Способ получения плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов Советский патент 1993 года по МПК C08F220/56 C12N1/00 

СП

с

Изобретение относится к способу получения плотной питательной среды для культивирования микроорганизмов. Изобретение позволяет упростить технологию изготовления плотной питательной среды за счет сополимеризации акриламида и N.N -метиленбисакриламида в присутствии разветвленного полиакриламидз со средней молекулярной массой 7,2 104 при массовом соотношении разветвленного полиакриламида, акриламида, N.N -мети- ленбисакриламида, равном 0,028-0,11:7,0- 15,0:0,11-0,21 соответственно. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.

Изобретение относится к получению плотных питательных сред на основе полимерных гелей и найдет применение и медицине и биологии.

Целью изобретения является упрощение технологии изготовления питательной среды за счет того, что отпадает необходимость использования реактора (разлив в чашки Петри) и сокращение времени реакции до 10-15 мин.

j П р и м е р 1. Для получения геля готовят четыре раствора А, В. С, О по следующей методике (указанные количества компонентов из расчета на 100 мл раствора).

1,Приготовление раствора А.

I 0,5 N.N.N.N -тетраметилэтилендиамина (т|ЕМЕД) растворяют в 99.5 мл физиологиче- скрго раствора.

2,Приготовление раствора В.

I 0,735 г N.N -метилен-бис-акриламида (МБА) растворяют в 50 мл физиологического

раствора, подогревают до температуры 60°С, добавляют 28 г акриламида (АА), размешивают до полного растворения. Полученный раствор фильтруют и доводят до объема 100мл физиологическим раствором.

0.189 г персульфата аммония (ПА) растворяют в 50 мл физиологического раствора или дистиллированной воды и доводят до объема 100 мл.

10,0 г разветвленного полиакриламида (РПА) со средней молекулярной массой 7,2 х хЮ4 растворяют в 80 мл дистиллированной воды или физиологического раствора при температуре 50-60°С. Объем раствора доводят до 100 мл.

К 99.5 мл раствора С добавляют 0,5 мл раствора D, тщательно перемешивают.

00

со VI

8

чэ

Реакционную смесь готовят из растворов, взятых в следующих соотношениях: А:В:Е - 1:2:4, что соответствует весовому соотношению акриламида, М.М метиленби- сакрилзмида и разветвленного полиактила- мида 7,0:0,21:0,028. Смесь разливают в чашки Петри и оставляют на воздухе. Сопо- лимеризация протекает в течение 10-15 мин до Образования геля, который затем отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 ч.

Плотную питательную среду готовят путем пропитки полученного геля триптиче- ским переваром по Хоттингеру (аминный азот 300мг/%) в течение 3 ч при температуре 5б°С, с последующей стерилизацией в течение 30 минут.

Питательную среду засевают золотистым стафилококком и инкубируют при температуре 37°С в течение 24 часов. Плотная питательная среда обладает хорошими адгезионными свойствами, плотностью и прозрачностью, эластичностью, имеет гладкую поверхность, обеспечивающую эффект скольжения бактериологической петли при посеве микроорганизмов без повреждения , ее поверхности. Выросшие микроорганизмы проявляют характерные для них культу- ральные и морфологические признаки. Культура хорошо снимается со среды без повреждения ее поверхности.

Пример 2. Для получения полиакри- ламидного геля используют растворы А, В. С, D такие, как и в примере 1. Приготовление раствора Е. К 99,0 мл раствора С добавляют 1,0 мл раствора D, тщательно перемешивают.

Реакционную смесь готовят из растворов при следующих соотношениях: А:В:Е 1:2:4, что соответствует весовому соотношению акриламида, N,N -метиленбисакри- л амид а и разветвленного полиакриламида 7,0:0,21:0,057.

Смесь разливают в чашки Петри и оставляют их для полимеризации на воздухе. Сополимеризация протекает в течение 5-10 минут до образования геля, который затем отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 часа. Полученный гель пропитывают мясо- пептонным бульоном в течение Зч при температуре 56°С, с последующей стерилизацией в течение 30 мин.

Питательную среду засевают кишечной палочкой и инкубируют при температуре 37°С в течение 24 ч. Выросшие микроорганизмы проявляют характерные для них культуральные и морфологические признаки, хорошо снимаются со среды без повреждения ее поверхности. Плотная среда

обладает хорошими адгезионными свойствами, плотностью и прозрачностью, эластичностью, имеет гладкую поверхность, обеспечивающую эффект скольжения бактериологической петли при посеве микроорганизмов без повреждения поверхности.

Пример 3. Для получения полиакри- ламидного геля готовят три раствора А, В, С по следующей методике.

0 1. Приготовление раствора А.

0,23 мл М,Ы,М ,М -тетраметилэтиленди- амина растворяют в 50 мл дистиллированной воды или физиологического раствора и доводят до объема 100 мл.

5 2. Приготовление раствора В.

0,4 г №,М -метилен-бис-акриламида растворяют в 50 мл дистиллированной воды или физиологического раствора, подогревая до температуры 60°С, добавляют 60 г акрила0 мида, размешивают до полного растворения, Полученный раствор фильтруют, доводят до объема 100 мл.

5 4. Приготовление раствора Е.

2 мл раствора D вносят в 98 мл раствора С. Из приготовленных растворов готовят реакционную смесь, для этого растворы смешивают в соотношении А:В:С 1:2:4, что

0 соответствует весовому соотношению акриламида, N.N -метиленбисакриламида и разветвленного полиакриламида 15,0:0,11:0,11. Смесь разливают в чашки Петри. Сопо- лимеризацию проводят на воздухе в тече5 ние 10-15 минут до образования геля. Полученный гель отмывают дистиллированной водой или физиологическим раствором в течение 1 ч. Пропитку геля осуществляют мясо-пептонным бульоном в течение 3 ч при

0 температуре 50-60°С, после стерилизации засевают споровую культуру.

Полученная среда плотная, обладает хорошими адгезионными свойствами, эластичностью, плотностью, прозрачностью,

5 ровной поверхностью, ярко выраженным эффектом скольжения при посеве микроорганизмов бактериологической петлей. Культура вырастает типичная, хорошо снимается петлей без повреждения поверх0 ности.

. Пример 4. Для получения полиакри- ламидного геля используют растворы А, В, С, D такие, как в примере 1. Приготовление раствора Е.

5 0,1 мл раствора D добавляют к 99,9 мл раствора С и тщательно перемешивают.

Реакционную смесь готовят из раствора, взятых в следующих соотношениях: А:В:Е - 1:2:4. Что соответствует весовому соотношению акриламида. М,М -метиленбисфриламида и разветвленного полиакрила- м|||да 7,0:0,21:0,005.

Смесь разливают в чашки Петри и ставит на воздухе. Сополимеризация протека- ет в течение 10-15 минут до образования геля, который отмывают физиологическим раствором в течение 1 часа и пропитывают питательным субстратом для получения пи- тадельной среды.

I УЗКОЙ гель и питательная среда удов- лфтворительной плотности, прозрачны, од- н|ако имеют неровную, волнистую поверхность, что затрудняет скольжение бактериологической петли при посеве микроорганизмов. Полученная питательная среда не пригодна для работы.

П р и м е р 5. Для получения полиакри- л мидного геля используют растворы А, В, С, D такие, как в примере 1.

Приготовление раствора Е.

10 мл раствора D добавляют к 90 мл раствора С и тщательно перемешивают.

Реакционную смесь готовят из раство- рЬв, взятых в следующих соотношениях: АШ:Е 1:2:4, что соответствует весовому соотношению акриламида, N.N -метиленби- оакриламида и разветвленного полиакрила- мида 7,0:0,21:0.57. Смесь разливают в чишки Петри и ставят на воздухе. Сопояиме- ризация протекает в течение 10-15 минут до

Среднее количество колоний выросших на средах по прототипу и заявляемых

образования геля, который отмывают физиологическим раствором в течение 1 часа и пропитывают питательным субстратом для получения питательной среды.

Такой гель и питательная среда удовлетворительной плотности слабо прозрачна, имеет матовый цвет, поверхность имеет некоторую шероховатость. Полученная питательная среда не пригодна для работы.

Формула изобретения

2.Способ по n.t, отпичающийся тем, что используют водный раствор разветвленного полиакриламида.