- моильной группой), бензоил, нафтил, флуоренил, 9-оксофлуоренш1, алкил (он замещен С1, С4-С,-карбал- коксилом, и/или С(0)ОН или группой: Р(СНз)аО; б) при указано; группа NRjRfc- ппперидил; в) при R, и 2-ХЛОРЭТШ1, 2-метилсульфонатоэтил; , CHj; , причем R, и R, одновременно 2-метилсульфонато этилу; г) при R,, 2-хлорэтил; RJ- 2-хлорэтил; R4-R6-H; или Rj-H; Rg-H или бензил; или R-, и , R5--CH,; Rg-CHJИЛй , или их солей с основанияг-ш (когда (O)OH), обладаюЕщх цйтостатичес- кой активностью, что может быть использовано в медицине для лечения злокачественных заболеваний. Цель изобретения - создание новых более активных и стабильных веществ указанного класса. Процесс ведут реакцией соединений общих формул XOY и HZ, где X и Z указаны, Y - Н, СН,, ., в присутствии при необходимости катализатора CF3C(0)OH в среде инертного растворителя при (-25) - (+20)С. Целевой продукт вьщеляют в свободном виде или в виде соли с основанием. Новые УФП обладают активностью в отношении асцитовой саркомы Иосида АН 13 (эффективная доза ЕДу .0,2- 100 мг/кг). Кроме того , в отношении опухолей они обладают канцеротокси- ческой активностью, такой же как у циклофосфамида, но без использования ферментативного активирования. Токсичность новых УФП в 4 раза меньше, чем у циклофосфамида, что значительно расширяет область их терапевтического применения. 1 ил., 5 табл. с S СО 4 00 СП СП СП) О4

дукта, что и в примере 1.15 продуктом из смеси этилового эфира

Пример 3. 1-Окси-1-Г2- бис- уксусной кислоты и метилового спирта. (2-хлорэтил)-аминоД-2-оксотетрагидро- 2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-4-ш1 -мочевина, транс-форма.

16 г (58 ммоль) 4-оксициклофосфа- 20 МИДа и 5,2 г (68 ммоль) оксимочевины растворяют в 160 МП воды, раствор подкисляют трихлоруксусной кислотой (рН 3-4) и в течение 20 ч выдерживают в холодильнике при О С. Затем

Выход 7,0 г(35% от теоретически рассчитанного значения). Т. гш. 115- (разл.).

Пример 5. 3-Бензил- 1-окси- 1-|2- бис-(2-хлорэтил)-аминоЗ-2-оксо тетраг1Щро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин -мочевина

К 900 мг (3,25 ммоль) 4-оксицикло 25 фосфамида в 1 мл хлористого метилена прибавляют 540 мг (3,25 ммоль) 3-бен : зил-1-оксимочевины в 40 мл ацетона и каталитическое количество трихло- руксусной кислоты. Смесь вьщерживают 30,в течение ночи при -25 С. Затем кристаллический продукт отфильтровывают промывают ацетоном и диэтиповым эфиром и перекристаллизовывают из этило вого эфира уксусной кислоты. Выход

К 900 мг (3,25 ммоль) 4-оксицикло- 25 фосфамида в 1 мл хлористого метилена прибавляют 540 мг (3,25 ммоль) 3-бен- : зил-1-оксимочевины в 40 мл ацетона и каталитическое количество трихло- руксусной кислоты. Смесь вьщерживают 30,в течение ночи при -25 С. Затем кристаллический продукт отфильтровывают, промывают ацетоном и диэтиповым эфиром и перекристаллизовывают из этилового эфира уксусной кислоты. Выход

кристаллическую массу отфильтровывают, промьшают водой, сушат в высоком вакууме над пятиокисью фосфора, после чего продукт перекристаллизовывают из смеси метилового спирта и хлороформа. Выход 12,7 г (65% от теоретически рассчитанного значения) I транс-формы продукта, указанного в примере 1. Т. пл. 148 С (разл.).

П р и м е р 4. 1-Окси-1-{3-(2- gg 500 мг (40% от теоретически рассчи- хлорэтил)(2 -хлорэтш1), танного значения). Т. пл. 122-123 с 2-оксотетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксаза (разл.). фосфорин-4-ил}-мочевина.Пример 6. З-Со-Бромфенил)- окси-1 - 2- бис- ( 2-хлорэтнл) -аминоТ -2- 40 оксотетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксазафос- форин-4-Ш1|-мочевина.

550 мг (2 ммоль) 4-оксш1Иклофосфа- мида в 10 МП ацетона смешивают с 460 мг З-о-бромфенил-1-оксимочевины 45 и каталитическим количеством трихлор- уксусной кислоты, после чего смесь выдерживают при -25°С. Через 2 сут кристаллическое вещество отфильтровыва ют и перекристаллизовьгоают его из ный раствор разбавляют двукра тным ко- 50 Выход 320 мг (32% от теоре- личеством воды. Непосредственно после тически рассчитанного значения). Т. этого 4 раза производят экстрагирова- пл. 110-111 С (разл.). ние смесью этилового эфира уксусной Примеры7-47. При приме- кислоты и метилового спирта (10:1), нении в качестве исходных веществ Со- причем каждый раз применяют по 300 мл 55 ответствующих 4-окситетрагидро-2Н-1, смеси. Объединенные растворы продукта 3, 2-оксазафосфорин-2-оксидов анало- в этиловом эфире уксуной кислоты два гичным способом получают указанные раза промывают водой, сушат над серг в табл. 1 другие 4-уреидоокси-произ- нокислым натрием и упаривают в ваку- водные общей формулы.

20 г (50 ммоль) 4-окситетрафосфа- мида (т.е. 3-(2-хлорэтш1)-2-{ бис-2- хлорэтил)-амино -4-окситетрагидро- 2H-t, 3, 2-оксазафосфорин-2-оксида) и 5,3 г (70 ммоль) оксимочевины растворяют в 100 мл диметилформамида, после чего раствор охлаждают до -15 С. Затем раствор подкисляют трихлоруксусной кислотой (рНЗ-4) ив течение 5 ч. перемешивают при . После вьщерж- ки в течение ночи при О С реакцион-ч

уксусной кислоты и метилового спирта.

Выход 7,0 г(35% от теоретически рассчитанного значения). Т. гш. 115- (разл.).

Пример 5. 3-Бензил- 1-окси- 1-|2- бис-(2-хлорэтил)-аминоЗ-2-оксо- тетраг1Щро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин- -мочевина

К 900 мг (3,25 ммоль) 4-оксицикло- фосфамида в 1 мл хлористого метилена прибавляют 540 мг (3,25 ммоль) 3-бен- зил-1-оксимочевины в 40 мл ацетона и каталитическое количество трихло- руксусной кислоты. Смесь вьщерживают в течение ночи при -25 С. Затем криталлический продукт отфильтровывают, промывают ацетоном и диэтиповым эфиром и перекристаллизовывают из этилового эфира уксусной кислоты. Выход

500 мг (40% от теоретически рассчи- танного значения). Т. пл. 122-123 с (разл.). Пример 6. З-Со-Бромфенил)- 51435156 ,6

Пример 48. Соль З-окси-Гз ют из ацетона с небольшой добавкой ме- (2-хлорэтил)-аминоЗ-2-оксотет тилового спирта. Выход: 3,1 г (44% 1|)агидро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-4- 1 Уреидо1-уксусной кислоты цикло- j- :| ексил амина.

i 3-Оксиуреидоуксусная кислота, I 56,5 г (0,28 моль) гидрохлорида |эензилового эфира глицина суспендируют в 300 мл толуола и при перемешива- о примером 48 циклогексиламмонийная НИИ и температуре в бане 140°С в течение 2 ч вводят в суспензию сухой газообразный фосген. После этого реакционную смесь упаривают в вакууме, а полученный остаток перегоняют в вы- 15 ход 600 мг (76% от теоретически рас соком вакууме. Выход 51 г (95% от считанного значения). T.mi. около теоретически рассчитанного значения) бензилизоцианатоацетата, т,кип. 100- 102°С/6,б5 бар,

К 28,7 г (0,15 моль) бензилизоцианатоацетата в 50 мл диоксана при перемешивании и временном охлаждении прибавляют по каплям раствор 6,6 г

от теоретически рассчитанного значе - ния). Т.пл. ЮУ-ЮВ С.

Пример 49. Получение кислоты из циклогексилам& онийной соли.

1 г (2 ммоль) конечного соединения, полученного в соответствии с :

соль), растворяют в 20 мл воды, раствор пропускают через сильно кислотный катионообменник. После чего элюат сушат вымораживанием в вакууме. Вы20

(0,2 моль) гидроксиламина в 200 мл

(разл.). Пример вой соли.

5,4 г (40 ммоль) З-оксиуреидоуксу ной кислоты в 30 мл воды смешивают с раствором 15,3 г (50 ммоль) 4-зтокси- циклофосфамида в 60 мл ацетона при

охлаждении. Смесь выдерживают в тедиоксана. После дополшстельного пере- 25 чение 1 сут при 4 С, а затем разбавляют ее 60 мл ацетона, нейтрализутот прибавлением 20 мл 2н.раствора гидроокиси натрия и после вьщерживания в течение 2 сут при продукта отВымешивания в течение 1 ч при комнат- I ной температуре содержимое реакцион него сосуда упаривают в вакууме, а остаток перекристаллизовывают из этилового эфира уксусной кислоты. Выход 30 фильтровывают, промывают сушат. 28,1 г (83,6% от теоретически рассчи- ход 5,7 г (34% от теоретически рас- танного значения) бензил-З-оксиуреи- считанного значения). Т.пл. около доацетата. Т.пл. 113-120°С. (разл.).

22,4 г (0,1 моль) бензйл-3-оксиу- Пример 51. Получение калие- реидоацетата в 300 мл метилового спир-з5 ° соли.

та смешивают с 5 г палладия на угле ; 5,4 г (40 ммоль)з-оксиуреидоуксус- и производят гидрирование на приборе для встряхивания. Приблизительно через 20 мин поглощение соответствуюной кислоты в 30 мл Ё1оды смешивают при охлаждении с раствором 15,3 г (50 ммоль) 4-этоксициклофосфамида в

щего количества водорода заканчивает- 40 60 мл ацетона. Смесь вьщерживают в

ся. Катализатор отфильтровывают, -

фильтрат упариваю,т в вакууме, после чего твердый остаток перекристаллизовывают из диоксана. Выход 9,8 г (73%

течение 1 сут при 4 С, после чего нейтрализуют прибавлением 20 мл 2 раствора гидроокиси калйя. Затем смесь упаривают, смешивают остаток

от теоретически рассчитанного значе- 45 ° 150 мл ацетона и 50 мл диэтилово- ния) 3-оксиуреидоуксусной кислоты. го эфира до помутнения. После выдер- Т.пл. 135°С.живания смеси в течение 3 сут -25 С

2,4 г (19 ммоль) 3-оксиуреидоуксус- продукт отфильтровьшают, промывают и ной кислоты в 10 мл воды и 25 мл

50

ацетона смешивают с 6,1 г (2 ммоль) 4-оксициклофосфамида, после чего реакционную смесь вьздерживают в течение ночи при -25 с. Непосредственно после этого к реакционной смеси прибавсушат. Выход 4,2 г (24% от теорвти -- чески рассчитанного значения). Т.пл. около Сразл.),

Пример 52. Получение кальциевой соли.

5,4 г (40ммс)ль) З-оксиурейдоуксус-.

ляют 25 мл ацетона и 1,8 г (18 ммоль) 55 ° кислоты в 30 мл воды смешив т С циклогексиламика в 10 мл ацетона, раствором 15,3 г 4-этоксициклофосфамида в 60 мл ацетона. Смесь выдерживают в течение 1 сут при 4 с, после

После вьщержки смеси в течение 2 ч производят фильтрование и отфильтрованный продукт перекристаллизовывачего прибавляют к ней 1,5 г (20 моль)

ют из ацетона с небольшой добавкой ме- тилового спирта. Выход: 3,1 г (44%

примером 48 циклогексиламмонийная ход 600 мг (76% от теоретически рас считанного значения). T.mi. около

от теоретически рассчитанного значе - ния). Т.пл. ЮУ-ЮВ С.

Пример 49. Получение кислоты из циклогексилам& онийной соли.

1 г (2 ммоль) конечного соединения, полученного в соответствии с :

примером 48 циклогексиламмонийная ход 600 мг (76% от теоретически рас считанного значения). T.mi. около

соль), растворяют в 20 мл воды, раствор пропускают через сильно кислотный катионообменник. После чего элюат сушат вымораживанием в вакууме. Выпримером 48 циклогексиламмонийная ход 600 мг (76% от теоретически рас считанного значения). T.mi. около

(разл.). Пример вой соли.

5,4 г (40 ммоль) З-оксиуреидоуксу ной кислоты в 30 мл воды смешивают с раствором 15,3 г (50 ммоль) 4-зтокси- циклофосфамида в 60 мл ацетона при

охлаждении. Смесь выдерживают в теокиси натрия и после вьщерживания в течение 2 сут при продукта отВыфильтровывают, промывают сушат. ход 5,7 г (34% от теоретически рас- считанного значения). Т.пл. около (разл.).

5,4 г (40 ммоль)з-оксиуреидоуксус

ной кислоты в 30 мл Ё1оды смешивают при охлаждении с раствором 15,3 г (50 ммоль) 4-этоксициклофосфамида в

-

течение 1 сут при 4 С, после чего ее нейтрализуют прибавлением 20 мл 2 и, раствора гидроокиси калйя. Затем смесь упаривают, смешивают остаток .

продукт отфильтровьшают, промывают и

сушат. Выход 4,2 г (24% от теорвти -- чески рассчитанного значения). Т.пл. около Сразл.),

Пример 52. Получение кальциевой соли.

5,4 г (40ммс)ль) З-оксиурейдоуксус

° кислоты в 30 мл воды смешив т С раствором 15,3 г 4-этоксициклофосфамида в 60 мл ацетона. Смесь выдерживают в течение 1 сут при 4 с, после

чего прибавляют к ней 1,5 г (20 моль)

(C1-CH2-CH2)2N

о

Получение осуществляют по аналогии с описанным в примере 48 из 4,4 г (30 ммоль) 3-( 3-оксиуреидо)-пропио- новой кислоты и 10 г (36 ммолей) 4 оксициклофосфамида. Выход 3,4 г (22,4% от теоретически рассчитанного значения). Т.пл. Пб-ПУ С.

ре 48 а при применении 41 г (0,19 ,моль) гидрохлорида бензилового эфира 30 бета-аланина.

Пример 55. Сальо(.-2-|з-окси- 2- бис-(2-хлорэтил)-амино -2 -оксо- тетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфоринИсходную пропионовую кислоту полу- 35 4-Ш1 -уреидоу-3-фенш1пропионовой кис- чают по аналогии с описанным в приме- лоты и циклогексиламина

(С1-СН2-СН2)2Нч .

хР 0

NCO-NH-CH-C02HX Н2М-СбН|з

. г, U

О-/

Получение осуществляют по аналогии с описанным в примере 48 б из 2,7 г (12 ммоль) «:,-2-(3-oкcиypeндo)- 3-фeнилпpoпиoнoвoй кислоты и 4 г (14 ммоль) 4-оксициклофосфамида. Выход 3,2 г (38% от теоретически рассчитанного значения). Т.пл. 128°С.

Исходную пропионовую кислоту получают п(з аналогии с опи:санным в при

СН2

/N. /I СН, Р 0 0

-N

-CO-NH-( CH2)2-C02HxH2NCeH,3

ре 48 а при применении 41 г (0,19 ,моль) гидрохлорида бензилового эфира 30 бета-аланина.

Пример 55. Сальо(.-2-|з-окси- 2- бис-(2-хлорэтил)-амино -2 -оксо- тетрагидро-2Н-1, 3, 2-оксазафосфоринОН

Nмере 48 а при применении 46,7 г (0,16 моль) гидрохлорида бензилового эфира oL -фенилаланина.

Пример 56. 1-окси-1 2-(Ы- 50 2-хлорэтил-Ы-метиламино)(метил- сульфоната)-зтил}-2-оксотетраг1Здро- 2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-4-Ш1|х/г тютэммя

мочевина

I 0

CH2-CH2-0-S02CH3 -N-V-N-CO-NH2

ОН

91

Получение этого соединения и сое- ,|;ичения, соответствующего примеру i)8, осуществляют при использовании : i,4 г (8,8 ммоль)2-(Н 2-хлорэтил-Ы- «етилам11но) -4-окси-З- 2- (метилсульфо- IwaTo)3Ti-mJ-тетрагидро-2Н-1 , 3, 2- |((ксазафосфорин-2-оксида и 0,68 г 1(9 ммоль) оксимочевины. Выход 0,87 г (15% от теоретически рассчитанного значения). Соединение представляет собой маслообразное вещество. Значение Rf 0,45, элюирующее средство: смесь хлороформа и метилового спирта в соотношении 10:1 (2-кратное элюиро- ванне). Проявление осуществляют с помощью иода.

Пример 57. Получение диэти- ламмонийной соли.

По аналогии с описанным в примере 51, 5,4 г (40 ммоль) З-оксиуреидоук сусной кислоты вводят во взаимодейст(ClCH2CH2)2l

Q Пример 59. Циклогексиламин - ная соль 3- З- окси-3- 2- бис-(2- хлорэтил)аминоЗ-2-оксотетрагидроон

(СК--СН2-СН2)2 /NH-- N-CO-NH-CH2-C02HxH2N-C5H,a

I ±

О

Mti- О-

2,4 г (18 ммоль)-3-окси-уреидоуксусной кислоты в 10 мл воды и 25 мл ацетона при 20 С смешивают с 6,1 г (20 ммолъ)4-оксициклофосфамида и следами трихлоруксусной кислоты. Оставляют стоять в течение 3ч, охлаждают до Ц О С и добавляют 25 мл ацетона и 1,8 г (18 ммоль) циклогексиламина в 10 мл ацетона. После стояния в тече ние 4 ч отсасывают циклогексиламин ную соль и перекристаллизуют из небольшого количества метанола. Выход 2 г. Т.пл. 107-108 с.

Структура полученных соединений, соответствующих формуле I, вытекает из данных следующих анализов.

Проведен рентгеновский структурный анализ соединения из примера 1 (соот56 О

вне с 15,3 г (50 ммоль) 4-этоксицик- лофосфамида, затем производят нейтрализацию реакционной смеси и дальней- шую обработку. Выход 4,3 г (23% от теоретически рассчитанного значения). Т.пл. 60°С (разл.).

Пример 58. Получение соли с ПИПеразином.

По аналогии с описанным в примере 51, 5,4 г (40 ммоль) 3-оксиуреидо- уксусной кислоты вводят во взаимодей. ствие с 15,3 г (50ммоль) 4-этоксицикло фосфамида, затем производят нейтрализацию реакционной смеси пиперазином и дальнейшую обработку. Выход 6,1 г (35% от теоретически рассчитанного значения). Т.пл. 72 С (разл.)

Структура и данные анализа солей,- полученных в примерах 57 и 78, приведены в табл. 3.

ОН

I

N CO-1 H-CH2-COO®T

2Н-1, 3, 2-оксазафосфорин-4-Ш1 1-уреи- доуксусной кислоты.

ветствующая стереограмма прилагается на чертеже). Из этого рентгеновского структурного анализа сле)з;ует, что в

соединении, согласно примеру 1, атом 4 углерода производных оксазафосфори- ной связан с атомом N-l части моче вины (соединение N-l ). Это означает, что данному соединению соответствует

формула I.

Был снят ядерно-магнитный резонансный спектр соединения, согласно при- меру 1, и известного соединения, согласно примеру 46, причем исследовали ядра водорода ( Н) (спектр Н - ЯМР). При этом были выявлены характерные различия в -спектрах обоих соединений (см. табл. 4).

11

Спектры ЯМР были получены в дей- теризованном диметилсульфоксиде. Веществом-эталоном являлся тетраметил- силан ч/тыс. J 2,4 является постоянной соединения, которая показывает в герцах расщепление сигнала 4-Н в результате соединения атома фосфора в позиции 2 с протоном (Н) в атоме 4 углерода производных оксаза- фосфоринов (С-4),

«

В целях синтеза была произведена реакция обмена между 4-гидрок сицикло()2N /NH

Выпи также сняты соответствующие спектры Н - ЯМР других соединений и было проведено сравнение сигналов

Н соединений, согласно примеру 1 и известного соединения.ч,Так как структуры соединений, согласно примеру 1 ,и примеру 46, являются известными, то путем сравнения сигналов Н определяют и структуру других соединений

Было выявлено, что соединения, полученные в соответствии с приведенными примерами конкретного выполнения предлагаемого способа, имеют сравнимые сигналы Н, такие же, как и в соединении, согласно примеру 1, а также структуру, согласно соединению из примера 1, соответствующую формуле 1.

Результаты иследований представителей полученных соединений формулы I, проведенного на характерных фарма- котерапевтических опытных моделях, выражаются в следующем. : Определение летальной дозы при однократном введении (острая токсичность) . Вещества были введены в со- став суспензии траганта и затем инъек- цированы в брюшную полость мужским особям крыс (род Sprague-Dawley), имеющих средйий вес тела 160 г. Максимальная доза составляла 1000 мг/кг Инъекцированные дозы варьировались в соответствии с логарифмическим рядом с коэффициентом 2,15. Наблюдение за подопытными животньми велось в течение 30 дней, картина отравления полностью соответствовала известным симптомам отравления от азотистого

435156

12

g ю

фосфамидом и Ы-гидрокси-Ы, Ы -диме- .тилмочевиной

СНз СНз (HO-N-CO-NH )

в соответствии с примером 46 ,; В спектре Н-ЯМР соединения, согласно примеру 46, не хватает протонных сигналов для гндрокси-групп исходных соединений. Таким образом, известное соединеи1е может иметь только следующую структуру

СНз

/O-N-CO-NH-СНз гн../ I 2 3

СН2

/

СН2

5

0

5

иприта: выпадение волос, воспаление слизистых оболочек, расшатывание зубов, апатия и понос. Смерть наступала большей частью на седьмой день наблюдения.

На основе процентного соотношения летальных исходов и группы доз с помощью метода Миллера и Тейнтера была графически определена средняя летальная доза (летальная доза, приводящая к гибели 50% вредителей), которая приведена в табл. 5,

Химиотерапевтические медицинские опыты ин виво.

Химиотерапевтические опыты на препарате асцитовой саркомы АН 13 Носи- да.

Крысам с 5-7-дневной асцитовой

0 саркомой Иосида вырезали с соблюдение стерильных условий опухолевый асцит (бактериологический контроль). Среднее количество клеток асцита составляло 2x10 кл/мл. Путем добав5 ления раствора Тироде (физиологический раствор для выращивания и консервирования тканей) размер асцита увеличивается до 10 кл/мл. Подопытным животным имплантировали указанного количества (4x10 клеток) в брюшную полость.

У необследов анных животных первоначальная доля указанной опухоли составляет около 90%, средняя продолжи5 тельность летального исхода составляет 8 дней (S + 0,5 d). Через 3 ч после имплантации опухоли в .брюшную полость также вводили опытные вещест - ва.

0

14

13

Каждая подопытная групп состояла |из 6 животных.

I Критерием лечебного, действия явля- |ется выздоровление, которое определяется в течение 90 дней после операции в качестве отсутствия рецидивов и метастазов. После определения процентной доли выздоровления на основе прямых действий дозы с помощью пробирно- го анализа Р. Фишера была вычислена доза, приводящая к выздоровлению половины животных (см. табл. 5, колонку 4) .

Как видно из данных табл. 5, соединения формулы I являются менее токсичными.

Кроме того, вследствие более медленного гидролиза соединения формулы 1 остаются в организме биологически активными более длительное время и отличаются поэтому большей продолжительностью действия по Сравнению с указанными эталонными соединениями.

В сравнении с ранее известным стандартным препаратом, циклофосфами- дом, в случае экспериментальных трансплантированных опухолей крыс соединения формулы I обладают примерно такой же сильной канцеротоксичес- кой активностью. В водном растворе они действуют непосредственно алкилй- рующе, а в опытах in vitro обладают высокой цитотоксичностью, в то врёмя как циклофосфамиду необходимо ферментативное активирование, а опытах in vitro он практически не действует цитотоксично. Острая токсичность предлагаемых соединений приблизитель- но в 4 раза меньше, чем острая токсичность стандартного вещества цикло- фосфамида, причем в результате этого значительно расширяется область тера- певтического применения. Также и в отношении таких органотоксических побочных явлений, как снижение количества лейкоцитов и подавление невосприимчивости, пред-чагаемые соединения обладают существенными преимуществами по сравнению со стандартным препаратом циклофосфамидом.

Формула изобретен и-

Способ получения производных 4- уреидооксазафосфоринов общей формулы I .

юfl

вГ

;N

-/

г14

НО

I

о

M-C-N

ч

/к, н,

в

V н

где при R и R

5

0

5

0

5

0

5 g

g

-, представляющими собой 2-хлорэтил, R, R4 и Rg- - водород, Rg - водород, алкильный остаток С циклогек- СШ1, фенил, бензоил, нафтил, флуоренил, 9-оксофлуорёнил, фе- нильный остаток, замещенный на один или два атома галогена, С -С - ал- кильную группу, С 4 - алкоксштьную, нитро-трифторметиль- ную, сульфамоильную группу, или С. -С4 алкильный ос-гаток, замещенный на хло1р, С -Сз карбалко-. ксильную фенильную и/или карбоксиль-1 ную группу или на группу -РО(СН), R и Rjj имеют указанные значения, группа NRj.Rg представляет собой пи- перидиновое кольцо;

представляющим собой 2-хлорэтш1 или 2-ме- ; тилсульфонатоэтил, R. - водород, метил; R. - 2 хлорэтил или 2-метш1сульфонатоэтил;

4 5 6 род, причем оба R и

R не могут быть 2- метилсульфонатоэтилом; или при R;, и R, представляющими собой 2-хлорэтил; R - 2-хлорэтил; R, 5- и

или R,,, R

4f

или при

RJводород;

водород; R, метил; Rj.- водород; Rg - водород или бензил;

15

или R

5и R 5 метил

1435156 водород; I, ivg - метил или фенил, или их солей с основаниями, в случае, когда R в

соединении формулы I содержит карбоксильную группу,

личающий,с я тем, что ответствующее производное 4-окси-, 4-метокси-, или 4-этоксиоксаза форина общей формулы II

10

гд

В.

/

1 -СН

-Р,

/

PY

и о-сн/

СНс

RI

де RJ, - 2-ХЛОРЭТШ1 или 2 метилсульфонатОэтил;R - водород, метил, или. 2-хлорэтил;R - водород, 2-ХЛОРЭТШ1, метил

или 2-метилсульфонатоэтш1;

водород или метил;

25

30

R4

Y - водород,

одвергают взаимодействию с соответстующим производным мочевины общей ормулы III

Т а б л и 4-уреидоокси - произво1 ные общей формулы.

6

ридиновое ко

при температуре среде инертного сутствии при нео уксусной кислоты тора с последующи го соединения в

в виде соли с ос

когда в соединен держит карбоксил

:

0 оЧв

16

О

II

MI-C-N

/Tls

В,

56

где

водород или метил; водород, алкильный остаток С 1 С 45 циклогексил, фенил, бензоил, нафтил, флуоренил, 9 - оксофлуоренил, фенильный остаток, замещенный на один или два атома галогена, С -С -алкильную. С, - С -алкоксильную, нитро, трифтор- метильную, сульфамоильную группу , или С, -С4 -алкильный остаток, замещенньш на хлор, С -С -кар- балкоксильную группу, фенильную и/или карбоксильную группу, или на группу -PO(CH)i, или группа

-fj представляет собой пипе 6

ридиновое кольцо,

при температуре от -25 до +20°С в среде инертного растворителя в присутствии при необходимости трифтор- уксусной кислоты в качестве катализатора с последующим вьщелением целевого соединения в свободном виде, или

в виде соли с основанием, в случае.

когда в соединении формулы I держит карбоксильную группу.

Rg соЦ а

:

В примерах 34, 39, 40, 42 вместо т. пл. приведено Rf значение.

1435156

Таблица 2 Структура солей и данные анализа на С, Н, Ы:

Н

Таблица 4 Характерные сигналы н, соединения примера 1 и известного

ОН к N-I 9,19 ч/тысН к N-I

Н к N-З 6,51 ч/тыс

Н к N-З 4,72 ч/тыс

Н к С-45,57 ч/тыс

J 2, Гц

22

он

23

1435156

Т а

24 б л и ц а. 5

Структура известйых эталонных веществ

.,-ам2ч

.

М X / р/

cecHi-CHz

о о

D 7569 R- K-CO-l H

D 75499 5

T -CO- -NH--СН

0-R

СИ

Cl

Cl