Способ оценки реиннервации децентрализованной почки Советский патент 1992 года по МПК G09B23/28 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, патофизиологии и трансплантологии и предназначено для оценки восстановления нервных влияний в денервированной или пересаженной почке.

Цель изобретения - повышение точности за счет неинвазивного определения восстановления иннервации децентрализованной почки.

Способ осуществляют следующим образом.

Подбирают подпороговую для интактных почек опытного организма тестовую дозу норадреналина по визуально регистрируемому изменению диуретической реакции в ответ на повторные введения в системный кровоток возрастающих микродоз норадреналина. Через месяц после денервации ин ситу или пересадки почки подпороговую для интактной почки тестовую дозу норадреналина вводят внутривенно в опытный организм на фоне индуцированного водной нагрузкой диуреза и наблюдают проявление феномена повышенной чувствительности децентрализованной почки в виде ответной анурической паузы, длительность которой регистрируют. Тестовые воздействия повторяют с заданным временным интервалом, каждый раз регистрируя продолжительность анурической паузы, и по достоверному сокращению ее продолжительности в сравнении с исход- ным уровнем и последующему полному исчезновению феномена гиперчувствительности денервированной почки к адренэрги- ческому нейромедиатору делают заключение о наступлении реиннервации ее кортикального слоя.

Точность и достоверность способа подтверждена нейроморфологическими и ней- рогормональными исследованиями денервированных и пересаженных почек в экспериментах на собаках.

Пример 1. Собаке-самцу после дегель- минтизации на протяжении 5 сут и преме- дикации за 30 мин до вмешательства под ингаляционным эфирно-фторотановым наркозом с нейролептанальгезией оперативным путем воспроизводят бесфистульную модель для исследования выделительной функции почек путем ликвидации резерву- арной функции мочевого пузыря и его запи- рательного механизма. В результате вмешательства у животного с интактными почками устанавливалось беспрепятственное непрерывное капельное мочевыделение через естественный анатомический путь - мочеиспускательный канал. После полного заживления операционной раны на 8-е сут собаке производили венесекцию сккательной вены, вводили в последнюю полиэтиленовый катетер и брали животное в павловский станок, предварительно подвесив под висячую часть уретры градуиро- ванный мочеприемник. Затем через зонд в желудок животного вводили 5%-ную от массы тела нагрузку водопроводной водой, подогретой до 37°С. После развития у животного стойкого водного диуреза при- ступали к определению субпороговой индифферентной для почек данного животного тестовой микродозы норадрена- лина. Определение начинали с введения в катетер заведомо индифферентной дозы - 0,05 мг. В условиях продолжающейся диуретической реакции поисковые пробы повторяли через 15-20 мин, каждый раз повышая вводимую микродозу на 0,05 мг, пока в ответ на очередное введение нейромедиатора не возникала хотя бы кратковременная ану- рическая пауза. Субпороговой дозой признали 0,3 мг для интактной почки данного

животного. На следующем этапе исследования собаке в условиях наркоза производили абсолютную нервную децентрализацию левой почки хирургическим и электрофорети- ческим способом, в правую интактную почку удаляли из организма. В результате моча непрерывно наружно выделялась только из децентрализованной, т.е. абсолютно денервированной почки. После заживления операционной раны животное вновь брали в станок и после стандартной водной нагрузки внутривенно ввдили установленную тестовую дозу норадреналина, в ответ на которую возникала 14-минутная ануриче- ская пауза - проявление гиперчувствительности денервированной почки к адренэргическому нейромедиатору. Тестовую пробу повторяли далее каждый месяц после предшествующей и измеряли продолжительность анурических пауз. Первые при- знаки достоверного снижения продолжительности ответа на тестовую дозу до 9 ±1 мин зарегистрировали на 7-м мес. после нервной децентрализации почки. В последующем анурическая пауза постепенно сократилась до 6 ± 0,5 мин, но так и не исчезла даже к 10-му мес. эксперимента. Сделано заключение, что спонтанная реин- нервация коркового вещества почки, дене- рированной ин ситу, имеет место, но она крайне неполноценна и неэффективна, что свидетельствует о крайне низкой степени восстановления нервных влияний в корковом веществе.

Для проверки заключения, сделанного на основании прижизненного неинвазивно- го исследования, опытное животное на 10-м мес эксперимента эвтаназировали, а опытную почку изъяли для нейроморфологиче- ских исследований. В нейрогистопограммах фронтальных срезов опытной почки обнаружено врастание через ворота органа толстых штопорообразных извитых нервных волокон до уровня наружного мозгового вещества, причем по мере удаления от почечных ворот плотность структурной иннервации почки резко снижается, а к кортикальном слое имеются только единичные нервные регенераты. Таким образом, ней- роморфологическое исследование полностью подтвердило вывод, сделанный на основании использования предлагаемого неинвазивного способа прижизненно.

Пример 2. У собаки-самца после воспроизведения непрерывного мочевыделения из интактных почек через мочеиспускательный канал с помощью бесфистульной методики определили индифферентную субпороговую тестовую дозу, норадреналина, составляющую 0,2 мг. На следующем этапе исследования правую почку у этого животного удалили, а левую с целым мочеточником пересадили на подвздошные сосуды, предварительно полностью резецировав мочевой пузырь с последующим шовным соединением мочеточника аутотрансплантата с оставшейся частью мочеиспускательного канала в над- простатическом его отделе. В результате этого моча, образуемая пересаженной ауто- почкой, непрерывно беспрепятственно вы- делялась-через наружное отверстие уретры. Первую тестовую пробу с норадреналином провели через 1 мес. - анурическая ответная пауза составила 14 мин. Последующие пробы проводили каждый месяц и даже спустя 1,5 года не наблюдали достоверных изменений выраженности феномена гиперчувствительности. Сделали вывод об отсутствии реиннервации коркового вещества гетеротопический пересаженной почки и исследовали опытную почку нейроморфо- логически для верификации прижизненно установленного топического диагноза. В нейрогистотогюграммах почечного аутотрансплантата отметили множество хаотично расположенных и причудливо извитых толстых нервных волокон в синусе и внутренней медулле, в то время как в наружном мозговом веществе обнаруживались лишь единичные нервные регенераты, а в корковом слое та ковые вообще отсутствовали. Последнее полностью подтвердило вывод, сделанный на основании прижизненного неинвазивного исследования реиннервации почечного аутотрансплантата с помощью предлагаемого способа.

Пример 3. У собаки-самца с помощью предварительно воспроизведенной бесфистульной модели определили индифферентную субпороговую дозу норадреналина и, изъяв из его организма левую интактную почку, произвели ее аллотрансплантацию в подзвдошную область другой собаки-самца, предварительно удалив у реципиента обе собственные почки и весь резервуар мочевого пузыря. Мочеточник трансплантата соединили с реципиентным мочеиспускательным каналом, в результате чего из аллотрансплантата установилось наружное мочевыделение. После завершения трансплантации произвели хирургическую реин- нервацию пересаженной аллопочки посредством имплантации в почечную паренхиму через ворота центрального отрезка подчревного нерва и паравазальных фасци- ально-клетчаточных лоскут ов с реципиент- ных сосудов.

После заживления операционной раны проверили наличие у опытного животного гиперчувствительности пересаженной ему почки к ранее подобранной субпороговой дозе норадреналина (0,25 мг). Ответная анурическая пауза составила 17 мин. Спустя месяц после пересадки тестовые пробы проверяли еженедельно. Достоверное сокращение анурической паузы по сравнению с исходным уровнем отметили в конце второго месяца - 11 ±3 мин, а на 90-е сутки зарегистрировали первое исчезнование феномена повышенной чувствительности. При этом отметили торможение стандартного индуцированного диуреза, т.е. лишь урежение капельного мочевыделения, но не ану- рическую паузу. Сделан вывод об эффективности использованного способа активной реиннервации в плане восстановления нервных влияний в корковом веществеаллотрансплантата.При

нейрогистологических исследованиях обнаружили множественные поливалентные нервные регенераты в области сосудистых полюсов клубочков и тубулярных базальных

мембран проксимальных отделов нейронов, локализующихся в корковом веществе. Там же зарегистрировано интенсивное свечение катехоламинов после обработки срезов опытного трансплантата по Фальку-Хилларпу и излучения в люминесцентном микроскопе.

Использование предлагаемого способа позволяет прижизненно и неинвазивно оценивать эффективность восстановления нервных влияний в денервированной пересаженной почке, в связи с чем способ целесообразно использовать в экспериментальной и клинической трансплантологии при разработке новых методов реиннервации почечного трансплантата.

Формула изобретения Способ оценки реиннервации децентрализованной почки, включающий выявлениефеноменаповышенной

чувствительности денервированного органа к экзогенному нейромедиатору по визуально регистрируемому изменению диуретической реакции опытной почки в ответ на введение норадреналина в организм, отличающийся тем, что, с целью повышения точности оценки за счет неинвазивного определения восстановления иннервации децентрализованной почки,

определяют субпороговую для интактной почки данного организма тестовую дозу норадреналина, спустя один месяц после децентрализации почки и далее с заданным интервалом вводят в системный кровоток на

фоне стандартно индуцированного диуреза, регистрируют в динамике наличие и продолжительность ответной анурической паузы и по достоверному ее сокращению в

сравнении с первоначальным уровнем и по-

следующему полному исчезновению феномена денервационной гиперсенсибилизации опытной почки к адренергическому нейромедиатору судят о полноте ее реин

Изобретение относится к медицине, к патофизиологии и трансплантологии, и предназначено для прижизненной оценки эффективности реиннервации децентрализованной почки. Цель - повышение точности за счет неинвативного определения восстановления инервации децентрализованной почки. Подбирают подпороговую для интактных почек опытного организма тестовую дозу норадреналина. Через, один месяц после денервации почки ин ситу или ее пересадке подпороговую для интактной почки тестовую дозу норадреналина (НА) вводят внутривенно в опытный организм на фоне индуцированной водной нагрузкой диуреза, фиксируют проявление феномена повышенной чувствительности денервиро- ванных структур в виде ответной ануриче- ской паузы, продолжительность которой регистрируют. Затем тестовые воздействия НА повторяют через различные интервалы