Способ диагностики аутоиммунного поражения печени Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, конкретно к гепатологии.

Цель изобретения - повышение точности диагностики аутоиммунного поражения печени у больных механической желтухой.

Способ осуществляется следующим образом.

Забор венозной крови а количестве 5 мл осуществляют из локтевой вены, кровь помещают в силиконизироааиную пробирку с несколькими каплями гепарина. Взвесь мононуклеарных клеток (лимфоцитов и моноцитов), выделенных из данной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина, доводят до концентрации 5x105 кл/мл средой 199 с добавлением сыворотки АВ группы. Полученную взвесь клеток в количестве 1 мл наносят на хорошо обезжиренное предметное стекло.

В эту же каплю добавляют зодно-солевой антиген ткани аутологичной печени из расчета 40 мкг белка на 1 мл культуральной жидкости. Стекло инкубируют в течение 1,5 ч при 37°С в термостате в атмосфере 5%-иого содержания С02. Неприлипшие клетки после инкубации удаляют следующим образом: переворачивают стекло, делая рисячую каплю, и оставляют стекло в таком положении в течение 10 мин при комнатной температуре. Каплю отсасывают фильтровальной бумагой, стекло дополнительно промывают средой 199. На полученный монослой макрофагов наносят 1 мл взвеси аутологичных лимфоцитов из пробиркм со средой 199 с добавлением сыворотки АВ группы. Стекло повторно инкубируют при 37°С в термостате в атмосфере 5%-ного содержания С.02 а течение 1 ч После инкуО 00 Ч

СП Os

бирования взвесь неприлипших клеток удаляют по той же методике, стекло дополнительно промывают 1 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. Препарат фиксируют 1%-ным раствором глютаратальдегида на фосфатном буфере и окрашивают по методу Гимзе-Романовско- го. Окрашенный препарат просматривают под большим увеличением с масляной иммерсией, подсчитывая количество макрофагов, образовавших контактные розетки с лимфоцитами.

Для количественной оценки эффективности образования комплексов макрофаг - лимфоцит используются следующие показатели: индекс макрофагов (ИМ) - количество лимфоцитов, фиксированных к одному макрофагу; процентное содержание взаимодействующих макрофагов (М+), образовавших контактные комплексы с лимфоцитами.

Возрастание показателя ИМ до 1,12- 1,78 и показателя М+ до 38-62% является специфическим для аутоиммунного поражения ткани печени.

Разработанный способ диагностики аутоиммунного поражения печени отличается следующим.

В предлагаемом способе используется исследование контактного взаимодействия между лимфоцитами и макрофагами, трансформировавшимися из моноцитов периферической крови в результате их предварительного инкубирования в присутствии водно-солевого антигена ткани аутологич- ной печени.

По сравнению с известным, разработанный способ обладает более высокой специфичностью и эффективностью диагностики аутоиммунного поражения ткани печени.

По разработанному способу обследовано 42 больных, из них 14 больных с хроническим неосложненным калькулезным холециститом и 28 больных с хроническим холестатическим гепатитом, обусловленным длительной хронической обтурацией внепечеиочных желчных путей. С целью контроля диагностической эффективности разработанного способа в этих же группах больных и в те же сроки исследована РБТЛ в присутствии водно-солевого антигена ткани аутологичной печени по общепринятой методике и проведено гистологическое исследование интраоперационных биоптатов ткани печени.

Анализ полученных данных показал. В группе больных с хроническим неос- ложиенным калькулезным холециститом

показатели РБТЛ с аутоантигеном и показатели контактного взаимодействия макрофаг - лимфоцит в присутствии аутоантигена были минимальны (РБТЛ от 22,3 до 22,4%,

ИМант 0,43, М+ан-г 10,6 ±1,448%) в течение

.всего периода наблюдения, что доказывает

отсутствие у этих больных аутоиммунных

процессов, направленных против ткани

аутологичной печени. Гистологическое исследование интраоперационных биоптатов ткани печени также не показало наличия аутоиммунной гепатопатии у этих больных,

В группе больных с хроническим холестатическим гепатитом выявлены качественно иные изменения: показатели контактного взаимодействия макрофаг - лимфоцит у 25 из 28 больных были значительно повышены (ИМант 1,382±0,164, М+ант

49,6±5,31%) в течение всего периода наблюдения. У трех больных из этой группы эти показатели достоверно не отличались (р 0,05) от таковых при неосложненчом хроническом холецистите. Значительное

повышение показателей РБТЛ (до 41,7± ±4,83%) отмечено у 21 из 28 обследованных в данной группе, у остальных 7 больных показатели РБТЛ достоверно не отличались (р 0,05) от показателей контрольной группы. Гистологическое исследование биоптатов ткани печени у всех 28 больных выявило однотипные изменения: резко выраженную белковую и жировую дистрофию гепатоци- тов, s различной степени выраженный перипортальный м диффузный фиброз, признаки портального и перипортального гепатита, начинающегося цирроза печени со специфической диффузной и перипор- тальной инфильтрацией лимфоидными

; члетками. Эти изменения убедительно доказывают наличие у всех обследованных Сольных этой группы аутоиммунных процессов, направленных против ткани аутологичной печени.

Таким образом, диагностическая эффективность РБТЛ составила 77,8%, использование предлагаемого способа диагностики позволило повысить частоту выявления аутоиммунных процессов, на0 правленных против ткани аутологичной печени до 92,5%.

П р и м е р 1. Больной Антощенко В.Я., 52 лет, находился на стационарном лечении 5 в клинике хирургических болезней Вороши- ловградской областной клинической больницы с 11,04.87 г. по02.05.87 г. Клинический диагноз: желчекаменная болезнь, хронический холецистит, холедохолитназ. Перемежающаяся механическая желтуха. Хронический холестатической гепатит.

Операция 16.04.87 г.: холецистэктомия, холедохолитотомия, трансдуоденальная транспапиллярная холедоходуоденосто- мия, дренирование холедоха по Пиковско- му, биопсия печени.

Показатели РБТЛ с аутоантигеном от 20% до 21% (достоверно не отличаются от показателей РБТЛ у больных с хроническим неосложенным калькулезным холециститом).

Показатели контактного взаимодействия по разработанному способу: ИМ 1,54- 1,32 М+40-44%.

Заключение гистологического исследования биоптата печени: хронический активный холестатический гепатит с признаками аутоиммунной агрессии.

Также установлено, что при наличии у больных аутоиммунного поражения ткани печени возможно снижение показателя ИМ до значений, достоверно не отличавшихся от показателей группы.

П р и м е р 2. Больной Царевский В.Н., 47 лет, находился на стационарном лечении в хирургическом отделении Ворошиловг- радской областной клинической больницы с 12.01.88 г. по 04.02.88 г. Клинический диагноз: желчекаменная болезнь, хронический холецистит, холедохолитиаз, стеноз большого дуоденального сосочка II степени. Перемежающаяся механическая желтуха. Хронический холестатический гепатит.

Операция 16.01.88 г.: холецистэктомия, холедохолитотомия, трансдуоденальная транспапиллярная холедоходуоденосто- мия, дренирование холедоха по Пиковско- му, биопсия печени.

Показатели РБТЛ с аутоэнтигеном со- ставили 37 и 42%.

Показатели контактного взаимодействия: ИМ 0,62-0,58, что достоверно не отличается от показателей контрольной группы, М+ 40 и 48%, что соответствует данным, характерным для аутоиммунных гепатопа- тий.

Заключение гистологического исследования: перипортальный фиброз, хронический холестатический гепатит с признаками аутоиммунной агрессии.

П р и м е р 3. Больная Мисина И.Г., 42 лет, находилась на стационарном лечении в клинике хирургических болезней Вороши- ловградской областной клинической больницы с 04.08.88 г. по 28.08.88 г. Клинический диагноз: желчекаменная болезнь, хронический холецистит, стеноз большого дуоденального сосочка I степени,

перемежающаяся механическая желтуха, хронический холестатический гепатит.

Операция 08.08.88 г.: холецистэктомия, трансдуоденальная транспапиллярная холедоходуоденостомия, дренирование холедоха по Пиковскому, биопсия печени.

Показатели РБТЛ с аутоантигеном составили от 44 до 48%, М+от 10 до 12%, что достоверно не отличается от показателей практически здоровых лиц. ИМ от 1,32 до 1,43, что характерно для аутоиммунного поражения ткани печени.

Заключение гистологического исследования: хронический холестатический гепатит с признаками аутоиммунной агрессии, диффузный и перипортальный фиброз.

Приведенные наблюдения доказывают целесообразность использования в диагностике аутоиммунного поражения печени двух показателей контактного взаимодействия: индекса макрофагов и процента взаимодействующих макрофагов.

Таким образом, предлагаемый способ диагностики аутоиммунного поражения ткани печени обладает существенно более вы- сокой диагностической достоверностью, чем известный. Анализ полученных данных и приведенные наблюдения доказывают целесообразность использования в предлагаемом способе одновременно двух показателей: индекса макрофагов и процент взаимодействующих макрофагов.

Формула изобретения

Способ диагностики аутоиммунного поражения печени путем культивирования клеток крови в присутствии водно-солевого тканевого антигена печени и оценки их фун-. кционального состояния, отличающий- с я тем, что, с целью повыил ния точности диагностики у больных механической желтухой, проводят исследование контактного взаимодействия аутологичных макрофагов и лимфоцитов путем культивирования в питательной среде моноцитов на стеклянной поверхности в течение 1,5 ч при 37°С в атмосфере с 5%-ным содержанием углекислого газа в присутствии водно-солевого антигена ткани аутологичной печени в концентрации 40 мкг белка на 1 мл культураль- ной жидкости с последующем отмыванием и нанесением на образовавшийся монослой равного объема взвеси аутологичных лимфоцитов, далее смесь клеток культивируют в течение 1 ч, промывают, фиксируют, окрашивают и подсчитывают среднее количество фиксированных на макрофаге лимфоцитов и процентное содержание мак- ррфагов с фиксированными на нихлимфо

цитами и при значении указанных показате- диагностируют аутоиммунное поражение лей соответственно 1,12-1,78 или печени у данных больных

Изобретение относится к медицине, конкретно к гепатологии. Целью изобретения является повышение точности диагностики аутоиммунного поражения печени у больных механической желтухой. Цель достигается тем, что исследуют контактное взаимодействие лимфоцитов с макрофагами, которые получают путем культивирования моноцитов на стеклянной поверхности в течение 1,5 ч при 37°С в атмосфере 5%- ного содержания СО в присутствии водно- солевого антигена ткани аутологичной печени в концентрации 40 мкг бепка на 1 мл культуральной жидкости, и оценку функционального состояния клеток проводят по количеству контактных розеток макрофагов и лимфоцитов, и при его знлченим равном индексу макрофагов от 1,12 дс 1 78 или содержащего взаимодействующих макро- фа ов от 38 до 62%, диагностируют аутоиммунное поражение печени у ботьных, Положительный эффект способа заключается в повышении точности диагностики с 77,8 до 92,5%.