Способ стабилизации уриказы Советский патент 1992 года по МПК C12N9/06 C12N9/96 

Изобретение относится к энзимологии, конкретно к способу стабилизации фермента уриказы, катализирующего распад пуринов и используемого в составе анализаторов для определения концентрации мочевой кислоты в биологических жидкостях организма.

Известен способ стабилизации урикэзы путем добавления к ферменту сульфита натрия (Na2SOs), причем на каждые 1000 ед. уриказы добавляют 10--30 мМ №2$0з.

Однако .этот способ не позволяет сохранять активность уриказы в водном растворе более 10 ч. Кроме того. №аЗОз легко окисляется на воздухе и растворы фермента при этом быстро желтеют.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения стабилизированной уриказы, согласно которому в качестве стабилизаторов используют серосодержащее соединение - сульфит натрия из расчета 10-20 мМ на 10000 ед уриказы и комплексообразующее соединение - динат- риевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (Маа-ЭДТА) из расчета 1-2 мМ на 10000 ед. уриказы.

Недостатками известного способа являются непроизводительное время сохранения активности уриказы в водном растворе при 4-6°С - не более 1 сут, а также быстрое пожелтение раствора при хранении.

Цель изобретения - увеличение сроков хранения уриказы.

Поставленная цьль достигается тем, что согласно способу стабилизации уриказы, включающему растворение уриказы в щеXI

СО О

Ј С7

лочном водном растворе при температуре 4-6°С, добавление комплексообразующего и серосодрежащего соединений и перемешивание смеси, рН щелочного раствора устанавливают 7,5-8,5. в качестве комп- лексообразующего соединения добавляют калыдий-динатриевую соль этилендиамин- тетрауксусной кислоты (тетацин-кальций) и выдерживают смесь в течение 10-20 мин, а в качестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензолсульфацета- мид натрий (сульфацил-натрия) и дополнительно 10%-ный раствор декстрана (реополиглюкин). при этом тетацин-кальций добавляют из расчета 5-10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы, сульфацил- натрия и реополиглюкин соответственно 10-12 мг и 2-4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы.

Пример1.10.мл водного раствора, содержащего 1000 ед./мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0.1 н.раствором NaOH до рН 7,5, добавляют 50 мг тетацин- кальция (5 мг/мл), смесь выдерживают 10 мин, затем добавляют 100 мг сульфацил-на- трия (10 мг/мл) и 20 мл раствора реополиг- люкина (2 мл/мл). Получают раствор, в котором активность уриказы сохраняется при 4-6°С в течение 28 сут.

Пример 2. 10 мл водного раствора. содержащего 1000 ед./мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0,1 н. раствором NaOH до рН 8,0, добавляют 75 мг тетацин- кальция (7,5 мг/мл), смесь выдерживают 15 мин, затем добавляют 110 мг сульфацил-на- трия (11 мг/мл) и 30 мл раствора реополиг- люкина (3 мл/мл). Получают раствор, в

котором активность уриказы сохраняется при 4-6°С в течение 29 сут.

Пример 3. 10 мл водного раствора, содержащего 1000 ед./мл уриказы из печени свиней, подщелачивают 0,1 н.раствором NaOH до рН 8,5, добавляют 100 мг тетацин- кальция (10 мг/мл), смесь выдерживают 20 мин, затем добавляют 120 мг сульфацил- натрия (12 мг/мл) и 40 мл реополиглюки- на (4 мл/мл). Получают раствор, в котором активностьуриказы сохраняется при4-6°С в течение 30 сут,

Формула изобретения

1.Способ стабилизации уриказы, включающий растворение уриказы в щелочном водном растворе при 4-6°С, добавление комплексообразующего и серосодержащего соединений и перемешивание смеси, о т- личающийся тем, что, с целью увеличения сроков хранения уриказы, рН щелочного раствора устанавливают 7,5-8,5, в качестве комплексообразующего соединения добавляют кальций-динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты и выдерживают смесь в течение 10-20 мин, а в качестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензолсульфацетамид натрий и в полученную смесь дополнительно вводят 10%-ный раствор декстрана.

2.Способ по п.1,отличающийся тем, что кальцийдинатриевую соль этилен- диаминтетрауксуснй кислоты добавляют из расчета 5-10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы, парааминобензолсульфацетамид натрий и декстран соответственно 10-12 мг и 2-4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы.

Изобретение относится к энзимологии, а именно к способу стабилизации фермента уриказы. Сущность изобретения заключается в том, что. с целью увеличения сроков хранения уриказы, в способе, включающем растворение уриказы в щелочном водном растворе при 4-6°С, в качестве комплек- сообразующего соединения добавляют кальций-динатриевую соль этилендиа- минтетрауксусной кислоты (I) и выдерживают 10-20 мин, в качестве серосодержащего соединения добавляют парааминобензол- сульфацетамид натрий (II) и дополнительно в полученную смесь вводят 10%-ный раствор декстрана (III). При этом I добавляют из расчета 5-10 мг/мл раствора, содержащего 1000 ед, уриказы, II и III - соответственно 10-12 мг и 2-4 мл на 1 мл раствора, содержащего 1000 ед. уриказы. Предлагаемый способ позволяет повысить стабильнсть водных растворов уриказы при4-6°С до28- 30 сут. 1 з.п.ф-лы. (/ с