Способ получения анатоксинвакцины против стафилококкоза птиц Советский патент 1992 года по МПК A61K39/85 

Изобретение относится к микробиологии. D частности к методу получения анаток- син-пзкцины для специфической профилактики стафилохок :оза птиц.

Изпестены способы получения анатоксинов для профилактики столбняка, стафилококковой инфекции, дифтерии. формолсакцины против диплэкоккодой сеп- тицемин телят, поросят, сальмонеллеза. основанные на детоксикацни токсина и инактисзции бактерий, вирусов формалином 1Ji-f 2.

Известен способ получения стафилококкового анатоксина, предусматривающий вырзц зннэ стафилококков на кззоиногидролизатной среде с добавлением сыворотки крови и установками для подачи стерильной углекислоты, кислорода с последующей детоксикацией токсина и инактивацией стафилококков 0,4-0.6%-ным раствором формалина 3.

Недостатками способа являютс отсутствие стерилизации прогресанием стафилококков, необходимость подачи стерильных газов, длительность детоксикацни, слабая активность препарата из-за использования только продукта аутолиза и биосинтеза стафилококков, т.е. экзотоксина, и его внутри- кохное применение.

О

о

iCy

Sco

ШирОЧСЧ; Г Г:СЛрОСТр:}: Г 1П 0 Г.ТОф /ЛОКОХK.o ia птиц нг г;: .;цофоОри :;г с; требует (50. : , ; л .тпзиого, T jyhr..ПРОСТОГО Пр J.; ..;1Ј ТИЧ;Ч.) СЛ /ЛМ ПЗ 113

шгаммоо .лг/ ; плако/.к.С::;, сыуы л оиди;; зг:- Солсиания у пг;ц,

Цпль и : 5р т-:;нпп - у л КНДРми5 технологии и noiH-iLL tjnr.Q активности целевого продукта.

Согласно способу аа: лючоющснуся в Еыращисак ли стафилококков иг, питательной с ре до, и;:пнтноирсаани л их с детокспка- цисй токси::о п анатоксин с помощью формалина, используют стафилококки, аы- деленные от птиц, больных стгфилокскко- зсм, и обгорающие тс: сигег:ными и илэзмокоигу.мрующими СЕОЙСТОЗМИ, которые выращ..;,07 на ;: идкой о течение 7--10 дней при. 23- 100С до 5-7 г.рд. микробных клеток i; . мл с последуете.) стерилизацией микроорганизмов при 85-100°С s течение 1,0-1,5 ч и дзтоксикац ей токсина 0,6-0,8%-ны.м формалином при 45-53°С з течение 7-10 дней, а готовый препарат применяют двукратно с интервалом 7-10 дней путем аэрозольного распыления в течение 40 мин для цыплят 10-20-днесного возраста из расчета 1.0-1,2 л зматоксмн-сакцины на один птичник с объемом 5000 .

В связи с устойчивостью стафилококкового токсина к киппчениго дотоксикзцию токсина формглином прссодлт при 45-55°С после предларительнсй стерилизации мик- роорганизмоз пои 85-100°С в течение 1,0- 1,5 ч длг. полноты инактивации стафилококков и сыдслег:и.ч зндокснна при оодяо-тсрмическом гидропмзэ культур.

Ре:- .пм сторилиссции стафилококков способствует уселимо.ию комплекса токсина-протеина и iionv.CcXDpii cs з хультуроль- нсй жидкости до 0,0-0,7 мг/мл вместо 0,20-0,25 до аптоклзспроп.ания м поаыше- н . ю биологической активности препарата.

Отличительная особенность приготовления и зорсзсь омии сгссоЗ применения знатоксик-оакцины вместо трзд/ц юнного подкожного и внутрнкохного ппздения предотвращает 95-97% поголовья цыпллт 10-30-ди5спсго возраста от соозлевания ста:Ьилс;:с:: ;эог:..1.

П р и г е р 1. Одног ре- .эико rpviroTor:iv- ли ммсо;;гз:-::: ;,.;ээтну о и синтетическую cpe,-j с 5% уг.ор-..стсго лптрмя, а горном с..учг- с 1% г.,1. о о старом с мО мл гл1,цс:;;;:-и. .ци о ср:д устанаоли- амми-:.-;л. -о РСОХ случаях до 7,7-7,8 , з;похл пиро ; :;л. Для ПСС-ГСУ :с питятспь- ныеср г . , ::.я1.зу.-)т тсохоугсч ую f. -iitc t- ную кулм1;, ру рд.лпчних штаммса

CTC J -H/icKOKKOoSt.aur&n St.epldprriilflls. вы- ращцнную по флп: смах.

Рост стафилококков ссех средах проходит (,урно з течение 5 -Ч дней: ил средгэх с

слхлрами п основном прекращается, з с глицерином продолжается до концентрации 10- IF5 млрд. :i i мл. Реакция культурэльной :хидкости с взвесью стафилококков после семидневного инкубировэния составляет в

средох с сгхарами 6,2, о с глицерином - 6.8. П р и м е р 2. Выраженные в течение 7-10 дней стафилококки на жидкой питательной, средг подооргнуты прогресанию при85-100°С а течение одного часа с последующим добавлением формалина до 0,7%- ной концентрации формальдегида для детоксикации токсина в анатоксин при 45- 55°С п течение 7 дней. Перед аэрозольным распылением к общему объему стафилококковой анатокспн-пакцины добавлен глицерин. Аэрозольное распыление анатоксин-вакцины проведено двукратно с интервалом 7 дней по 1 л препарата на одну обработку в течение 40 мин. Заболевания цыплят стафилококкозом не отмечено.

Сохранность птицы, вакцинированной стафилококковой анатоксин-вакциной, составляет 97% при увеличении привесов на 15%. Однако при комиссионной проверке и убоз выращенной птицы выявлено 15 голов

с паткартиной, характерной для стафило- .коккоза.

Прим е р 3. После семидневного инку- бирооанил стафилококков на мясоказеино- гидролизатной среде с глицерином

суспензию микроорганизмов подвергают стерилизации при 100°С в течение одного часа и детоксикации 0,7%-ным формалином при 55°С в течение 7 дней.

После проверки на стерильность, отсутствие аллергенных и аллергизирующих свойств на морских свинках суспензию анатоксин-вакцины используют для двукратного с интерпалом 7 дней аэрозольного распыления Б течение 40 мин из расчета

1,0 1,2 л на птичник с 40 тысячами цыплят 15-дмевного возраста. Заболеваемость птиц стафилококкозом и падэж от него в среднегл составляет 50-75 голоо по каждому птичнику.

Пример 4, Культивирование стафило- коккоз проводят на жидкой питательной сродо с глицерином в течение 7 дней до концентрации 5 млрд. микробных клеток в 1 мл. Для получения анатоксин-вакцины суспенснпо стафилококков инактивируют при 35°С в течение 1,5 ч, з затем проводят де- толСикацию 0,5%-пым раствором формалина при 45°С а течение 10 дней.

ПОСЛО nj iO :pKH H3 .10. ИЛЫ 1 Л Л Ь, ТОКСИЧНОСТЬ iij ,кгг перед .-i.-poiio/ibiiiiM распылением разводят v- рэстпором с 5%-ным глицэри -:ом в сое. ошении 1:5. Аэрозольмое распыленно проводят в течение 40 мин и. ргг.чотэ 1.6 /: Н;:ТИЕР СЙ исходной знатоксмн-пжцины HI о/тик птичий объемом COO MJ с 40 тмсячоми цыплят 15 дневного возраста.

Повторную оРрзботку проводят через 10 дней. Згболегянне и отход цыплят от стафилококкоз« после применения стафилококковой анзтохсин-ваг.ц .ши составляет 1,7%. При применении янатокс.им-пакцикы отрицательного г-.лилния препарата но отмечено, цыплята грибззляютн сесенэ 12-16% больше по сравнению с контрольными.

П р и м с р 5. Стафилококковую культуру выращивают на жидкой питательной среде с глицерином в течение 10 дней до 7 млрд. микробных клеток в 1 мл подвергают стерилизации при 100°С в течение одного часа, для детоксигяцни добавляют формалин до 0,7%-ной конечной концентрации. Детокси- кацию проводят при 55°С п течение 7 дней. После проверки на стерильность, отсутствие перехода анатоксина вновь в токсин, препарат использован для двукратного с интервалом 10 дней аэрозольного распыления из расчета 1,5 л на один птичник объемом 5000 м с 40 тысячами цыплят 20-дневного возраста. Перед распылением препарат разводят физрзстсором с 5% глицерина в соотношении 1:5, Защитный эффект от стафилококкоза анатоксин-вакцины составляет 97,5%.

П р и м с р 6. Для выращивания стафилококков используют мясоказзиногидроли- эатную и синтетическую среды с глицерином без подали углекислоты и кислорода. Стафилококки культивируют при 38СС в течем1 ; 10 дней, суспензию стерилизуют при 10Э°С е течение одного часа. К инактивирег.снной суспензии стафилококков добавляют Формальдегид до 0,8%-ной концентрации и выдерживают в термостате при 55СС в течение 7 дней при периодическом помешивании. Ззтем пропэртют на стерильность к полноту ипакт иозци-л.

Анатоясин-закцину распыляют аэро- зольяо дважды с интерзалом восемь дней при эхспо . /u/.vi зи мин, ЗаОочеванил птицы стафилоко. г.ОоСм п течение 2,5 мое. но отмечено. Контрольное заражение 60 голоа кур (подсеять из каждого гпичникл) суспензией стафилококков (аэрозольное рзспылен /е и подкохно:1 спсд- ни;}) но иысыааот зарлха- ния и падо:.-:а птицы.

П р и м е р 7. Д-ч пыращисания п при- готослон1 я ста- и л о лс; Oiioi о апатоксинз

на синтетическсл с. глицег ипом использован штамм Si.riurcns. п лсленшШ о г больной стафилококковом птицы. На пятни день культи -ч ,;;-.-тниг накопление бактериальной массы составляет 4 млрд. микро- 5 Оных клеток п 1 мл, на седьмой день - 5 к;лрд. микробных клеток в 1 мл, а на десятый день - У млрд.микробных клого з 1 мл. В последующие дни нультисирог.ания концентрации ми;;рооргапизмоо не увеличиьоется.

0 Аатоклзвироаание при 80°С пырзще.ч- ной культуры стафи/юкоккоп не обеспечивает полную инактивацию микроорганизмов. а при режиме яптохлсвирооания 85°С в течение 1,5 ч и стерилизации 100°С в течение

5 одного часа происходит полная инзктиоа- ция микроорганизмов и максимальное выделение токсинов в культуральную жидкость.

Получение анатоксин-вакцины прово0 дят с помощью 0,8%-ного раствора формалина при 50°С в течение 10 дней. Отсутствием токсичных свойств культу- ральной жидкости проверяют путем подкожного введения ее белым мышам по

5 0,2-0,5 мл и морским свинкам - 0.80 мл. Аэрозольную обработку проводят в соответствии с примерами 2-6.

ПримерЗ. Посев маточной суспензии штамма St.aurens .выделенного от сельско0 хозяйственных животных, проводят на мл- соказеиногидролизатной среде с глицерином. На пятый день накопление бактериальной массы составляет 4,5 млрд, микробных клеток в 1 мл, на седьмой день - 5 ,2

5 млрд. микробных клеток в 1 мл, на десятый день - 7 млрд. микробных клеток в 1 мл. Получение и применение анатоксина проводят по режиму примера 7.

Таким образом, преимуществами спо0 соба получения анатоксин-вакцины против стафилококкоза птиц являются использование мясоказеиногидролизэтной или синтетической среды с глицерином без сзхэров и подачи стерильной углекислоты, термиче5 екая инактивация суспензии стафилококков, дотоксикация токсинов Формалином при -15-55°С и аэрозольное распыление препарата. Питательные среды без Сахаров при поэышенком режиме стерилизации

0 обеспечивают быстрый рост стафилококков. а последующая стерилизация ми ропргл- мизмон при 85- 1СО°С 1,0-1,5 ч способствует дополнительному выделению токсина.

5Формула изобретения

Способ получений анатсксин-н.кцины протиз стафилококкоза птиц, включающий Бьгрд 4 занне культуры ст.-ф:-.о пи- Готслыгсй среде, сторилизтц11.1 Гч омог.ги ;

7, 170SC31 8

ПОСЛСДУЮ1: CV) , еТ(ЖС:1КЈ1 . :П ТиКСМНП , КОГ.. МЛрД.МИКрП НИХ

малином. о т л н ч п -о щ ;. и с г; тем, что, с О -к - t мл, стерилизлцию проводят при

целью улрещзнич техногогг.и и ПСПЫШ НУ Йo - U j°C в течение i- t,5 ч, а де.тс-хикзцию

октивнсстп иолэзого приду: -71п, г;йрсд вырг.-ссушо тг.яяпт 0,8-0,В%-ным расгпором

щивакигм п сгсг.у дс гягют 4 о5.% глг.ио-5 форг-«пппна npvi экспозиции 45-Ь5°С а тсчерина. культуру аир8щиса:от а точение 7-10низ 7-10 дн-зй.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению анатоксин-вакцины для специфической профилактики стафилококкоза птиц, Цель изобретения - упрощение технологии и повышение активности целевого продукта. Способ заключается в выращивании стафилококков на питательной среде и инактивироаонии их с детоксикацией токсина в анатоксин с помощью формалина. Сущность изобретения заключается о том, что суспензию стафилококков, выделенных от больных стафилокок- козом птиц, после выращивания на жидкой питательной среде с 5-7% хлористого натрия и глицерином в течение 7-10 дней до концентрации 5-7 млр.микробных клеток з 1 мл стерилизуют при 85-1 СО°С Б точение 1,0-1,5 ч с детоксикацией экзо- и эндотоксинов 0,6-0,8%-ным раствором формалина при экспозиции с течение 7-10 дней. Используют аэрозольно. I, л |ХЛ С