Способ оценки активности аутоиммунного процесса у больных гепатитом Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано для иммунологического обследования больных хроническим гепатитом.

Известен способ оценки аутоиммунитета у больных хроническим гепатитом с помощью НСТ-теста с нейтрофилами крови.

Целью изобретения является повышение точности оценки аутоиммунных процессов у больных хроническим холестатическим гепатитом.

Указанная цель достигается тем, что пэред проведением НСТ-теста макрофали, выделение из крови пациента инкубируют в Течение 1,5 часов в водно-чюлевом антигене аутологичной печени.

Способ осуа ествляют следующим образом.

Кровь в количестве 5 мл получают из локтевой вены, кровь помещают в силиконизированную пробирку с тремя каплями гепарина. Взвесь мононуклеарных клеток (моноцитов и лимфоцитов) получаютцентрифугированием в градиенте плотности фиколл-верографина, доводят до концентрации 5 X 10 средой 199 с добавлением сыворотки АВ группы. Полученную взвесь клеток в количестве 1 мл наносят на обезжиренное стекло, в каплю взвеси добавляют водно-солевой антиген ткани аутологичной печени из расчета 40 мкг белка на 1 мл культуральной жидкости. Стекло инкубируют в течение 1,5 ч при 37°С в термостате в атмосфере 5% С02, Неприлипшие после инкубации клетки удаляют следующим образом: переворачивают стекло, делая висячую каплю, оставляют его в таком положении на 20 мин при комнатной температуре, каплю отсасывают фильтровальной бумагой. Стекло дополнительно промывают 1 мл стерильного изотонического раствора натрия хлорида. На полученный монослой макрофагов наносят 0,1%-ный раствор нитротетразолиевого синего и фосфатный буфер, стекло повторно инкубируют в термостате при 37°С втечение 15 мин. После инкубации стекло высушивают, фиксируют метанолом и орашивают метиленовым зеленым. Под

микроскопом с масляной имерсией подсчитывают 200 фагоцитов, содержащих и несодержащих гранулы . формазана. Количественный показатель; процентное содержание фагоцитов, содержащих гранулы формазана.

Водно-солевой антиген ткани аутологичной печени готовится по общепринятой р етодике: ткань аутологичной печени, взятой при краевой интраоперационной или пункционной ее биопсии, размельчают ножницами, промывают проточной водой в течение 24 ч, затем заливают несколько раз стерильным изотоническим раствором натрия хлорида. Объем ткани измеряют в старильном мерном цилиндре и определяют уровнем жидкости. Ткань подвергается гомогенизации, к одной ее части добавляют 4 части изотонического раствора натрия хлорида. Полученную однородную смесь отстаивают при температуре 4°С и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 45 мин. Надосадочная жидкость - водно-солевой экстракт ткани печени - является антигеном и содержит 1,5 - 2,0% белка.

Исследование способности мононуклеарных фагоцитов к восстановлению нитросинего тетранитротетразолил в среде, содержащей водно-солевой антиген ткани аутологичной печени, произведено у 10 больных хроническим неосложненным калькулезным холециститом и у 10 больных хроническим холестатическим гепатитом, обусловленным длительной перомежающейся механической желтухой на фоне холедохолитиаза и стеноза большого дуонденального сосочка. С целью контроля диагностической эффективности разработанного способа у этих же больных исследоаана способность к восстановлению нитросинего тетранитротетразолия (НСТ) в среде без добавления водно-солевого антигена ткани аутологичной печени, способность лимфоцитов периферической крови к бласттрансформации под действием лимфоцитарного митогена и водно-солевого антигена ткани аутологичной печени. Эти пробы проведены в обеих группах больных до оперативного вмешательства и в 1-е и 7-е сутки послеоперационного периода.

Полученные результаты приведены в таблице.

Результаты клинико-иммунологического обследования больных хроническим гепатитом показывают:

1) Активность кислородзависимого меТг болизма макрофагов периферической крови в греде. содержащей антиген

аутологичной печени, достоверно выше у больных хроническим xoлec alичecки 4 гепатитом, обусловленным перемещающейся механической желтухой.

2)отмечена достоверная корреляция между высокими показателями бласттрансформации лимфоцитов периферической крови под воздействием водно-солевого антигена ткани аутологичной печени, как индикатора аутоимунных патологических процессов, и возрастанием кислородзависимого метаболизма фагоцитов в среде, содержащей антиген ткани аутологичной печени у больных хроническим хо-естатическим гепатитом,

3)те же показатели у больных хроническим колькулезным холециститом в пробах с печеночным антигеном не отличаются по величине и отсутствию динамики от проб без антигена.

С целью исследования диагиост.ческсй эффективности способа в гастрозитерологическом центре Луганского медицинского института и Луганской областной клинической больницы обследовано 76 больных холестатической формой хронического активного гепатита, у 52 из них гепатит был вызван длительной хронической обтурацией внепеченочных желчных путей.

Оценка полученных результатов показала, что интенсивность увеличения окислительно-восстановительного метаболизма по НСТ-тесту у макрофагов в присутствии аутоантигена достоверно (р 0,05) соответст-зует уровню активности аутоиммунного поражения ткани печени. Увеличение Н СТ-активности на 20% от контрольных данных соответствует умеренно выраженной активности аутоиммунного поражения печени. Возрастание НСТ-теста э присутствии аутоантигена на 30% и более соответствует высокой активности аутоиммунной гепатопатии.

Формула изобретения

Способ оценки активности аутоиммунного процесса у больных гепатитом с помощью иммунологического исследования в НСТ-тесте с нейтрофилами крози,о т л и ч аю щ и и с я тем, что с целью повышения точности оценки аутоиммунитета при хроническом холестатическом гепатите, перед проведением НСТ-теста нейтрофилы дополнительно инкубируют 1,5 ч при 37°С с водно-солевым антигеном аутологичной печени и при увеличении Н СТ-активности на 20% по сравнению с пробами без антигена диагностируют умеренную активность аутоиммунного процесса, а при увеличении на 30% - высокую активность.

Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано для обследования больных хроническим гепатитом. Цель изобретения - повышение точности оценки активности аутоиммунного процесса у больных хроническим холестатическим гепатитом с помощью НСТ-теста с нейтрофилами крови пациента. Суть изобретения в предварительной инкубации нейтрофилов с водно-солевым экстрактом аутологичной печени и по увеличению ''НСТ-активности по сравнению с контролем оценивают активность аутоим.мунного процесса у пациента.-1 табл.