Способ определения стрессореактивности животных Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к биологии, медицине и ветеринарии, а именно к йммунофизиологии, и может быть использовано лля выявления степени реактивности иммунной системы животных к действию стресс-Факторов.

Целью изобретения является сокра-( щение времени анализа и сохранение , .. жизни подопытных животных. :

Способ осуществляют следуюпим образом.

В опытах используют беспородных морских свинок-самцов весом 500-550 г и крыс-самцов гетерозиготной популя-; ции Vistar с массой тела 150-180 г. Морские свинки подвергаются стрессу иммобилизацией путем жесткой фиксаций на спине, крысы - путем помещения в пенале. Кровь берут посредством . кардиальной .пункции (у крыс в ряде.

случаев из хвостовой .лены) до и на 5-й, 10-й, 15-й и 30-й минутах воздействия. Для определения показателей клеточного иммунитета используют макро- и микрометоды бласттрансфор- мации. При постановке микрометода 5 мкл. цельной крови инкубируют в планшетах на протяжении 72 ч в 100 мкл инкубационной смеси, в состав которой вводят среду Игла, гяютамин, гентами- цин, 2-меркаптоэтанол, эмбриональную телячью сыворотку. За 4 ч до окончания культивирования добавляют 1 мКи ;.Н-тимидина. Клетки осаждают на мембранные фильтры, промывают трихп-орук- сусной кислотой, этанолом. Растворимость кислотно-растворимой фракции подсчитывают методом сцинтилляцион- . ной радиометрии. Для активаций Т-лимфоцитов используют Фитогемагглютинин

О 4 Јь ОО

(ФГА) в дозе 5 мкг/мл, а для В-лимфоцитов - 100 мкг/мл липополисахари- ла (ЛПС).

Накрометод отличается от микропостановки получением лейкоцитарной взвеси центрифугированием в одноступенчатом градиенте плотности фикол - верографин. При этом клетки инкубируют в количестве (1 - 5) х 10 /мл.

Для подтверждения стресс-реакции и степени ее выраженности определяют уровень адренокортикотропного гормона (АКТГ) в крови методом радиоиммунного

анализа (РИА),.у морских свинок допол 5 ленного и племенного использования

1058 имп/мин, а при добавлении в культуру 5 мкг/мл ОГЛ 5328 имп/мин (индекс стимуляции Т-лимфоцитов составляет 5,03).

Таким образом, уже на 5-й минуте действия стресс-Фактора индекс стимуляции бласттрансформации лимфоцитов снизился на 48%. Следовательно, ис- .. следуемое животное обладает высокой степенью реактивности иммунной системы .

Способ позволяет проводить отбор- животных, предназначенных для промыт

Изобретение относится к области медицины, а именно к физиологии, . , и может быть использовано для определения стрессореактивности животных. Цель изобретения - сокращение времени анализа и сохранение жизни подопытных животных, (ивотных подвергают стрес- сируютчему воздействию путем иммобилизации, затем берут кровь и определяют в ней уровень бласттрансфотэма- ции и при увеличении этого уровня до 30% в пробе крови, взятой после иммобилизации, по сравнению с уровнем в пробе, взятой до иммунизации, определяют высокую стрессореактивность, а. при уровне ниже 30% - низкую стрессор еактиБНость. По сравнению с прототипом сокращается время анализа на 235 мин, при этом подопытные животные остаются живыми.

нительно определяют концентрацию кор- тизола в сыворотке .крови (наборы Института биоорганической химии, г. Минск).

Пример. Животных содержат в 20 течение 7 дней ПРИ световом режиме день: ночь 15:12 ч в условиях, максимально приближенных к комфортным, после чего берут из хвостовой -вены 10 мкл крови и вносят ее в культу- 25 ралъную среду без добавления и с добавлением ФГА. )(ивотных подвергают иммобилизационному стрессу (сажают каждое животное в пластиковый пенал) , Через 5, 10, 15 мин после начала дей-30 Формула ствия стресс-фактора берут КРОВЬ из хвостовой вены и добавляют ее в заранее приготовленные планшеты с культу- ральной средой без и с добавлением ФГА. По окончании забора крови обрабатывают хвост йодом и возвращают крысу в привычные условия, предварительно пометив ее.

Пробы инкубируют в термостате при 37°С в течение 72 ч. За 4 ч.до окон-1 40 чания инкубации вносят 1 мКи 5Н-тими- дина. После окончания инкубационного периода пробы переносят на мембранные фильтры, которые затем промывают три35

при интенсивных условиях содержания с учетом реактивности иммунной системы, которая является одной из составных частей специфической резистент- ности и таким образом предотвращает отсутствие эффекта от вакцинации -и других ветеринарных мероприятий, ис-, ключает -выбра.ковку животных задолго до истечения срока продуктивного периода.

Предложенный способ позволяет сократить время анализа на 235 мин и сохранить жизнь подопытных животных.

изобретения

Способ определения стрессореак- тивности животных, включающий воздействие стрессором на животного, забор крови до и после воздействия с последующим ее исследованием, о т л и- ч а ю щ и и с я тем,, что, с целью сокращения времени анализа и сохране- ния жизни подопытных животных, в.качестве стрессора используют ограничение подвижности животного, а в пробах

крови после ее забора определяют уровень бласттрансформации лимфоцит тов и .при снижении уровня бласттранс- хлоруксусной кислотой, этанолом, за- - 45 формации до 30.% в пробе крови после ливают сиинтилляционной жидкостью ивоздействия стрессора по сравнению с

подсчитывают радиоактивность кислотно-растворимой фракции.

Спонтанный синтез ЛИК до возденетпробой до его воздействия определяют высокую стрессореактивность животного, при уровне бласттрансформации

Формула

при интенсивных условиях содержания с учетом реактивности иммунной системы, которая является одной из составных частей специфической резистент- ности и таким образом предотвращает отсутствие эффекта от вакцинации -и других ветеринарных мероприятий, ис-, ключает -выбра.ковку животных задолго до истечения срока продуктивного периода.

Предложенный способ позволяет сократить время анализа на 235 мин и сохранить жизнь подопытных животных.

изобретения

Формула

Способ определения стрессореак- тивности животных, включающий воздействие стрессором на животного, забор крови до и после воздействия с последующим ее исследованием, о т л и- ч а ю щ и и с я тем,, что, с целью сокращения времени анализа и сохране- , ния жизни подопытных животных, в.качестве стрессора используют ограничение подвижности животного, а в пробах

пробой до его воздействия определяют высокую стрессореактивность животного, при уровне бласттрансформации