Способ определения количества тканевых структур на гистоцитологическом препарате и устройство для его осуществления Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, 1 а именно к морфометрическим исследо- . ваниям в гистологии и цитологии, и может быть использовано в медико-биологических.и биофизических исследованиях для излучения, обработки морфо- метрических и спектральных характеристик микропрепаратов.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Сначала производят контрастирование изучаемых тканевых структур микропрепарата, например, ядер, цито- Гплазмы митохондрий и т.д., любым из известных способов, например ме- тодами гистохимического окрашивания. Затем измеряют спектры свечения отдельных тканевых структур,количество которых необходимо измерить, Затем

(Л

с

путем сравнения спектров выбирают длины волн, на которых интенсивность свечения отдельных измеряемых тка- невых структур особенно сильно раз- , личается. После этого измеряют на выбранных длинах волн свечение всего поля зрения, на котором необходимо измерить количество выделенных ткане- в ых структур. Затем составляют и решают следующее уравнение:

о со оо с&

vj

sl

SWsn

2inOAh)sn i,H(Vser.

где 1 n - интенсивность свече ; ния, длина волны и интегральная площадь

занимаемой тканевой структурой.

Решение этого уравнения относительно неизвестных Sn осуществляют способом S &п/Д

где & - главный определитель системы;

Дп - дополнительный определитель системы.

Полученные величины соответствуют количеству выделенных тканевых структур, находящихся в поле зрения микроскопа.

Способ осуществляется с помощью устройства, приведенного на чертеже, где имеются тракты освещения микрообъекта 1 в проходящем, отраженном и возбуждающем люминесценцию свете, включающий в себя источник излучения 2-й оптическую систему, направляющую излучение на исследуемый микро- Ъбдьект 3 Особенностью этих схем является необходимость иметь в микро- скопе стабилизированный широкополост- ный источник излучения. Лучше всего . эти функции выполняют ксеноновые лампы со стабилизированным питанием. Диафрагма 4 с переменной аппертурой, расположенная в плоскости изображения 5 объектива 6 служит для выделения тканевых структур микропрепарата,количество которых необходимо определить. Полупрозрачные пластинки 7,8 позволяют проводить визуальные исследования при одновременном измерении спектральной информации, окуляр 9 микроскопа, согласующий объектив 10 в фокусе которого расположен входной торец приемного смесительного световода 11, который согласуются с ним по числовой и угловой аппертурам во избежание потерь информации за счет невыполнения полного внутрен- него отражения световода или диафрагмирования части изображения аппертурой световода, Линза 12 согласует выходной торец световода ГЗ с фоточувствительным элементом 14 акусто- оптического фильтра, который позволяет производить измерения спектров на заданных длинах волн, выбираемых заранее блоком управления и обработки 15, связанным с микроЭВМ 16.

Устройство работает следующим образом. В плоскости диафрагмы 4 объективом 6 строится изображение 5 микропрепарата 1, освещаемого про

Q

5

0 5 0 .Q 5

5

0

55

ходящим,отраженным или возбуждающим люминесценцию излучением Диафрагмой 4 выбирают поле зрения, с которого снимается спектральная информация. Выбор поля зрения производят при визуальном наблюдении через окуляр 9. Излучение, пройдя пластинки 7 и 8 и согласующий объектив 10, попадает в смесительное волокно световода 11, где происходит оптическое перемешивание пучков излучения; полученных от различных участков поля зрения и несущих различную спектральную информацию. Полученное на выходе волокна однородное по спектральным свойствам излучение проходит согласующий объектив 10 и акустооптический спектрофотометр, где преобразуется в электрический сигнал и запоминается в блоке управления и обработки 15 с помощью микроЭВМ 16, соединенной с блоком 15, Обработка измеренных спектров, выбор характеристических длин волн и вычисления морфологических характеристик исследуемого микропрепарата осуществляют по выше приведенному алгоритму.

Пример. При окраске препарата фуксином определялось количество межклеточной ткани и всех остальных тканевых структур

В процессе измерения методом точечного счета производилось 8 замеров при различных положениях окуляра.

Так для поля 1 получены следующие значения количества межклеточной ткани по отношению ко всем остальным « структурам,%: 76,72,68,76,92,88,88.

Время измерения по одному полю

зрения составило 20 мин.

1

Точность измерений не превышала .1% в диапазоне от 400 до 650 нм, где наблюдались наибольшие различия ин- тенсивности излучения прошедшего через различные тканевые структуры препарата. Максимальное различие наблюдалось при длине волны 550 нм. Отсчеты интенсивности составили для межклеточной ткани 0,175 для остальных структур 1, Получены следующие значения количества межклеточной ткани по отношению ко всему полю зрения. Для поля 1 - 77,6+1%, Для поля 2 - 49,8±1%. Время, затраченное на измерение одного поля зрения, включая подготовку к исследованию, составило не более 3 мин.

Изобретение относится к медици- , не, а именно к гистологической техяиа ке. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что. на препарате после спектрофотометрии определяют длины волн наибольшей ин-; тенсивности свечения, далее измеряют спектр свечения всего поля зрения при данной длине волны, а количество тка- невых структур на препарате рассчитьН вают по разнице между значениями тенсивности свечения всего поля и каждой выделенной структуры. Способ позволяет значительно повысить инфор- мативность исследований, 2 с,п,ф-лы 1 ил.