Способ определения эффективности лечения ревматоидного артрита у детей Советский патент 1992 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно педиатрии, точнее детской ревматологии, и может быть использовано для контроля эффективности лечения и прогнозирования течения ревматоидного артрита у детей.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Для достижения цели в плазме крови больных детей дополнительно определяют ai-антитрипсин (oti AT) неферментативный фибринолиз (НФ) после лечен.ия, находят отношение этих показателей к аналогичным показателям уздоровых детей.

Способ осуществляется следующим образом.

У больных утром берут кровь для исследования в пробирки с 3,8%-ным раствором цитрата натрия в отношении 1 ;9 и опрёделяютуровеньо:- АТи НФ и высчитывают отношение этих показателей к норме. Активность cti AT в Плазме крови определяли по Нивяровскому в модификации В. Е. Пасторовой.

Реактивы. 0,85%-ный раствор хлористого натрия:

плазма человека (оксалатная или цитратная) дефибринированная. Для освобождения плазмы от фибриногена ее прогревают в течение 3 мин при 56°С. После этого быстро помещают в лед;

0,2%-ный раствор фибриногена Каунасского предприятия бакпрепаратов;

плазминоген;

плазмин, полученный активацией плазминогена препаратом стрептокиназы. Приготовление. 40 кг плазминогена растворяют в 10 мл физ. раствора. В раствор плазминогена добавляют 0,1 мл стрептокиназы, содержащей 500 ед.,и инкубируют в водяной бане при 37°С в течение 10 мин;

тромбин без плазминогена (20 ед.в 1 мл) Каунасского предприятия бакпрепаратов.

Определение медленно действующих антиплазмидов «i AT. 0.2 мл разведенной

1:9 дефибринированной предварительно инкубируют с 0,2 мя плазмина при в течение 1 ч. Затем добавляют 0,2 мл 0,2%-ного раствора фибриногена и 0,1 мл тромбина, После образования сгустка отмечают время полного его лизиса. Полученное значение времени лизиса сгустка характеризует суммарный уровень антиплазминов быстро и медленно действующих. Для расчета медленно действующих антиплазминов {ai AT) из полученного значения времени лизиса вычитают время лизиса сгустка, характеризующее содержащее GS макроглобулина (% МГ) для той же испытуемой плазмы. Получают время лизиса, характеризующее уровень а AT. Уровень a AT в крови больного рассчитывают в процентном отношении от уровня этого антиплазмина в крови здорового донора, принимаемого за 100%. Например, время лизиса сгустка при определении оа МГ в крови больного 38 мин, время лизиса сгустка при определении суммарных антиплазминов равно 72 мин. Тогда, время лизиса, характеризующее только уровень ai AT будет 72-38 34 мин (у больного). Таким же образом определяют время лизиса, характеризующее уровень a AT у здорового человека -25 мин. Расчет в процентах уровня a AT у больного производят по отношению к 100% уровню здорового,

Например 25- 100 34-х X - 136%G:i AT у больного

Определение неферментативной фибринолитической активности.

Реактивы;

фибриноген бычий {Каунасского предприятия бакпрепаратов);

бромбин без плазминогена (Каунасского предприятия бакпрепаратов);

трисоксиметиламинометан (реанол);

соляная кислота 0,1 н. (фиксаналы);

натрий лимоннокислый 3,8%-ный раствор;

монойодуксусная кислота (к, ч);

Е-аминокапроноаая кислота (р-р Е-АКК годен в течение 2 ч с момента приготовления);

натрий хлористый 0,85%-ный раствор.

Приготовление реактивов,

Трис-НС1-буфер, рН 7,35. Для приготовления этого буфера готовится раствор триса 24,33 г + 1,рл Н20 и 0,1 к. HCI. Затем смешивается 425 мл 0,1 н.НС| и 250 мл р-р триса. Полученный раствор доводят до 1 л водой. Проверяют рН на потенциометре, который должен быть 7,35. Этот буфер хранится в холодильнике в течение года. Если

появились хлопья, буфер нужно отфильтровать..

0,2%-ный р-р фибриногена (20 мг фибриногена + 100 мл трис HCI буфер + 25 мл %-ный р-р хлористого натрия ), С учетом . солей фибриногена навеску взвешивать 580

МГ.

Р-р МОНОЙОДУКСУСНОЙ кислоты (150 МГ

сухой кйслогы +50,0 мл трис HCI буфера, рН

0 7,35).

Тромбин без плазминогена - 2 мг тромбина + 1 мл физ. раствора, если активность тромбина 2000 ед. во флаконе, если активность 1000 ед., то навеска тромбина 4 мг,

5 раствор тромбина готовится перед опытом. К 100 мл раствора фибриногена добавляют 40 мл монойодуксусной кислоп ы, раствор выдерживается в термостате при 37°С 15-60 мин, но не более часа (монойодуксус0 ная кислота блокирует XiИ фактор).

Приготовление фибриновых пластин. В химическом стаканчике смешивают 5 мл раствора фибриногена с монойодуксусной кислотой, добавляют 0,1 мл раствора тромбина, смешивают и быстро выливают в чашку Петри, покачивая ее. Чашку ставят на ровную поверхность стола, прикрывая крышкой, но не закрывают ее. Для полного застывания фибриногена чашка выдерживается 1 ч на столе, затем в крышку помещаются фильтровальная бумага, чашку закрывают и в таком виде она сохраняется в холодильнике при +4°С недели. Указанного количества фибриногена достаточно для

5 приготовления 28 чашек.

Приготовление образца плазмы. Цитратную кровь, взятую в соотношении 1:9, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин (бедная тромбоцитами плазма). Один

0 образец плазмы делится на 2 части: Образец плазмы X

0,05 мл плазмы

0,05 мл плазмы + 0,05 мл физ. padT5вора

0,05 мл Е-АКК 4-6%-ный р-р в физ. растворе

Раствор Е-АКК должен быть свежеприготовленный. Образцы плазмы помещают в термостат при 37°С точно на 10 мин. Чашка Петри делится на 2 части. :На левую сторону чашки капаем автоматической микропипеткой 0,05 мл контрольной плазмы (плазмы + физ,раствор)., на правую сторону чашки5 0,05 мл плазмы с Е-АКК (опытный образец). Для каждого больного готовится два образца плазмы - опытный и контрольный. Чашки с образцами пдазмы ставятся в термостат на 2 ч. Слева определяется суммарная фибринолитическая активность, справа неферментативный фибринолиз. Через 2 ч чашки вынимают из термостата и измеряют в зоны лизиса по двум диаметрам. При перемножении диаметров получают площадь зоны в мм.

Например, неферментативный фиШэинолиз ЭНФ равен 7 мм х 7 мм 49 мм . В таблице представлены результаты исследований НФ и «1 AT у детей с ревматоидным артритом.

Таким образом, отношение ai AT здорового и больного ревматоидным артритом с благоприятным течением заболевания должно быть в пределах 0.65-0,67, НФ в пределах 0,74-0,77. При неблагоприятном течении соответственно 0,40-0,42 и 0,880,93.

П р и м е р 1. Больная К-ва Б., 14 лет. Находилась в клинике института с 27 апреля 1988 по 28 июля 1988 года с диагнозом: ревматоидный артрит, преимущественно суставная форма, полиартрит, активность III ст., серонегативный вариант. Р-стадия-1. Способность к самообслуживанию сохранена. Сопутствующий диагноз: хронический гастрит в фазе умеренного обострения.

При поступлении состояние больной тяжелое за счет болевого суставного синдрома. Жалобы на скованность по утрам, ограничение движений, деформацию суставов. Заб Ьлела остро 20/11-88 г., когда появилась припухлость и болезненность правого коленного сустава. Лечилась у хирурга, но улучшения не было. Через три недели появились боли, припухлость и ограничение движений в левом коленном, лучезапястном и межфаланговыхсуставах рук.

Об-но: при поступлении состояние довольно тяжелое. Выражены симптомы общей интоксикации - вялость, утомляемость общая слабость. Кожные покровы бледные, слизистые чистые, язык влажный. Со стороны костно-суставной системы - артралгия, дефигурация, ограничение движений, при-: пухлость, повышение местной температуры над коленными, лучезапястными и межфаланговыми суставами кисти.

Данные в органах дыхания без особенностей. Границы сердца не увеличены. Тоны ритмичные, приглушены. Пульс 92 в мин. Живот мягкий, печень у края реберно)/ дуги, селезенка не польпируется. Анализ крови от 17/V-88 г. - эр. 4,4 , НВ - 134 г/л, ц.п. -0,9, ретикулоциты - 11 %, лейкоциты 8,, эозинофилы-1%, сег. 63%, лимфоциты - 29%, моноциты - 6%, СОЭ - 46 мм/ч. Протеинограмма - общий белок- 62,5 г/л. А-45,0%, Г-55,0%, «1-9,0%. «2-12%, уЗ - 15%, у - 19,0%, А:Г 0,8, Са- 2,14

ммоль/л, к - 5,8 ммоль-л, а-136 ммоль/л. холестерин - 1,17 ммоль/л, фосфор - 1,77 ммоль/л, АЛТ - 0,07 ммоль/л, ACT - 0,18 ммоль/л, билирубин - 12,0 ммоль-л. остаточный азот - 22,5 мг%,мочевина - 4,1 ммоль/л, тимоловая проба - 1,5, коагулограмма - АКТ (аутокоагулограмма) на 6 мин 19 с. на 8 мин - 15 с, на 10 мин - 19 с, АВР - 78. АЧТВ - 58, ПК - 71, ТВ - 20, фибриноген - 2,20 г/л, ШХ ф-р - 250, АТ-Ш 141,5%, лизис эуглобулиновых фракций 300 мин. Р. Ваалер-Роузе и латекс теста отрицательный.

ЭКГ- вертикальное направление электрической оси сердца. Синусовая аритмия. Признаки неполной блокады правой ножки пучка Гиса.

Больная получила лечение: преднизолон 50 мг с последующим снижением до

.12,5 мг, купренил по 1 капсуле 2 раза, эритромицин, ампиокс, витамин Bi5, нистатин, аскорбиновая кислота, оротат калия, аспаркам, индометацин, вит. А.

При исследовании фибринолиза и «i

антитрипсина отмечено: Ci AT - 300%, НФ 16мм

gi AT здорового 87,9

Отношение

«1 AT больного 300 0,2

Отношение IJ -fOEOBoro ., 3 НФ больного

т.е. первое отношение меньше 0,40, второе

отношение больше 0,93. В дальнейшем у этой больной отмечалось неблагоприятное течение болезни, что выражалось упорством признаков воспаления, прогрессированием суставных явлений, вовлечением в

процесс и других суставов.

П р и м е р 2. Больной А-ов, 14 лет. Находился в клинике КазНИИ педиатрии с 04.10.88 по 13.12.88 г. с диагнозом: ревматоидный артрит, преимущественно суставная форма, полиартрит II-ст. активности, медленно прогрессирующее течение, серонегативный вариант., R стадия А ст., Фс нарушена i ст. Сопутствующий диагноз: Хронический правосторонний мезотимпа-.

нит.

При поступлении состояние больного

средней тяжести. Жалобы на боли и дефор- мацию в мелких суставах рук и ног. Болеет в течение 5 лет. Дважды находился в КазНИИ педиатрии на лечении по поводу данного заболевания. Наследственность - у родственников со стороны матери имеются заболевания суставов (деформирующий осеоартроз).

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для определения эффективности лечения ревматоидного артрита у детей. Цель изобретения - повышение точности способа. Цель достигается за счет дополнительного исследования а;|антитрипсина и неферментативного фибринолиза в плазме крови и определения соотношения этих показателей относительно здоровых детей. 1 табл.