Способ получения мукополисахаридов Советский патент 1991 года по МПК C08B37/10 A61K31/725 

Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к получению мукополисахаридов путем деполимеризации гепарина, обладающих биологическими свойствами, что позволяет использовать их для специфического регулирования коагуляции крови.

Целью изобретения является упрощение процесса получения мукополисахаридов и повышение их антикоагулянтной активности.

Пример. Растворяют 60 г гепарина, имеющего отношение показателя Юина- Весслера, характеризующего способность активных продуктов вызывать ингибирование фактора Ха-крови ингибированием антитромбином III (AT III), к показателю, характеризующему способность активных продуктов ингибировать общую коагуляцию крови или плазмы (УСП) (ЮВ/УСП), близкое к 1, и показатель УСП 160 Е/мг, в 3 л дистил- пированной воды при 4°С. Добавляют нитрит натрия в количестве, достаточном для получения 0,05 М раствора (10,35 г; массовое соотношение гепарин:нитрит натрия - 1 0,172), затем рН доводят до 2,5 при помощи чистой соляной кислоты, раствор при 4°С взбалтывают в течение 10 мин. Далее рН доводят до 7,5 при помощи 5 н. раствора соды. Добавлением 5 объемов чистого этао

ОП 00 00

N О

Ы

нопа (15500 мл) продукты реакции осаждают. Образовавшийся осадок извлекают при помощи центрифугирования. Его промывают этанолом и сушат при 60°С под глубоким вакуумом. Собирают 60 г продукта, обладающего следующими характеристиками: показатель УСП 17 Е/мг, показатель ЮВ 240 Е/мг.

В качестве исходного материала используют гепарин, имеющий показатель УСП 165 Е/мг, а отношение ЮВ/УСП порядка 1. Растворяют 3 г гепарина в 150 мл дистиллированной воды при 4°С, затем добавляют 517 мг нитрит натрия в реакционную среду (массовое соотношение гепарин:нитрит натрия 1:0,172). После окончания обработки, проведенной в соответствии с приведенным описанием,извлекают 2,8 г продукта с показателем УСП 24 Е/мг и показателем активности ЮВ 250 Е/мг.

Используют 50 г гепарина с показателем УСП 158 Е/мг и отношением ЮВ/УСП, близким к 1. Указанное количество гепарина растворяют в 2500 мл дистиллированной воды и при 4°С добавляют 8,625 г нитрит натрия (массовое соотношение гепа- рин:нитрит натрия 1:0,172). После завершения обработки получают 46 г продукта, обладающего следующими характеристиками: показатель УСП 13 Е/мг, показатель активности ЮВ 270 Е/мг.

П р и м е р 2. При окружающей температуре растворяют 47 г продукта, полученного в примере 1, в 1200 мл дистиллированной воды. При перемешивании добавляют 7 г боргидрида калия. Перемешивание продолжают в течение 2 ч при окружающей температуре, а затем добавляют в реакционную среду уксусную кислоту для того, чтобы снизить рН до 4,0 и разрушить тем самым не использованный боргидрид калия. Смесь еще перемешивают в течение 30 мин, затем рН увеличивают до 7,5 при помощи 5 н, раствора соды. В реакционную смесь добавляют 5 объемов спирта. Образовавшийся осадок собирают, просушивают, промывают чистым этанолом и сушат под вакуумом при 60°С. Получают 46,5 г продукта, обладающего следующими характеристиками: показатель УСП 17 Е/мг, показатель активности ЮВ 250 Е/мг.

П р и м е р 3. Растворяют 40 г продукта, полученного по примеру 1, в 400 мл дистиллированной воды при окружающей температуре. Значение рН обеспечивают на уровне 8.5 при помощи 5 н. раствора соды, затем добавляют 2 г перманганата калия КМп04,растворенного в 40 мл воды.Реакционную СМРСЬ подвергают перемешинанию в

течение 15ч. В течение этого перемешивания рН смеси постоянно поддерживают на уровне 8,5 при помощи 5н. раствора соды. Через 15ч добавляют 0,2 обьема спирта

(90мл) с тем, чтобы удалить КМп04, который не участвовал в реакции.

Реакционную смесь отстаивают в течение 1 ч. Образовавшийся осадок Мп02 удаляют центрифугированием. Осаждением

0 этанолом извлекают продукты реакции, промывают и сушат. Таким образом получают 35 г продукта, обладающего следующими характеристиками: показатель УСП 12 Е/мг, показатель активности ЮВ 270 Е/мг.

5 Пример 4. Растворяют 3 г гепарина.в 150 мл дистиллированной воды при 4°С. Добавляют 517 мг нитрита натрия для получения 0,05 М раствора. рН устанавливают на значении 2,2 добавлением чистой кислоты

0 HCI и перемешивают раствор при 4°С в течение 10 мин. Затем рН доводят до 7,5 при помощи 5 н. гидроокиси натрия. Добавлением 5 объемов чистого этанола осаждают полученный продукт. Образовавшийся оса5 док отделяют центрифугированием, промывают этанолом и сушат при 60°С под вакуумом. Получают 2,8 г продукта.

Используя те же самые исходные, осуществляют реакцию при рН равном 2,5; 2, 6

0 и 2,75. Выход продукта 2,8 г. Характеристики полученных продуктов сведены в табл. 1. П р и м е р 5. Растворяют 10 г торгового гепарина (соотношение YW/USP около 1; титр USP 160 ед/мг) в 1 ддистиллированной

5 воды при 4°С. Добавляют нитрита натрия NaN02 в количестве, достаточном для получения 0,02 М раствора, т.е. 1,58 г (соотношение гепарина и нитрита натрия 1:0,138), затем доводят рН до 2,5 с помощью чистой

0 соляной кислоты. Перемешивают при 4°С в течение 10 мин и доводят рН до 7,5 с помощью 5 н. щелочи натрия. Путем добавления 5 объемов чистого этанола (т.е. 5 л) осаждают продукты реакции. Рекуперируют

5 осадок центрифугированием, затем промывают чистым этанолом и сушат при 60°С под глубоким вакуумом.

Получают 10 г продукта, имеющего следующие характеристики:

0Титр USP 15 м.е./мг

Титр Юина-Весслера 253 ед/мг Титр АРТТ 11 ед/мг Сравнительные данные по свойствам продуктов, полученных предлагаемым и из5 вестным способами, приведены в табл. 2.

Упрощение процесса достигается за счет получения продуктов, которые непосредственно могут быть использованы в терапевтии без дополнительной очистки.

В известном способе целевой продукт требует очистки с помощью адсорбционной хроматографии.

Формула изобретения 1. Способ получения мукополисахари- дов обработкой гепарина деполимеризую- щим агентом, отличающийся тем, что, целью упрощения процесса и попучения целевого продукта с повышенной антикоагу лянтной активностью, в качестве деполимеризующего агента используют нитрит натрия, а обработку проводят в водной среде в присутствии соляной или уксусной кислоты при рН 2,2-2,75 и массовом

-

10

15

соотношении гепарина и нитрита натрия 1:(0,138-0,172) с последующими нейтрализацией раствора и высаждением целевого продукта этанолом

2.Способ по п.1,отличающийся тем, что целевой продукт дополнительно обрабатывают боргидридом калия при массовом соотношении деполимеризованного гепарина и боргидрида калия 47:7.

3.Способ по п.1,отличающийся тем, что целевой продукт дополнительно обрабатывают перманганатом калия при массовом соотношении деполимеризованного гепарина и перманганата калия 20:1 при рН 8,5.

Таблица

Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, конкретно к получению мукополисахаридов путем деполимеризации гепарина, обладающих биологическими свойствами, что позволяет использовать их для специфического регулирования коагуляции крови. Изобретение позволяет упростить процесс и повысить их антикоэгулянтную активность за счет того, что гепарин обрабатывают нитритом натрия в водной среде в присутствии соляной или уксусной кислоты при рН 2,2-2.75 и массовом соотношении гепарина и нитрита натрия 1 :(0,158-0,172) с последующими нейтрализацией раствора и высаждением целевого продукта этанолом. Целевой продукт может быть дополнительно обработан боргидридом или перманганатом калия при массовом соотношении деполи- меризованного гепарина и боргидрида калия, 47:7 или деполимеризованного гепарина и перманганата калия 20:1 при рН 8,5. 2 з.п. ф-лы, 2 табл. сл

Таблица2