Штамм бактерий BacILLUS SUвтILIS для получения препарата против возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении Советский патент 1992 года по МПК A01N63/00 C12N1/20 

Изобретение относится к микронного- гимеской промышленности и сельскому хозяйству, в частности к получению средств защиты плодовой продукции от возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении и касается нового штамма бактерий для получения вышеуказанного средства.

Известны способы защиты продукции при закладке ее на хранение предуборочной обработкой Фунгицидами (клптан, фолнет) дезинфекцией плодохранилищ и тары парами формалина, серы, обработкой плодов антисептиками.

Однако использование этих препапа - гов перед уборкой плодоп и закладкой на длительное хранение не гаранс.«с -vj

тирует получение биологически чистой продукции и приводит не только к загрязнению плодов остаточными количествами пестицидов, но и снижает пищевую ценность плодов, что неблагоприятно сказывается на здоровье людей.

Известен способ биологической борьбы с монилиозом плодов персика, вызываемый грибом Monilia fructicola в период хранения. Цель достигается путем погружения плодов персика в рабочий раствор или опрыскиванием плодов споровой суспензией B.icillus subtilis В-3 после товарной обработки.

Однако при этом применяется суспензия спор против возбудителя мои-шио- зз плодов персика, вызываемым грибом

о

СП О J

w«3b

Moni ia f met i со я ,

не Mfv,-( t:HpcTi:n

против s-c35y/i T f ней гнилеч яблок и Глинограда х г л н :: i: и и .

Цель пробуетеиил - получение но- вого L- -чмиа Сактсрий, облад/н исто более широким сг ектрсм дейстпн я по

С ИЗР.-гСТ НЬ.- -; И СПОСОБ п СГО

подавлять возбудителей гнилей вых культур.

Штамм Bacillus subtil is йНПИГ./М 13 является антагонистом следующих видов фитопатогенчых грибов, вызывающих гнили плодога яблок и ьиногра/,;:, а именно Monilia fructigena, Rhizopus nigricaus, Penicilliun expansum, Per.iсi.Ilium clavifоггаг. Штамм депо- нирован в коллекции культур ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии под номером 131 R качестве активного ан- тагониста возбудителей гнилей яблок и винограда.

Штамм выделен из почвы Киевской области в 1976 г, идентифицирован -.о Краткому определителю бактерии Берджи.

Норфолого-культуральные признаки Bacillus subtilis ВНИИСХМ 131 - культура спороносная, аэробная, грам- положительная.

В мазках из колоний,выросших нл МПА, через 18 ч обнаруживаются прямые палочковидные кгетки 1,9-2,1 хО,,А мкм, расположенные одиночно, изредка цепочкой. Клетка при спорооб- раэовании не раздувается, после роста на глюкозном агаре в протоплазме глобулы не обнаруживаются. На КПБ культура образует пленку.

Через 2ч ч роста при Т +37 С на среде сусло-агар и Громыко культура имеет вид плоских, складчатых кожистых колоний диаметром 4-5 мм с изрезанными краями серовато-телесного цвета, хорошо снимаемые петлей с поверхности агара.

Через .k ч роста при Т +37 С на стрептомицетном агаре культура имеет вид мелких колонии диаметром О, «-1,0 ми, светло-серогоцпета сиз- резанным краем, с центром внутри, . слегка приподнимающемся над поверхностью агара, пастообразной консистенции, хорошо снимается с поверхности агара .

Через 2 i м роста при из мл- со-пептоннон агаре культура имеет пид складчатых плоских колоний диаметром 0,2 - 0,5 ми от светло-серого до

г

О

5 0

5

0

40

5

бежегю; ; цг;лл, с мелко мпрезонными края.ми , постос;бр,;зной консистенции, ;оро;ио сни..«пегся метлс-й с поверхности

йизиолого- биохиличес к и о с гюйс т са . Ферментируем , лрпбинозу, ианнмт, ксилог у с обралоплннкм кислоты бе.ч газа. положительную реакцию фогес--Проскаупр, гидро- лизует крахмал, селатину. Не рпстет D анаэробных условиях, не обладает аргичин/1игидг;ола:юй , лецитиназой . Не образует газ из N0 в анаэробных условиях. Продуцирует индол без образования сероводорода.

Из органических источников азота штамм Bacillus subtil is ВНИИСХМ 131 может использоппть следующие органические соединения: гидролизат ка- зеина, дрожжевой автолизат, пес гон, неорганические соединения нит f-аты (KNOj, NaNOj), аммонийные соли (Ni:)N03.

Минимальная температура роста штамма Bacillus subtilis ШИИСХК 131 7°С, максимальная +5-°С, оптимальная 28 до 37°Г,.

Значение РН среды минимальное 5, максимальное 8, оптимальное 6-7.

Штамм не патогенен для растений и теплокровных животных.

Получение препарата против возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении на основе штамма бактерии Bacillus subtilis ВНИИСХМ 131.

I

Основные этапы изготовления препарата следующие: подготовка штамма - засев на косячки с сусло-ага

В

ром, инкубиропан.ие при Т 37 течение ч. Пересев на бактериологические матрацы. ИнкуЬирсс,а- ние при Т 37°С в течение 7-Ю сут для получения спор. Контроль сг.оро- образования проводим микроскопически. С агаризованной среды культуру смывают физиологическим раствором, затем вносят в суспензию наполнитель - сахароэо-желатинокую среду (Ь и 1$ соответственно к общему объем};. Таким образом полученную суспензию доСОДЯТ ДО 10 МЛРД.СПОР В 1 МЛ (с ПОМОЩЬЮ оптического стандарта мутности) . Для дпительного хранения препарат полученную смесь разливают Б ампулы или лотки из нержавеющей стали и помещаем в морозильную камеру лри Т не зьмие -20°С на 8 ч. Затем проподят лиофилиззцию п вакуумных су1:,г.ьиь .х камерах в течение ЗЬ ч. при 1 мпературе от -20 до +3& С. Контроль бактериальной чистоты препарата просолит методом рассева на агаризопанные питьтельные среды (НПА, Громыко, Гаузе f 2, Картофельный агар, стрептомицетный агар).

Антагонистическую активность полученного препарата на основе штамма Bacillus subtil is ВНИИСХМ 131 определяют метолом радиальных штрихов (Егоров, 1969).

Антагонистическая активность опытных серий препарата на основе штамма Bacillus subtilis ВНИИСХМ 131 (после лиофильной сушки) показана в таблице.

Пример 1. Препарат для обработки плодов яблок и винограда получают наращиванием штамма Bacillus subtilis РНИИСХМ 131 на твердой среде сусло-агар, при Т +37°С в течение 7-10 сут получения спор.

Культуру смывают физиологическим раствором, затем вносят в суспензию наполнитель - сахароза-желатиновую среду (И и 12: соответственно к общему объему). Готовят рабочую суспензию с концентрацией 5-Ю и 1-10 спор/мл из расчета 1 л на 100 кг яблок.

Обработку препаратом проводят в условиях хранения (Т +2-8°С, относительной влажности ), при естественном инфекционном фоне. Контролем служат плоды, которые обычно закладывают на хранение, обработанные перед уборкой фунгицидом поликарбаци- ном 80% с.п. с нормой расхода С кг/га на 20 дн до уборки урожая.

При использовании суспензии штамма Bacillus subtilis ВНИИСХМ 131 с

10

5

0

5

0

5

0

титром от 5 До 10 кпрн.споо гоотищ- ется 1 сохраннпст ь плст.ов яблок в течениеVD ;;н, в то время кг-к о контроле уже на 7 сут наблюдаются развитие гнилей яблок.

Увеличение нагрузки спер Гюлее 10 млрд, не ведет к улучшению результатов.

Пример 2. И 198S г в хранилище совхоза Зеленый Гай Николаевской области проверена обработка препаратом на основе штамма Bacillus subtilis ВНИИСХМ 131 с титром 10 млрд спор в 1 г сухого лиофильно высушенного препарата. Норма расхода 1.г грепзрата на 1 кг ягод винограда . Условия хранения : Т +1-7°Г, относительная влажность воздуха 85-90%.Контролем служат гроздья винограда .обработанные перед, .хранением медьсодержащими препаратами (купрозан 80% с.п.b-ft кг/га).

Через 2 мес, после обработки установлено, что количество пораженных гроздей винограде возбудителями гни-| лей уменьшается нл 55, по срарнению с контролем.

Таким образом, применение штамма Bacillus suhtilis ВНИИСХМ 131 против возбудителей гнилей яблок и винограда позволяет уменьшить скорость развития гнилей во креня хранения в раза, а также снизить поражение возбудителями гнилей плодов яблок и виноград на 23,6-66.6%. I Формула изобретения

Штамм бактерий Bacillus subtilis ВНИИСХМ 131 для получения препарата против возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении.

Изобретение относится к микробиологической промышленности и сельскому хозяйству, в частности к получению средств защиты плодсвой продукции от возбудителей гнилей яблок и винограда при хранении, и касается нового штамма бактерий для получения вышеуказанного средства. Целью изобретения является получение нового штамма бактерий, обладающего более широким спектром действия. Штамм бактерий Bacillus subtilis выделен из почвы, депонирован в коллекции ВНИИСХМ код V 131. Штамм позволяет уменьшить скорость развития возбудителей гнилей во время хранения яблок и винограда в 3 раза и снгзить поражение их на 23,6-66,6% по сравнению с контролем. 1 табл. с е С