Способ получения полиакриламидной основы плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов Советский патент 1991 года по МПК C08F2/46 C08F220/56 C12N1/00 

Изобретение относится к химии полимеров, в частности к технологии получения полиакриламидного геля, применяемого в микробиологии в качестве плотной основы питательных сред для культивирования микроорганизмов.

Целью изобретения является упрощение технологии получения плотной питательной среды, повышение производительности процесса при расширении функциональных и эксплуатационных возможностей основы.

Пример 1. Для получения основы готовят реакционную смесь Для этого 2,1 г N,N-метиленбисакриламида растворяют в 500 мл дистиллированной воды, подогревают до 60°С, добавляют 80 i акриламида

размешивают до полного растворения и доводят раствор дистиллированной водой до 1000 мл Реакционная смесь содержит мономеры в массовом соотношении акриламида к метиленбисакриламиду равным 8,0:0,21. Смесью заполняют чашки Петри в количестве, обеспечивающем толщину диска 3 мм. Чашки с реакционной смесью помещают в герметичные пакеты-контейнеры из полиэтиленовой пленки и размещают на поддон. Поддоны с партией чашек Петри в упаковке устанавливают на конвейер, который перемещает партию со скоростью 10 см/с в зону облучения под раструб ускорителя электронов ЭлТ-1,5 А, где партия непрерывно облучается поглощенной дозой 15 9 кГц при энергии электронов 1 3 МэВ и токе пучка электронов 0,5 мА

ю а N ы о

Полученный полиакриламилный гель используют в качестве основы для приготовления плотной питательной среды

Для этого пакеты-контейнеры вскрывают, извлекают чашки Петри с гелем, кото- рый в асептических условиях заливают жидким питательным субстратом - мясо- пептонным бульоном и оставляют для про питки в течение 3 ч при 56°С. Избыток бульона удаляют пипеткой. Полученные пи- тательные среды подсушивают в термостате при 37°С и засевают тест-микроорганизмом Е. coli M-17.

Плотная питательная среда эластична, прозрачна, обладает хорошими адгезион- ными свойствами, имеет гладкую поверхность, не повреждающую при посеве микроорганизмов. Выросшие бактерии проявляют характерные для них культуральные и морфологические признаки.

Пример 2. Для приготовления реакционной смеси используют 3,0 г метилен- бисакриламида и 50 г акриламидз. Реакционная смесь содержит мономеры акри- ламид и метиленбисакриламид в соотноше- нии 5,0:0,30. Далее образцы основы готовят по примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 18,1 кГр, при токе пучка 0,6 мА.

Полученный гель используют в качестве основы для приготовления плотной питательной среды аналогично примеру 1. Тест- культурой служит золотистый стафилококк (St. Aureus 209). Приготовленная среда обладает теми же свойствами, что и в примере 1. Стафилококк вырастает в виде типичных колоний, культура характера по морфологическим признакам.

Пример 3. Для приготовления реакционного раствора используют 2,8 г N,N - метиленбисакриламида и 70 г акриламида Реакционная смесь содержит мономеры при соотношении акриламида и N.N-метиленбисакриламида 7,0:0,28 Далее образцы основы готовят по примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 17,6 кГр при токе пучка электронов 0,4 мА.

Полученный полиакриламидный гель используют в качестве основы для приго- товления плотной питательной среды

Для этого пакеты-контейнеры вскрывают, извлекают чашки Петри с гелем, который промывают проточной водой, заливают жидкий питательный субстрат (триптиче- ский перевар по Хоттингеру) и стерилизуют термически. Засевают кишечную палочку(Е coll M-17).

Полученная питательная среда обладает теми же свойствами, что и в примере 1

0

5 0

5

0

О

0

5

Б

Тест организм вырастает подобно :рг,меру 1.

Пример 4. Для приготовления реакционной смеси используют 3,2 г Ы,М -мети- ленбисакриламида и 40 г экриламида. Реакционная смесь содержит мономеры npi/i соотношении акриламида и N,N-метиленбисакриламида 4,0:0,32. Далее образцы основы готовят по примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 19,2 кГр при токе пучка электроновО,5 мА. Полученный полиакриламидный гель используют в качестве основы для приготовления плотной питательной среды аналогично примеру 1 за. исключением того, что гель пропитывают средой Т ryptose Broth (Difco), и засевают культурой Е. coli K-12. Приготовленная среда обладает теми же свойствами, что среда, полученная по примеру 1 Культура вырастаете эпичными морфологическими и культуральными свойствами.

Пример 5. Для приготовления реакционного раствора используют 1,0 г N,N- нетиленбисакр лламида и 120 г акриламида. Реакционная смесь содержит акриламиД и N.M -метилепбисакриламид при соотношении 12:0-0,10 Далее образцы основы готовят по примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 18,6 кГр при токе пучка электронов 0,4 мА. Полученный гель исп .ь.ьзуют а качестве основы для приготовления плотной питательной среды, аналогично примеру 1. Тэст-культурой служит Salmonella typhimurlum. Питательная среда обладает -еми же свойствами, что и в примэре 1. Культура вырастает в типичной форме с характеоными морфологическими и культуральными свойствами.

Пример б. Реакционный раствор (Отовят используя 1,1 г N,N-метиленбисак- ролами да и 150 г акриламида. Реакционная смесь содержит акрлламид и N,N -метиленбисакриламид в соотношении 15,0:0,11. Да- пее образцы основы готовят по примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 17,0 кГр при токе пучка электронов 0,5 мА, Полученный гель используют в качестве основы для приготовления плотной питательной среды аналогично примеру 3. тест-культурами служат St. aureus 209, Вас. cereus. Среда обладает свойствами аналогично примеру 1. Культуры вырастают с типичными культуральными и морфологическими свойствами.

Пример 7. Для приготовления реакционного раствора используют 1,3 г N.N- метиленбисакрилзмида и 200 г акриламида. Реакционная смесь содержит акриламид и N,N -метмленбисакриламид в соотношении 20.0:0,13. Далее образцы основы готовят

аналогично примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 15,9 кГр и токе пучка электронов 0,4 мА. Полученный гель используют в качестве основы для приготовления плотной питательной среды аналогично примеру 1 за исключением того, что гель пропитывают жидким суслом, тест- культурой служит Candida albicaus. Среда обладает теми же свойствами, что и в примере 1. Культура вырастает в типичной форме.

Пример 8. Для приготовления реакционного раствора используют 3,3 г N.N - метиленбисакриламида и 30 г экриламида. Реакционная смесь содержит акриламид и -N,N-метиленбисакриламид в соотношении 3,0:0,33. Образцы основы готовят по примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 19,2 кГр при токе пучка электронов 0,5 мА. Полученный гель вязкий, не пригоден для работы.

Пример 9. Для приготовления реакционного раствора используют 1,3 г IM.N-ме- тиленбисакриламид и 220 г акриламида. Реакционная смесь содержит акриламид и N.N-метиленбисакриламид в соотношении 22,0:0,13. Далее образцы основы готовят по примеру 1 и облучают ускоренными электронами поглощенной дозой 18,6 кГр при токе пучка электронов 0,5 мА Полученный гель используют в качестве основы для приготовления плотной питательной среды по примеру 1 за исключением того, что гель пропитывают бульоном Хоттингера и в качестве тест-культуры используют Staureus, E. coll. Полученные среды не пригодны для работы, Тест-культуры вырастают в виде не характерных точечных сухих колоний.

Пример 10. Приготовление реакционной смеси и образцов основы производят аналогично примеру 1 за исключением того, что облучение проводят поглощенной дозой

19.5кГр. Полученный гель хрупкий, к работе не пригоден.

Пример 11. Приготовление реакционной смеси и образцов основы производят аналогично примеру 1 за исключением того, что облучение проводят поглощенной дозой

15.6кГр. Полученный гель тянется за бактериологической петлей, что усложняет посев микроорганизмов. Основа к работе не пригодна.

Пример 12. Реакционную смесь и

образцы основы готовят аналогично примеру 1 за исключением того, что облучение проводят при токе пучка электронов 0,8 мА, Полученный гель неоднороден, не пригоден для использования в качестве основы.

Возможность получения предлагаемым способом полиакриламидной основы заданной плотности, способной сохранить свои свойства в течение длительного времени, подтверждают данные по определению условно-мгновенного модуля упругости, приведенные в табл. 1 для примеров 1-7.

Данные, позволяющие количественно охарактеризовать адгезионные свойства основы по результатам испытаний на сдвиг

полиакриламидного геля, полученного предлагаемым и известным способами, приведены в табл. 2.

Испытания по определению предела прочности при сдвиге проводят на разрывной машине РМ-30-1 при скорости движения зажима 200 мм/мин и толщине образца ( д) 3,3 мм по известной методике.

Образец-гель полимера помещают между пластинами из материала чашки Петри

(полистирол).

В табл. 3 приведены физические и биологические показатели качества полиакриламидной основы питательной среды. Формула изобретения

Способ получения полиакриламидной основы плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов путем сополимеризации акриламида и М,М -мети- ленбисакриламида, отличающийся тем,

что, с целью повышения производительности при упрощении технологии процесса и расширения функциональных и эксплуатационных возможностей основы, сополиме- ризацию проводят под воздействием

ускоренных электронов поглощенной дозой 15,9-19,2 кГр при токе пучка электронов 0,4-0,6 мА и массовом соотношении акриламида и Н,м -метиленбисакриламида (4,0- 20,0):(0,10-0,32).

Таблица 1

Изобретение относится к получению по- лмакриламидной основы плотной питательной среды дня культивирования микроорганизмов. Изобретение позволяет повысить производительность способа получения основы при упрощении технологии процесса, а также расширить функциональные и эксплуатационные возможности основы за счет сополимеризации акриламида и N,N1- метиленбисзкриламида под роздействием ускоренных электронов поглощенной дозой 15,9-19 2 кГр при токе пучка электронов 0,4-0,6 мА и массовом соотношении акриламида и N,N -метиленбисакриламида (4,0- 20,0):(0,10-0,32) 3 табл

Таблица2

ТаблицэЗ