Способ получения биологически активных мукополисахаридов Советский патент 1989 года по МПК C08B37/10 

Изобретение относится к получению биологически активных мукополисахари- дов, способных специфически управлять некоторыми этaпa ш свертывания крови и проявляющих более селективную, чем гепарин, активность по отношению к более ограниченному количеству факторов свертывания крови, например к активированному фактору X или фактору Ха крови, может быть использовано в биологии и медицине.

Целью изобретения является повышение выхода биологически активных му- кополисахаридов при упрощении способа.

Пример1.В15л дистиллированной воды при + 20° С растворяют 1500 г гепарина (10%-ный раствор) с соотнош.нием YT-J/USF около 1 и с титром 1БР, равным 160 ui. Добавляют

51,8 г нитрита натрия, растворенного в 30 М.П дистиллированной воды (0,05 М), и снижают рН до 2,5 с помощью чистой соляной кислоты.

Тогда происходит реакция, за ходом которой следят до установления отсутствия азотистокислых ионов. Через 40 мин определяют через равные промежутки времени наличие или отсутствие азотистокислых ионов в реакционной среде, для чего используют иодкрахмальную бумагу, проводя проверку каждые 5 мин. Через 60 мин реакции азотистая кислота полностью расходуется, и в реакционной смеси не остается больше ионов N0 . Тогда значение рН доводят до 7 с помощью чистой щелочи натрия, а продукты реакции выделяются посредством добавления 31 л чистого этанола (2 объема).

сл

со

00

ел

со

см

Образоваватийся осадок отделяют центрифугированием, промывают этанолом и высушивают в вакууме при 60°С. Получают 1200 г мукополисахаридов (MIIC) со следующими характеристиками Титр USP19 ui/мг

Титр АРТТ1 3 ui/мг

Титр Yin и Wessler 202 u/мг Содержание нитритов/ нитратов А м.д.

Молекулярная масса полученного продукта 2000-8000. Содержание цепей имеющих сродство к ATIII, составляет 20%. Выход продукта 80%. Продукт содержит 3% цепей гексасахаридов, 2% тетрасахаридов, 0% диcaxap щoв.

Пример 2. Проводя процесс по методике примера 1, исходя из 10%- ного раствора гепарина (100 г/л), получают MIIC с соотношениями YW/USP, в зависимости от концентрации введенного в реакцию NaNO. Результпты приведены в таблице.

Предпочтительные MIIC соответствуют МПС, полученным с использованием 0,03-0,07 М NaNo.

Молекулярная масса и выход получаемого продукта аналогичны примеру 1.

Пример 3. В Юл дистиллированной воды при температуре окружающей среды (15°С) растворяют 1000 г годного для инъекций гепарина с титром USP 170 ш/мг и с титром YW

0

5

0

5

0

Средний молекулярньш вес менее 6000.

Процентное содержание веп1ества с молекулярным весом, превосходящим 10000, менее 1%.

П р и м е р 4. Используют реакционную смесь, содержащую в 125 мл дистиллированную воду, 10 г гепарина (8мас.%) и 380 мг (0,055 М); нитрита натрия. рН снижают до 2,95 за счет добавления чистой соляной кислоты и смесь перемешивают в течение примерно 45 мин.

Получают продукт деполимеризации с выходом 80% титра USP 34 ui на мг и YW 219 ед. на мг.

П р и м е р 5. Осуществляют аналогично примеру 4, но Используют 15 г гепарина (12,0 мас.%). Получают де- полимеризованную смесь с аналогичными характеристиками полученных продуктов :

ШР32 м.е./мг.

YW226 ед./мг.

Выход продукта 80%.

Изобретение позволяет получить биолог ическп активные мукополисахари- ды с выходом 80% при содержании реактивных цепей с 6,4 и 2 звеньями сахара до 5% (70% по известному способу) и цепей, имею1чих сродство к ATII1 до 20% (2% по известному сгюсобу). Упрощеьп1е способа по сравнению с известным обусловлено снижением числа

Изобретение относится к получению биологически активных мукополисахаридов деполимеризацией гепарина, применяемых в биологии и медицине. Изобретение позволяет повысить выход целевого продукта до 80% и упростить способ его получения. Деполимеризацию гепарина осуществляют в водной среде при концентрации гепарина 8-12 мас.% и температуре 15-20°С в присутствии в реакционной среде 0,03-0,07 моль нитрита натрия. Предварительно вводят в реакционную смесь соляную кислоту до PH 2,5-2,95, а по окончании деполимеризации доводят рН реакционной смеси до 7 и осаждают целевой продукт. 1 табл.

160 и/мг. Добавляют 38 г нитрита нат- 35 стадий и отсутствием контроля за

рия (конечная молярная концентрация 0,055 М), растворенного в 200 мл воды. Значение рН сразу снижают до 2,5 используя соляную кислоту. Реакцию контролируют, как в примере 1, через регулярные промежутки времени (5-10 мин). Примерно через 30 мин ионы N0 больше в ,ионной среде не обнар ткиваются. Тогда значение рН доводят до 7 с помощью раствора 5 N едкого натра: продукты реакции выделяют путем добавления 21 л чистого этанола (2 объема). Образовавшийся остаток отделяют центрифугированием, промывают зтанолом и высушивают в вакууме при 60°С, Выход продукта 80% Получан)т 780 г порощка белого цвета со следующими характеристиками:

Титр ШР Титр Yin | Титр АРТТ Сод p.K iHiie нитра Ч ;

We S S1е г

нитритов22

260

10

ui/мг и/мг ui /мг

t- 5 м . д.

0

5

0

5

продолжительностью реакции деполимеризации, уменьшением объемов реакци- oHHoii среды, благодаря повьшенной ,ентрации renapiuia (8-12 мас.% по сравнению с 3,3 мас.%). Формула изобретения

Способ получения биологически активных мукополисахаридов деполимери- запией гепарина в водной среде в присутствии продукта, образуюи1его азотистую кислоту, с последующ|-ш осаждением мукополисахаридов этилопь м спиртом, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повьш1ения выхода биологически активных мукополисахаридов при упрО1цении способа, в качестве продукта, образующего азотистую кислоту. Используют нитрит натрия при концентрации его и реакцрюнной i;pe- де 0,03-0,07 моль и ;ичюли 1рризацш() (и;уще(:твляют по1:,Г вврления в реякци- (0 смесь соп,чн.)1 laii-j OT M по соз515318596

Дания рН 2,5-2,95 при концентрации туре 15-20°С, при этом перед осаж- гепарина 8,0-12,0 мас.% и темпера- дением доводят рН среды до 7,

Концентрация I Отношение титров YW

NaNGj, Мк титрам 1БР МПС

Т

(140/51)2,7

(214/26)В

(250/19)13

(194/12)16

(201/9)22

(132/6,4)19

(110/2)44

Величина соотношения титров