Способ приготовления препаратов митотических метафазных хромосом Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к цитогенетике.

Целью изобретения является повышение сохранности клеток и большего выхода хромосом, лучшей их расправ- ляемостИо

Способ осуществляют следующим

образом.

Для приготовления препаратов мета- фазных пластинок хромосом дозы колхицина подбирают эмпирически, чтобы получить максимальный выход метафаз- ных. пластинок хромосом Колхицин в дозе, составляющей 2„5 мг на 1 кг массы животного, вводится внутрибрю- шинно за 1 ч 20 мин до забоя животного. Костный мозг из бедренной кости вымывают 0,5%-ным (0,0301М) раствором йодистого калия при объемом 10 мл, тщательно суспендируют и. культивируют на водяной бане при 37°С в этом же растворе в течение 10-15 мин„ Затем производят центрифугирование (1000 об/мин) суспензии клеток костного мозга в течение

6 мин о Надосадочный раствор йодистого калия сливают и заменяют охлажденным свежеприготовленным фиксатором, состоящим из смеси метанол - ледяная .уксусная кислота в соотношении 3:1 в объеме 4 мл0 Перед началом трехкратной фиксации клетки костного мозга тщательно суспендируют, выдерживают в фиксирующей смеси 10 мин, центрифугируют (1000 об/мин) в течение 10 мин о Препараты метафазных пластинок хромосом производят путем раскапывания клеточной суспензии с высоты 20 см с последующим высушиванием в пламени горелки„

Пример. Крыса, самец, массой 160 г Вчутрибрюшинно введен колхицин 0,4 г, растворенный в 1 мл дистилг лированной воды. Через 1 ч 20 мин животное забито методом смещения шейных позвонков. Выделение бедренной кости животности, из которой шприцем вымывают костный мозг теплым 0,5%-ным (О,0301М) раствором йодистого калия в объеме 10 мл. Костный мозг тшатель 1

:о ю

S3

чэ

ЧЭ

.но Суспендируют с помощью пастеровской пипетки и инкулируют в этом же растворе на водяной бане при 37°С в течение 15 мин„ Затем суспензию клеток костного мозга центрифугируют (1000 об/мин) в течение 6 мин, На- досадочный гипотонический раствор йодистого калия сливают и заменяют охлажденным свежеприготовленным фиксатором, состоящим из смеси метанол - ледяная уксусная кислота в соотношении 3:1 в объеме 4 мл. Перед началом каждой фиксации клетки костного мозга тщательно суспендируют. Фиксацию и центрифугирование производят трехкратно по 10 мин.

По окончании фиксации суспензию клеток костного мозга наносят на охлажденные влажные стекла с высоты 20 см. Высушивают стекло в пламени горелки. Красят препараты 0,1%-ным красителем, содержащим азур П и эозин в соотношении 1:1 по 10-15 мин, далее тщательно промывают проточной, затем дистиллированной водой, сушат на воздухе На препарате в одном поле зрения находят не менее трех-четырех пластинок метотических метафазных хромосом, пригодных для цитогенетическо- го анализа. Каждая отдельная пластинка митотических метафазных хромосом

имеет правильную форму и содержит определенное для этого вида число хромосом. В каждой метафазной пластинке хромосомы расположены отдельно одна от другой и без наложений, В пластинках митотических метафазных хромосом не наблюдается чрезмерного разброса хромосом. Также митотические метафазные хромосомы имеют размеры, приемлемые для производства цитогенетическо- го анализа, что позволяет качественно и быстро провести анализ.

Предлагаемый способ позволяет ка5 чественно и быстро провести цитогени- ческие исследования. Формула изобретения

Способ приготовления препаратов митотических метафазных хромосом путем введения раствора колхицина, вымывания и инкубации клеток костного мозга с последующей фиксацией, центрифугированием и разрушением оболочек клеток, отлича ющий- с я тем, что, с целью повышения сохранности и большего выхода клеток, инкубацию проводят в течение 10- 15 мин в 0,5%-ном растворе йодистого калия, а разрушение оболочки осуществляют путем распыления клеток с высоты не менее 20 см.

Изобретение относится к медицине, а именно к цитогенетике. Целью является повышение сохранности кле- .ток и большего выхода хромосом,, Цель достигается тем, что полученные клетки костного мозга инкубируют в течение 10-15 мин в 0,5%-ном растворе йодистого калия, а разрушение оболочки клеток осуществляют путем распыления клеток с высоты не менее 20 см„ Способ позволяет получить качественные препараты хромосом.