Устройство для электрофореза на вертикальной пластине геля Советский патент 1992 года по МПК G01N27/453 

Изобретение относится к исследованию химических свойств веществ, а именно к биофизическим приборам, предназначенным для разделения смесей макромолекул, имеющих заряд, может быть использовано в биохимической, медицинской, фармацевтической и сельско-хозяйственной промышленности, а также найти применение в биохимии, биофизике, генетике, микробиологии и микробиологии, и является усовершенствованием изобретения по авт.св. № 966578.

Наиболее близким к изобретению является аппарат для электрофореза в вертикальной пластине геля. Его основу составляет особая конструкция гелевой ячейки, состоящей из U-образной рамы, двух стекол, U-образного вкладыша, толщина которого определяет толщину геля, и герметизирующих элементов.

Недостатком аппарата является то, что нередко электрофоретическая картина одного и того же образца,, разделяемых в разных гелевых ячейках одного и того же прибора, может отличаться. Это выражается в разной длине пробега разделяемой смеси, что может быть обусловлено разными длинами концентрирующих и разделяющих гелей. Для того, чтобы сравнить получаемые результаты необходимо проводить подсчеты величин относительно электрофоретической подвижности каждого компонента. Еще большие трудности возникают при совмещении локализации зон ферментативной активности на одних гелях с белковыми зонами этого же препарата на других гелях, хотя разделение проведено в одном и том же аппарате и в одно и то же время.

Целью изобретения является улучшение качества разделения биополимеров.

Поставленная цель достигается тем, что устройство для электрофореза содержит

(Л

С

4

Ю

Ј О 00

ю

корпус с гелевой ячейкой, выполненной в виде U-образной рамы, в которой установлены прямоугольные пластины с герметизирующими элементами.

Между стеклами установлены перегородки, выполненные в виде пластины прямоугольной формы с вырезом в верхней ее части, причем справа и слева с обеих сторон этой пластины по всей ее высоте установлены дополнительные прокладки толщиной соответственно толщине разделяющих гелей, как например, 0,5; 1,0 1,5 или 2,0 мм, а на нижнем крае задней прокладки по всей ее ширине установлена пластина размером 5x5 см.

С целью обеспечения равномерного распределения компонентов анализируемой смеси в процессе разделения верхний край прямоугольного выреза пластины имеет заточку. Угол заточки значения не имеет.

При использовании устройства такой конструкции достигается то, что пространство между стеклами гелевой ячейки на определенном уровне (в за исимости от условий эксперимента) де/.ится на две или три равноценные емкости, сообщающиеся между собой и в нижней части (сообщающиеся сосуды). Таким образом, если между стеклами залить разделяющий гель и его заполиме- ризовать, то по закону сообщающихся сосудов можно получить два или соответственно три абсолютно идентичных разделяющих гелей. Приготовленный концентрирующий гель в этом случае может быть общим для полученных разделяющих. Использовать большее количество разделяющих гелей нецелесообразно, так как в этом случае эффективность охлаждения гелевых пластин, находящихся в центре, резко падает, что отрицательно влияет на процесс разделения, .особенно при анализе множественных молекулярных форм ферментов.

На фиг.1 изображено устройство, общий вид; на фиг.2 и 3 - то же, вид сбоку и сверху соответственно.

Устройство состоит из прямоугольной перегородки 1, выполненной из оргстекла, толщиной до или 1 мм. По верхнему краю этой перегородки делается прямоугольный вырез2. Верхний край выреза заточен по обе стороны (угол заточки не имеет значения), его основное предназначение - равномерное распределение компонентов анализируемой смеси по разделяющих гелевым пластинам. Справа и слева по обеим сторонам перегородки приклеиваются прокладки 3 такой толщины, которые

необходимы для получения разделяющих гелей (0,5; 1,0; 1,5 или 2,0 мм). К нижнему концу задней прокладки по всей ее ширине приклеивают пластинку 4 размером 5x5 мм.

Гелевую ячейку с предлагаемым устройством для полимеризации и синхронного разделения биополимеров собирают следующим образом.

В U-образную раму стандартной гелевой ячейки аппарата вставляют переднее стекло, на него укладывают предлагаемое устройство, затем вставляют заднее стекло так, чтобы его нижний конец опустился на пластинку 4 предлагаемого устройства.

Спереди и сзади стекла герметизируют. В образовавшиеся сообщающиеся сосуды заливают смесь для полимеризации. В каждом из полученных сообщающихся сосудов наслаивают воду для снятия поверхностного

натяжения и выравнивания гелевой поверхности. После окончания полимеризации и удаления воды аналогичным образом заливают смесь для полимеризации концентрирующего геля. Затем задний

герметизирующий элемент снимают и вставляют по бокам между стеклом и U-образной рамой ячейки две эластичные прокладки как это предусмотрено в известном аппарате.

С помощью предлагаемого устройства

можно проводить синхронное электрофоре- тическое разделение смесей различных макромолекул, имеющих заряд, в двух или трех плоскопараллельных абсолютно идентичных разделяющих гелевых пластинах. Благодаря равномерному распределению компонентов анализируемой смеси между разделяющими гелями устройство позволяет точно совместить зоны ферментативной активности на одних гелях с белковыми зонами на других гелях и таким образом выявить точную локализацию изучаемого фермента в белковой смеси. Кроме этого, по сравнению с базовым

объектом предлагаемое устройство позволяет сэкономить в 2-3 раза время, затрачиваемое на разделение, расход реактивов, необходимых для получения как разделяющих, так и концентрирующих

гелей, а также расход электроэнергии.

Формула изобретения

Устройство для электрофореза на вертикальной пластине геля по авт.ев, № 966578, отличающееся тем, что, с целью повышения качества разделения, ге- левая кассета дополнительно содержит по крайней мере одну вертикальную перегородку прямоугольной формы, установленную с зазором относительно дна разделительной камеры,.причем верхний край перегородки расположен ниже заточен под острым углом.

уровня геля и

Изобретение относится к разделению смесей макромолекул, имеющих заряд. Цель - повышение качества разделения. Для этого предлагаемое устройство содержит электродные сосуды с электродами и разделительную камеру с гелевыми кассетами. Гелевая кассета содержит по крайней мере одну перегородку прямоугольной формы, установленную с зазором относительно дна. Верхний край перегородки расположен ниже уровня геля и заточен под острым углом. 3 ил.

/

3 3

ШД

Г 7 Гх

/

7

/

Фиг.1

Л

J

-J

Фиг. 5