Способ контроля безвредности живых сибиреязвенных вакцин Советский патент 1992 года по МПК A61K39/07 C12Q1/00 

Изобретение относится к ветеринарной микробио огип, s частности к контролю безвредности биологических препаратов, и может бытьиспользовано в микробиологической промышленности.

Изг.остон способ контроля безвредности :киг,ых с - оиреяззенлых вакцин на кроликах, кото- , заключ.чотг.я в том, что трем кроликом мс-соой 2,0-2.5 кг еэкцину взодчг подкожно и 160-200 млн, спор каждому, что ко /;ол. вызывать заболевания и их гипо.п о точение дссптиднкеною набл г:, 1. :.);. Допускается наличие спекэ из место сгэло;:ия аскцины размером 2x2 см.

Однако copiin сиоир,говенных аакцин, npoi j;r...,x контроль пэ кроликах, ияогдп РЫЗ:« ..;ОТ ; - jwViesGiivie и гибель с о г. ыи ого ксл ичестг-,) сельскохозяистаеины:: жикс- THt X ;: :: :;я..-л jj;. Пр/. пголсди лн / х по

ВЬ;ЯС 1С..Э П, : -1Н Г : .и/1 -1 , VOiaногл j::o. I Oroinp; .: с-. рии пакщ;ны СТИ

контаминированы вирулентной культурой возбудителя сибирской язвы Б значительном количестве.

Кроме того, вакцина контаминирооам- Н5я спорами вирулентной кулы/ры возбудителя сибирской ПЗЕЫ, в рекомендоаанных для контроля безвредности дозах не ЗУЗЫ- вает заболевания кроликов (даже при контаминации 1000 спорами), но высохореактогенна для сельскохозяйственных животных в прививочных дозах, это са- труднрзт контоол:, ОезБрсднсст:; хсие - х сибиреязвенных пскцин. Следовательно, способ контроля безвредности жизь;х сибиреязвенных вакцин на кроликах недсстйтс-ч- но чувствителен.

Цзлью изобретения яслг.ется пссыше- ние чувствительности способа.

Вместо r.pcjuuoa используют с спород- днь;х белых f.vjjjcn ;:-..-.-ой vr-rc . - i- которым вьодят енутрибрюа инно суспе:;З . Ю ЕР.ХЦИКЫ с г.г/щ нл;Пциой жизнеспособных спер 10, j 2.6 : .;:;. г: oGb v.tf 0,5 мм с г.осл: ду:с-щ. лй зорЗ Юрпум г.сслг-допп- нием п«аших . Способ г к,-3.7 о л л и т выяплят. i-10 crop г;фулентно .-1 культуру возбудителя в прнсиго ;;ri;:i дозе сибиреязвенной вакцины, в прииисочноп дозе сибиреязвенной кгпщтш, с случае pcuepci-.n

Р.ЗКЦИННОГО L JT5f-:i . i3 ИЛИ ДЗ Ке .j.ibной контаг/икзцми сакцины. тем спмым предотвращая сыпус.к ностйпдортпого г;:й- пзрата.

Пример 1.Дмя контроля ие ;-:редности жиеых сибиреязионных вакцин из каждой серии сухой изкцини (;:г лонного штпмкз) отбирают по четырз ампулы, из ко:-дом серии жидксч - по четыре Флакона, отбор производят непосредственно с процессе расфасовки жидкой вакцины или упаковки сухой.

В соответствии с ГОСТом на след иссле- дуемого препарата каждую ампулу вакцины растаосчют а указанном на этикетке количества растворителя. Затем готовят две ус- родненные пробы,объединив готовый для применения препарат из дзух ампул или двух флаконов в одну пробу и тщательно их перзмеи:зо. Контроль концентрации жизнеспособных спор в исследуемых образцах просадят методом рас.,зпз из чашки Петри с мр.сопоптонним агаром (МПА) с последую- ш,иг -.с;;с -1зтсм гьфосших колоний (.со лас- но ГОСТу). ;J качестве коь грольнсго капсуг.ообразу;с1 ;его штгммз используют спорпзую сусп2г оп:о рО -ерэнс- -итамма 7 i/12-2-ii Вакцины Цсп-ю-ского, содер- жзщую 20 млн. спор п 1 глл.

ОтСирпот 12-13 к.. одорозых белых мышей. Из каждой приготооленной прсиы сгзкцнг.ы с исииен грацпей ;кизнеспо- собь:ых спор 20-25 г..лн./г-л сзрожают внут- p.vjp OiinniHO по пять Coiicix N fciUjCiTi з объеме 0,5 мл (10-12,5 млн. спорУ

Однспре.менно анз::сги-ным обряпсм зпрзжзют 2-3 белых мышей суспензией спер штамма 71/12 (.-;о1;троль капсулой -:-

НОСТ1-).

Чпсть (3-8) белых м--;;пел. зяр-пжениых испытуеглым претрптом, атак;1:- белые мыши, спрошенные штг/ : . 7 /12, псг .оа -от R сут i 6n:c;..:.i:ii. 5,

Э таСл.1 .,С . . oi .c- пер.:менгзяьного C2r-:voii :.; (: с г . м-мдюн, п т :Г;т.2 - рззул мП ы ; абл:од-2 -...й за б с лиги и r. L- UJOr-H1.

Пр1«готс тг: :о Л сог.-стпечяткОг.

П,1-;;:и : r.i ;v.;:n р-:п:1:эт, из rr .:.Cv: . то::.х оогг:Н --.еч j,;i,, .;.. .:- :

мйтных стскгэх. Исслсдоаанию подлежат только сге..ис трупы. Приготопг.енные мсз- .и-огг.очат1сг.1 маркируют и ззтем фиксируют 10 мин метилоJ JJM спиртом (путем погруже- И лг), После . иксг.цн.и мазки ьысушигзают на воздухе и окр.)1. иву:от раствором метилено- кого синего по Лёффлеру в течение 15 мин.

Прсдмогныс стакла с мозкоми-отпечот- кзми, не ел,ьи;ая кр.чски, высушивают фильтровально.-; иум&гой и просматривают под иммерсионной системой микроскопа,

Микроскоппроозние. Вначале просматривают препараты, приготовленные из органов и тканей мышей, погибших от контрольного (71/12) штамма. В мазках-отпечатках от этих животных обнаруживают сибиреязвенные палочки синего цвета, окруженные розогой капсулой. После просмотра контрольных, мазков приступают к просмотру мазков-отпечатков, приготовленных из органов павших мышей, которым введен испытуемый препарат. При этом для заключения о том, что проверяемая серия вакцины безвредна, просматривают не менее 100 полей зрения в каждом препарате. В мазках обнаруживают только бескапсуль- ные бациллы - синие палочки, соединенные в длинные цепочки.

Обнаружение а испытуемых препаратах пзлочек или коротких цепочс,с(2-5 палочек), окруженных выраженной кс-псулой различных толщины, ссидетельствует о наличии в исследуемых препаратах вирулентной культуру возбудителя сибирской язоы. Если в приготовленных мазках-отпечатках обнаруживают капсульные клетки возбудителя сибирской язви, серию вакцины (эталонного штамма) выбраковывают и уничтожают путем автоклавиропания при 2 атм в течение двух чэсов. При получении сомнительных результатов дальнейшую проверку проводят на удвоенном количестве образцов. При позторпой проверке получают сомнительные результаты - серию выбраковывают и уничтожают.

Таким образом, способ позволяет выявлять ду-.ке незначительную контаминацию вакцинного штамма спорами вирулентного штамма сибирской язвы.

Формула изобретения

Способ контроля безвредности живых сибиреязвенных сакцин, включающий введение исследуемом вакцины лабораторным :кивотнь;м с последующим учетом результатов, о т / и ч а ю щ и и с я том, что, с целью повышения чувствительности способа, вакцину БИСДГ.Т Селим мышам йнутрибрюшин- но в 10-12.5 мл:;, жизнеспособных спор, ллкео из паренхиматозных органов

М I -liL..., T MUMIX П ,-: CVT ППСЛС BO 5дсния вакцины, готовят мгг.ки-т печатки, а о безвредности пзкиимы сулчт по отсутствию капсулы-tux форм сибиреязвенного микроб в полученных мазкпх.

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к контролю безвредности биологических препаратов,и может быть использовано в микробиологической промышленности. Целью изобретения является повышение чувствительности способа. Цель достигается тем. что белым мышам внутрибрюшинно вводят суспензию вакцины с концентрацией жизнеспособных спор 10-12.5 млн. После гибели животных делают мазки-отпечатки, микроскопируют. При наличии спор варулентиой культуры в вакцине обнаруживаются капсулообрэзую- щие формы сибиреязвенного микроба. 2 табл.

Примечание, .- кдгсулъные и бескапсульим клетки

Таблица 1

ТдСльца