Способ определения активности лектинов в почве Советский патент 1992 года по МПК G01N33/24 

Изобретение относится к почвоведению и может быть использовано при. изучении биохимических и химических процессов в почве.

Цель изобретения - повышение достоверности определения.

Пример. Актуальную и обменную кислотность почвы опрепеляют общепринятыми методами. Пля этого навеску почвы заливают соответственно дистиллированной водой или 1Н раствором К.С1 в соотношении 1:2,5. После 5-минутного встряхивания суспензии дают отстояться и Б пей определяют рН потенциометрическим методом. Затем готовится фосфатная буферная смесь с величиной рН, равной реакции почвенной вытяжки (водной или солевой.) . Путем дробного этанольного фракционирования из образцов почвы выделяют лектины и определяют их активность. Для этого в лунки планшета для иммуноло- гических реакций вносят по 0,05 мл приготовленного буфера, делают серию двухкратных последовательных разведении лектинов, добавляют по 0,05 мл 2%-ной суспензии трижды отмытых эритроцитов в каждую лунку и инкубируют 1 ч при 25°С. Визуальная оценка ге- магглютинирующей активности проводится по 5-Ралльнсй шкале.

Для определения активности лектинов в почве важно знание актуальной или обменной кислотности почвы, поО

о- с

31707530 она является важнейшим факто- чае, когда t

мые результа личия и явля всех изучаем лектинов, оп лотности поч сравнению с Гемагглютини

ром внешней срелы, влияющим на все биохимические процессы в почве.

Путем дробного этанольного фракционирования из образцов почвы под залежью и различными сельскохозяйственными культурами выделяют лектины (фракция, выпадающая в осадок при

кт -у t U,U1, сравниваемые результаты имеют существенные отличия и являются достоверными. Во всех изучаемых вариантах активность лектинов, определяемая с учетом кислотности почвы, существенно выше по сравнению с прототипом ( 0,01). Гемагглютинирующая способность лекти76%-ном насыщении эталоном по объему)10 нов по прототипу низкая и практичес- и определяют их активность.ки не изменяется по вариантам (2,0Реакцию темагглютинации проводят3 5 ед.).

в иммунологических планшетах. По про-При оценке по преплагаемому спосо- тотипу готовят фосфатный буфер рН7,. бу их активность меняется в широких По предлагаемому способу рН буфера 5 пределах (5,5-11,0 ед. в буфере с рН соответствует значению актуальной или волной вытяжки, 7,5-11,5 ед. в буфе- обменной кислотности исследуемых об- ре с рН солевой вытяжки), что указы- . разцов почвы, которая определяется вает на зависимость от почвенных ха- потенциометрически. В лунки планшета рактеристик.

при помощи полуавтоматического доза- 20 Все это свидетельствует о более тора вносят по 0,05 мл соответствую-высокой прстоверности предлагаемого щего буфера в смеси с физиологичес- способа по сравнению с прототипом, ким раствором (1:1). Лектины последо- Данный способ может быть легко вательно двукратно развопят в восьми. реализован в практической работе, так лунках для каждого из вариантов. Пос-25 как необходимые для его осуществле- ле добавления по 0,05 мл 2|-ной сус- ния реактивы и оборудование являются пензии трижды отмытых эритроцитов и инкубации 1 ч при 25°С, интенсивность реакции гемагглютинации оценивали по 5-б.лльной шкале. 30

В таблице представлены эксперимендешевыми и доступными.

Формула изобретения

Способ определения активности лектинов в- почве, включающий их дробное этанольное фракционирование из почвы и определение эритроагглютинирующей

тальные данные о эритроагглютинирую- щей активности лектинов в почве (в условных единицах) в зависимости от рН буфера.

Математическую обработку провоаили методом оценки существенности разности средних по t- ритерию Стькщента. При этом tfggp , равное при 1%-ном уровне существенности 4,60, сравнивалось с tqxjKT полученным при обработке экспериментальных данных. В том слу-:

0 чае, когда t

кт -у t U,U1, сравниваемые результаты имеют существенные отличия и являются достоверными. Во всех изучаемых вариантах активность лектинов, определяемая с учетом кислотности почвы, существенно выше по сравнению с прототипом ( 0,01) Гемагглютинирующая способность лекти Все это свидетельств высокой прстоверности п способа по сравнению с Данный способ может реализован в практическ как необходимые для его ния реактивы и оборудов

дешевыми и доступными.

Все это свидетельствует о более высокой прстоверности предлагаемого способа по сравнению с прототипом, Данный способ может быть легко реализован в практической работе, так как необходимые для его осуществле- ния реактивы и оборудование являются

Формула изобретения

Способ определения активности лектинов в- почве, включающий их дробное этанольное фракционирование из почвы и определение эритроагглютинирующей

способности в фосфатном буфере, о т- личающийся тем, что, с целью повышения достоверности определения, предварительно определяют актуальную или обменную кислотность почвенной вытяжки, а определение эритроагглютинирующей способности ведут в фосфатном буфере при рН, равной рН

почвенной вытяжки. I

Изобретение относится к почвоведению и может быть использовано при изучении биохимических и химических процессов в почве . Цель изобретения - повышение достоверности определения. (пя этого предвари- тельно определяют актуальную или обменную кислотность почвы общепринятыми методами, Яатем готовят фосфатную .буферную смесь с величиной РН, равной РН почвенной пыгяжки (содной или селевой). Путем дробного зта- нольного фракционирования из образцов рочвы выделяют лектины и определяют их активность, проводя реакцию гемагглютинации в им унологи- ческих планшетах в течение 1 ч прч 5 С. Визуальную оценку гемагглюти- нирук ей активности проводят по пятибальной шкале. Преимущества способа заключаются в более высокой достоверности результатов определения активности лектинов в почве. 1 табл. §