Способ определения модифицированных липопротеидов крови Советский патент 1992 года по МПК G01N33/92 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии и терапии.

Цель изобретения - упрощение способа за счет сокращения стадий.

Цель достигается путем злектрофорети- ческого разделения липидов из фракций крови после центрифугирования 8% ПЭГ- 6000 преципитатов при 2800 g и ультрацентрифугирования 8% ПЭГ-6000 преципитатов

при 25000 д.

Способ осуществляют следующим образом.

К1 мл сыворотки крови добавляют 40 мл 8% ПЭГ-6000. инкубируют 1ч при комнатной темперагуре и центрифугируют 40 мин при 2800 д. Часть полученного супернатанта повторно центрифугируют 40 мин лри 25000 д .Осадок дважды промывают по 0,25 мл раствора преципитата после первого и второго центрифугирования используют для электрофоретического исследования.

- Приготовление Судана Б: 400 мг суда- на Б растворяют в 20 мл этиленгликоля на

кипящей бане в течение 50 мин, фильтруют и хранят в стеклянной посуде;

-приготовление геля агарозы: 320 мг агарозы А фирмы Сигма растворяют в 20 мл воды при кипячении, затем помещают в термостат при +55° С; добавляют 20 мл раствора альбумина (1 г альбумина в 200 мл веронал-мединалового буфера, рН 8,6).3 мл геля агарозы наносят на обезжиренное горизонтально установленное стекло.помещают металлический стержень 20x2 мл. который при застывании геля убирают магнитом;

-к 0,25 мл раствора преципитата 8% ПЭГ-6000 добавляют к раствору красителя

.Судана Б, помещают на 1 ч в темное место, затем добавляют 0,2 мл горячего раствора геля агарозы, смешивают, прогревают при 55° С и подогретым наносят в желобок геля;

-предметное стекло помещают в камеру для электрофореза слоем агарозы вниз, электрофорез проводят в течение 1 ч при напряжении 100 В, силе тока 40-45 мА;

-электрофореграмму фиксируют в 5%- ном растворе уксусной кислоты в течение 1 ч, затем высушивают между листами фильт(Л

С

XI

ю

О

о ел

ровальной бумаги, непрерывно смачивая 96%-ным этиловым спиртом,

П р и м е р 1. Больной Г., м., 54 года, поступил в НИИК ТНЦ АМН СССР 20.12.84 г. с жалобами на сжимающие боли за грудиной при ходьбе. Болевые приступы бывают до 10 раз в день, снимаются нитроглицерином.

На ЭКГ: рубцовые изменения в области верхушки и передней стенки левого желудочка.

Результаты лабораторного обследования, ммоль/л: общий холестерин крови 4,3; триацилглицериды 0,7; ХМ ЛПВП 1,54.

При электрофорезе 8% ПЭГ-600 преципитатов крови выявлены/3-ЛП (ЛПНП). Дополнительно проведено электрофоретическое определение липопротеидов в 8% ЛЭГ-6000 прицепитатах после двойного ультрацентрифугирования (при 18000 об/мин и 30000 об/мин). Выявлены а-ЛП (модифицирован ные формы ЛПВП).

Диагноз: ИБС, стенокардия напряжения, ФК 111, в крови присутствуют модифицированные ЛПВП.

П р и м е р 2. Больной Н., м., 55 лет, поступил-в НИИК ТНЦ АМН СССР 13.02.85 г. с жалобами на сжимающие боли за грудиной, иррадиирующие в левую руку. Боли усиливаются при ходьбе.

На ЭКГ: ритм синусовый, 70 ударов в 1 мин, косовосходящая депрессия ST: вУз-5,Н Т в AVL, V3, V4, Vs .

Результаты лабораторного обследования, ммоль/л: общий холестерин крови 4,5; триацилглицериды 1,16; ХС ЛПВП 1,03.

При электрофорезе 8% ПЭГ-6000 преципитатов крови выявлены (ЛПНП). Дополнительно проведено электрофоретическое определение липопротеидов в 8% ПЭГ-6000 преципитатах после двойного ультрацентрифугирования (при 18000 об/мин и 30000 об/мин). Выявлены G-ЛП (модифицированные ЛПВП),

Способ применен у 62 больных ИБС и у 19 пациентов позволил выявить модифицирование ЛПВП.

Примерз. Больной М., м., 64 г., поступил в НИИК ТНЦ АМН СССР 17.01.85 г. с жалобами на одышку в покое, сердцебиение, колющие боли в области сердца. Боли не купировались приемом анальгетиков. На ЭКГ-мерцание предсердий, ЧСС 103 удара в 1 мин, тахисистолическая форма, признаки гипертрофии левого желудочка, желудочковая экстрасистолия.

Результаты лабораторного обследования: активность А в АГ - 0,3 ммоль/мг; АлАТ - 0,74 ммоль/л.ч.; ХСобщ - 7,8

ммоль/л; ТАГ-0,93 ммоль/л; ХС ЛПВП-0,9 ммоль/л. При электрофорезе липопротеидов в геле агарозы выявлены/ -ЛП и пре- fl -ЛП после диссоциации 8 % ПЭГ-6000 преципитатов крови.

Дополнительно проведено определение модифицированных форм ЛПНП и ЛПОНП без диссоциации 8% ПЭГ-6000 преципитатов крови; выявлены/ -Л П и пре-/ -ЛП.

Диагноз: ИБС, стенокардия, напряжения ФКН-1И; в крови больного присутствуют модифицированные ЛПНП и ЛПОНП.

Пример 4. Больной Т., м,, 56 лет, поступил в НИИК ТНЦ АМН СССР 21.02.85

г. с жалобами на колющие боли в области сердца, возникающие после физического напряжения, одышку.

На ЭКГ: вертикальное положение оси сердца, ритм синусовый, 80 ударов в 1 мин,

ишемия передней стенки левого желудочка. Результаты лабораторного обследова- ния: ХСобщ - 6,8 ммоль/л:ХС ЛПВП - 1,4 ммоль/л; Т АГ - 0,75 ммоль/л. При электрофорезе пипопротеидов в геле агарозы выявлены/3-ЛП после диссоциации 8% ПЭГ-6000 преципитатов крови.

Дополнительно проведено определение модифицированных форм ЛПНП и ЛПОНП без диссоциации 8% ПЭГ-6000 преципитатов крови.Выявлены/3-ЛП.

Диагноз: ИБС, стенокардия напряжения ФК I; в крови больного присутствуют модифицированные ЛПНП и ЛПОНП.

Способ применен у 57 больных ИБС и у

29 из них позволил выявить модифицированные ЛПНП и ЛПОНП.

Формула изобретения Способ определения модифицированных липопротеидов крови путем Инкубации

сыворотки крови с красителем с последующим электрофоретическим разделением и выявлением фракций липидов, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа стадий, сыворотку крови перед инкубацией обрабатывают 8%-ным раствором ПЭГ- 6000, смесь центрифугируют 40 мин при 2800д, отбирают супернатант, часть его повторно центрифугируют 40 мин при 25000 д,

полученный супернатант и супернатант после первого центрифугирования раздельно инкубируют с красителем, разделение проводят в геле агарозы на пластинах, при этом в пробах супернатанта после первого центрифугирования определяют модифицированные липопротеиды высокой плотности, а после второго центрифугирования - модифицированные липопротеиды низкой и очень низкой плотности.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии, терапии для определения модифицированных липопротеидов крови у больных ишеми- ческой болезнью сердца. Цель изобретения - определение упрощения способа. Цель достигается путем электрофоретического определения модифицированных липопротеидов крови после центрифугирования и ультрацентрифугирования 8% ПЭГ-6000 преципитатов.