Способ диагностики острых респираторных вирусных инфекций у детей первого года жизни Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

со С

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в диагностике респираторных вирусных инфекций у детей. Целью изобретения является повышение точности диагноза заболеваниями у ребенка с использованием клинико-лабораторных показателей. Для этого одновременно с обследованием ребенка проводят иммунофлюоресментное и серологическое обследования находящийся с ним в контакте матери. Полученные показатели матери и ребенка сравнивают. Диагноз ребенка ставят следующим образом - при сопоставлении показателей ребенка и матери и при положительной иммунофлюо- ресценции в мазках из носа и по нарастанию титра антител в крови матери в 8 и более раз к одному из вирусных агентов. Положительный эффект выражается в повышении точности диагностики на 25%. 4 табл.

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в диагностике респираторных вирусных инфекций у детей.

Целью изобретения является повышение точности диагностики.

Для уточнения диагноза заболевания у ребенка до 1 года, у которого полностью или частично отсутствует свечение в мазках-отпечатках из носа, отсутствует диагностический прирост титра антител в крови класса JgM и JgG производят иммунофлюорес- центное и серологическое обследование контактирующей с ним матери. Затем экспресс-диагностические и серологические показатели матери и ребенка сопоставляются и при положительной иммунофикорес- ценции и по нарастанию титра антител в крови матери в 8 и более раз к одному из

вирусных антигенов устанавливают диагноз у ребенка.

Нами впервые предложено для уточнения диагноза у ребенка обследовать дополнительно контактирующую с ним мать, поскольку она, особенно при естественном вскармливании, имеет больше контакта с ребенком и может инфицироваться от него и переносить аналогичную инфекцию (в острой и инаппарантной форме). Возможно и наоборот - мать более часто общаясь с окружающими людьми, является источником инфекции для ребенка. Как показали исследования, иммунный ответ матери характеризуется быстрой выработкой достаточного количества антител класса IgM и JgG, которые в случае кормления ребенка переходят к нему в виде вновь синтезированного специфического JgA. Таким образом, маркирование общего инфекционного

ON Ч

3

о-

процесса по иммунному (серологическому) ответу матери, находящейся а близком контакте с ребенком, более целесообразно, а степень иммунного ответа у матери более выражена, т.е. антитела более видны, чем у ребенка, и выявить их легче, Кроме того, иммунофлюоресцентное обследование матери путем забора материала из носа не представляет особенных трудностей, и ранее выявление свечения в мазках дает возможность проводить своевременную профилактику. .

Нами предложено также сопоставлять данные матери и ребенка для уточнения диагноза, причем увеличение титра антител в крови матери в 8 и более раз считаем более достоверным, так как у кормящей матери в течение дня может меняться концентрация различных защитных факторов и только значительное увеличение в 8 и более раз является диагностическим показателем нарастания титра антител. Положительной считается иммунофлюоресценция, когда в мазках из носа матери и ребенка наблюдается выраженное свечение (++) и более.

Метод осуществляется следующим образом,

При поступлении больного ребенка до 1 года в клинику ОРВИ вместе с матерью важно установить у него предварительный диагноз и соответственно выявить у матери не болела ли она в ближайшее время острой респираторной инфекцией. После этого произвести забор материала в первые часы поступления одновременно как у ребенка, так и у матери. Для иммунофлюоресцентной диагностики ОРВИ берут мазки. Перед взятием материала полость носа очищают тампоном от слизи, лейкоцитов и слущенных клеток. Для получения большего количества клеток цилиндрического эпителия сухими ватными тампонами берут мазки с нижней носовой раковины, а при необходимости дополнительно и с задней стенки гортани.

Материал тотчас помещают в пробирки с 2 - 3 мл физиологического раствора (рН 7,2 - 7,4) и встряхивают в течение 1 - 3 мин. Затем тампоны удаляют и содержимое центрифугируют 6-8 мин при 3000 об/мин. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, а из осадка на тщательно обезжиренные предметные стекла наносят 7 капель на 1 стекло, которые сушат под вентилятором при комнатной температуре и фиксируют а ацетоне при +4°С. не менее 10 мин. Затем фиксированные мззки окрашивают флюоресцирующими сыворотками к различным антигенам: PC Ад, В. А, ПП, , vlK (на каждую каплю мазка 1 каплю соответствующей сыворотки в рзбочем разведении). Мазки помещают в термостат на на 30 мин, затем смывают буферным раствором конъюгаты и мазки высушивают под вентилятором.

Микроскопия препаратов, приготовленных из эпителиальных клеток носовых ходов больного ребенка и контактирующей с ним матери, является заключительной стадией иммунофлюоресцентного анализа. Специфической считают отчетливую флюоресценцию в виде гомогенного или гранулярного свечения ядра, цитоплазмы или какой-либо части ее в структурно сохранившейся клетке. Положительным реэультзтом можно считать наличие достаточно убедительного свечения в структурных элементах не менее 2-3 клеток, при непременном отсутствии подобной картины в контрольных препаратах.

Контролями к каждому из препаратов служат полученные параллельно 2-3 препарата от тех же обследуемых, обработанные ФИТЦ-глобулинами против других антигенов. Для оценки-интенсивности

флюоресценции мы используем 2-х крестовую шкалу учета, при которой обозначения ± (плюс - минус) соответствуют 3-3 светящимися клетками (++) - от 5 до 7 светящихся клеток, +++,- - больше 7 хорошо

светящихся клеток. Кроме того, у ребенка и контактирующей с ним матери подлежат исследованию парные сыворотки крсви, из которых первая взята в остром периоде (желательно в первые 3 дня) болезни, вторая - в периоде реконвалесценции (желательно не ранее 2 недель после первой).

Экспресс-диагностическим методом, основанным на выявлении антител класса ig

М в первой сыворотке обследуемых можно уточнить иммунофлюоресцентный диагноз ОРВИ. Он проводится следующим образом. Перед постановкой реакции торможения ге- магглютинации (РТГА) готовится рабочее

разведение сыворотки обследуемого (1:8) и прогревается в бане при +5б°С 30 мин, затем делят обработанные сыворотки на 2 порции и к одной в расчете 1: 2 добавляют физиологический раствор, а к другой порции 0,15 м раствор цистеина. Пробы ставят на контакт при +4°С на 24 ч, после чего с сыворотками ставят обычным способом РТГА, т.е. к разведенным сывороткам 1/16; 1/32, 1/128; 1/236, 1/512 добавляют 4 АЕ

соответствующего антигена и после двухчасового контакта заливают 1%-ными курит ными эритроцитами. Положительным результатом считают снижение титра антител, обработанных цистеином, в 4 - 8 и более раз.

В дополнение к вышеуказанному проводят обследование парных сывороток крови ребенка и матери для выявления диагностической сернокснверсии, т.е. прироста титра антител во второй сыворотке к первой в 4 - 8 раз и более JU пя этого капельным методом ставят РСК с парными сыворотками обследуемых с антигенам PC, Ад, А, В, Ор, Мк и РТГА с антигенами Ai.Aj, В, ПГ1,2,з (серологические тесты РТГА и РСК ставят общеизвестным способом).

Основным отличием предлагаемого способа является установление диагноза заболевшего ребенка путем сопоставления его показателей с материнскими.

П р и м е р 1. Ребенок поступает в клинику с явными проявлениями ОРВИ. ухаживающая за ним мать находится в клинике. При сборе анамнеза у ребенка устанавливают предположительную аденовирусную инфекцию. При опросе матери выясняется, что и она имеет легкое недомогание. Показатели иммунофлюоресцентно- го и серологического обследования приведены в табл.1 -4.

При сопоставлении данных матери и ребенка выявлено свечение в иммунофлюо- ресценции к аденовирусному антигену. Таким образом, при сомнительной имму- нофлюоресценции у ребенка АД (1) удалось уточнить диагноз по иммунофлюоресцент- ному свечению в мазке матери Ад (+++).

В мазках ребенка к 2 антигенам - Ад и PC выявлено свечение на (±). Диагноз можно уточнить серологическими -данными матери. В первой ее сыворотке обнаружено 8-кратное снижение титра антител к Ад-вирусу при обработке цистеином, что говорит о наличии антител класса М. В связи с этим имеются основания установить ребенку аденовирусную инфекцию.

В данном режиме у ребенка клинически устанавливается аденовирусная инфекция, хотя отсутствует положительная иммуноф- люоресценция и серология. У матери выявлено четкое свечение в мазках из носа (+++) к Ад-вирусу и имеются антитела класса М к аденовирусу (в первой сыворотке после обработки цистеином снижение титра антител в 8 раз). Исходя из полученных данных, мы

считаем вправе поставить у ребенка аденовирусную инфекцию.

В представленном примере у ребенка имеется аденовирусная инфекция, посколь- ку у контактирующей с ним матери есть основные диагностические показатели этой инфекции - иммунофлюоресценция к Ад (), прирост титра антител к аденовирусу в 8 раз.

Таким образом, из представленных примеров видно, что диагностические показатели матери играют существенную роль в уточнении диагноза у ребенка и дают возможность в течение 2-х дней установить

диагноз как у ребенка, так и у матери.

В связи с этим считаем, что предлагаемый способ имеет медико-социальный эффект, так как установление диагноза ребенка до одного года представляет определенные трудности Однако, как показали наши исследования, дополнительное обследование матери дает возможность уточнить диагноз заболевания ребенка и правильно и своевременно провести лечебные мероприятия не только ребенка, но и матери, чем предотвратить распространение инфекции и углубление процесса.

Из 52-х обследованных нами детей до 1 года, больных ОРВИ, предложенным способом удалось уточнить диагноз в 25% случае, что дало определенным эффект, т.е. своевременно и правильно лечить ребенка и провести профилактические мероприятия у матери. Особенно это важно в плане

предупреждения внутрибольничных инфекций.

Формула изобретения Способ диагностики острых респираторных вирусных инфекций у детей первого года жизни путем выявления вирусов в слизистой носа и антител крови, отличающийся тем, что. с целью повышения точности диагностики при отрицательных

показателях диагностики у ребенка дополнительно определяют у матери наличие вируса в слизистой носа и антитела к респираторным вирусам в сыворотке крови и при наличии у матери вируса в слизистой носа

и нарастании ее антител на 7 - 8 день наблюдения в 8 и более раз диагностируют острую респираторную вирусную инфекцию.

Таблица 1

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4