Способ определения токсичности химических веществ Советский патент 1991 года по МПК G01N33/68 

(Л

С

Изобретение относится к медицине, преимущественное применение найдет в биохимии и токсикологии при определении токсичности химических веществ Целью изобретения является ускорение способа и повышение его экономичности за счет снижения количества лабораторных животных Цель достигается тем, что в гомогенате ткани печени лабораторных животных опреде- ляют активность фермента ацилазы (Ы-ацил-Д1 -аминокислота-аминогидролаэы, К.Ф 3.5.1 14) через 2-4 ч после введения животным токсического вещества. О токсоч о- сти вещества гудят по достоверному снижению уровня активности фермента по сравнению с контролем Способ позволяет в два раза ускорить определение токсичности химических веществ

Изобретение относится к медицине, преимущественно применение найдет в биохимии и токсикологии, и может быть использовано для определения токсичности химических веществ

Целью изобретения является ускорение способа и повышение его экономичности

Способ осуществляют следующим образом.

Вводят токсический агент лабораторным животным Делают экспозицию обеспечивающую развитие токсического действия (2-4 ч). Забивают животных, извлекая печень и почки Определяют активность фермента ацилазы (М-ацил-Д -аминокисло- та-аминогидролазы, КФ 3 5 1 14) в тканях печени и почек. Ацилазу тканей определяют по следующей методике К 0,9 мл 0.01 М раствора М-формил-Д1 -метионина в 0,1 М

фосфатном буфере (рН 7,5) добавляют 0 1 мл экстракта ткани Отбирают 0,2 мл из этой инкубационной смеси и добавляют их к 3.0 мл 0,1 М боратного буфера (рН 9,7) (контрольная проба). Через 1 ч инкубации при 37° С отбирают изинкубаци( ной смеси 0,2 мл и добавляют к 3,0 мл 0, i M боратного буфера (рН 9,7) (опытная проба) Затем к контрольной и опытной пробе добавляют по 0,5 мл красящей смеси, состоящей из 0,03%- ного раствора о-фталевого альдегида и 0,01%-ного раствора ft -меркаптоэтанола в 0,1 М боратном буфере (рН 9,7) с последующей спектрофотометрией опытной и контрольной проб при длине волны 340 нм.

Пример 1. Группе беспородных белых мышей (самцов) массой 18-20 г внутрибрю- шинно вводят эндотоксин, выделенный из Salmonella typhtmurium, в дозе 10 мг/кг веса. Контрольной группе параллельно вводят

О

со о

СА) VJ О

в том же количестве физиологический раствор. Опытная группа состоит из 24 животных, а контрольная - из 30. Затем животных забивают через 2,4 и 6 ч соответственно. У них берут и приготавливают экстракт из печени, в котором затем определяют активность фермента ацилазы по предлагаемой методике. Полученные данные статистически обрабатывают методами вариационной статистики с учетом коэффициента Стьюдента.

Пример 2, Группе беспородных белых мышей (самцов) массой 22-24 г внут- рибрюшинно вводят четыреххлористый углерод в растворе в дозах 1 и 4 мл/кг веса. Контрольной группе вводят физиологический раствор. Опытная группа состоит из 21 животного на каждую дозировку вводимого вещества. Затем животных забивают, у них берут печень, готовят экстракт и определяют активность фермента ацилазы.

В таблице показано достоверное уменьшение активности ацилазы через 2-4 ч по1

2 4 6

2,,31,,,2tO,23 I ,11 0,22 1 , I 0, 1 ,22 0, 25 3,0 0,28

Э,,381,,,375tO,.b ,,20 1,54.Г,42 1.350,1Э 3,10,25

3,.272,,«12,,37 2,5510,11 2,, 1,,43 3,210,26

3,2Ч-0,32,9-0,283,,26 2,7r)1,2S 2,,3 2,, 3,,21

HP fio/ipe О.ОЬ.

е опыта н контроля лостоверно, вероятность

сле введения эндотоксина и четыреххлори- стого углерода.

Использование предлагаемого способа позволит в 2 раза ускорить определение токсичности химических веществ по сравнению с известным.

Формула изобретения Способ определения токсичности химических веществ, включающий введение лабораторным животным токсического агента, забой животных, приготовление гомогената ткани печение последующим определением активности фермента, отличающийся

тем, что, с целью ускорения способа и повышения его экономичности за счет снижения количества лабораторных животных, определяют активность фермента ацилазы (N- ацил-Д1 -аминокислота-аминогидролазы) и

по снижению уровня активности фермента в течение 2-4 ч после введения вещества по сравнению с контролем судят о токсичности вещества.