СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ РЕИННЕРВАЦИИ НЕФРОТРАНСПЛАНТАТА Российский патент 1995 года по МПК A61B17/00 G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, будучи предназначенной для разработки эффективных методов восстановления иннервации пересаженных почек.

Известен способ оценки реиннервации, основанный на выявлении у пересаженной почки денервационного феномена в ответ на введение в кровоток реципиента индифферентной дозы норадреналина на фоне индуцированного диуреза (авт., св. N 1734120).

Недостаток способа состоит в низкой его информативности при оценке новых методов активной реиннервации нефротрансплантатов по сравнению с ранее разработанными.

Известен также способ оценки эффективности хирургической реиннервации гетеротопически пересаженной аутопочки путем проведения сравнительных нейроморфологических исследований аутотрансплантированной и интактной почек, пребывающих до момента их изъятия в одном опытном организме (Шиошвили Т.И. Влияние неспецифических факторов на почечный трансплантат и пути снижения их отрицательного воздействия: Дисс. д-ра мед. наук, М., 1981, 482 с.) - прототип.

Недостатками прототипа являются низкая точность и неэкономичность исследования, требующего проведения серийных опытов на нескольких лабораторных животных в различные сроки в соответствии с канонами биомедицинской статистики.

Цель изобретения - повышение точности и экономичности исследования.

Цель достигается симультанной двусторонней пересадки двух антигенно идентичных почек и реиннервацией их различными методами в одном беспочечном организме с последующим комплексным нейрологическим сравнительным исследованием обоих трансплантатов в срок интереса.

Способ осуществляют следующим образом.

В организм животного-реципиента с удаленными собственными почками пересаживают билатерально на подвздошные сосуды две антигенно идентичные ауто- или аллопочки, изъятые от одного донора. После восстановления традиционных донорско-реципиентных анатомических связей нефротрансплантатов осуществляют их активную реиннервацию сравниваемыми двумя методиками и поддерживают жизнедеятельность реципиента с двумя трансплантатами до интересующего срока исследования. В последнем оба трансплантата одномоментно изымают, иссекают из каждой почки одинаковые чрезворотные и чресполюсные взаимно перпендикулярные центральные органные блоки, в кортикальных и медуллярных слоях которых определяют иннервационные индексы и внутритканевые концентрации нейромедиаторов.

По результатам сопоставления полученных соответствующих параметров делают заключение о степени эффективности оцениваемой методики реиннервации по сравнению с другой.

П р и м е р (реализация способа).

У собаки массой 28 кг в условиях наркоза изымали правую и левую почки, которые помещали в раствор Коллинза для бесперфузионной консервации. После подготовки обеих реципиентных подвздошных зон обе почки пересаживали билатерально ручным способом на подвздошные сосуды. После включения в кровоток правую почку-трансплантат реиннервировали имплантацией в ее пазуху подчревного нерва, а левую - аналогично имплантацией контрлатерального нерва в сочетании с внедрением в пазуху ворот по ходу артерии и вены соответствующих паравазальных фасциально-адвентициальных лоскутов, выкроенных с поверхностей реципиентных подвздошных сосудов. Мочеточники обоих трансплантатов соединяли с мочевым пузырем методом субмукозного тоннелирования. На 90-е сутки посттрансплантационного периода под наркозом произвели двустороннюю битрансплантатэктомию и тотчас иссекли из обеих изъятых почек "центральные" взаимно перпендикулярные чрезворотные и чресполюсные блоки, которые разделяли пополам соответственно для количественных нейроморфологических и нейромедиаторных внутритканевых исследований, отделив в последнем случае кортикальный и медуллярный слои. Половинки блоков для нейрогистотопографических исследований фиксировали жидкостью АФА и готовили из них толстые замороженные срезы, обрабатываемые затем азотнокислым серебром по Бильшовскому-Гросс и флюоресцентным методом по Фальку-Овману для количественного определения иннервационных индексов. В оставшихся половинках оставшихся органных блоков острым путем отделяли друг от друга кортикальный и медуллярные слои, замораживая иссеченные кусочки тканей жидким азотом. После этого в навесках замороженных тканей определяли концентрации норадреналина как маркера преобладающей в почке симпатической иннервации. Результаты парных сопоставлений соответствующих параметров в обоих трансплантатах показали, что достоверные различия величин имеют место только в "полюсных" тканевых блоках трансплантата, реиннервированного подчревным нервом в сочетании с использованием симпатических паравазальных сплетений. При этом во всех тканевых зонах, особенно в наружно-медуллярной иннервационные индексы, составили 0,18-0,09 против 0,0 в соответствующей зоне контрлатерального трансплантата. Концентрации же норадреналина оказались соответственно 620 ± 30 пг/мг и 480 ± 40 пг/мг ткани.

На основании результатов проведенного сравнительного исследования эффективности двух методик реиннервации сделано заключение о достоверно большей эффективности способа с использованием паравазальных фасциально-адвентициальных лоскутов, поскольку она обеспечивает больший объем структурной реиннервации и более высокий уровень нейромедиации в полюсных блоках нефротрансплантата и, следовательно, во всей пересаженной почке в целом.

Применение способа обеспечивает стандартизированное точное исследование двух сравниваемых методик реиннервации на предмет их большей или меньшей эффективности, а также позволяет делать корректные заключения на этот счет при использовании минимального количества экспериментальных объектов, что соответствует о достижении поставленной цели.

Способ точен и экономичен и может быть использован при разработке эффективных методов реиннервации почечных трансплантатов для повышения аргументированности внедренческих рекомендаций для клинической нефротрансплантологии.

В беспочечный организм реципиента пересаживают билатерально на подвздошные сосуды две антигенно идентичные (ауто- или алло- ) почки (от одного донора), реиннервируют их сравниваемыми способами,и после одномоментного изъятия обоих трансплантатов в срок интереса иссекают из каждой почки одинаковые чрезворотные и чресполюсные взаимно перпендикулярные "центральные" органные блоки, в кортикальном и медуллярных слоях которых количественно определяют иннервационные индексы и внутритканевые концентрации нейромедиаторов, по результатам сопоставления величин соответствующих параметров делают заключение о большей или меньшей степени эффективности оцениваемой методики реиннервации. Способ целесообразно использовать в трансплантологии при разработке эффективных методов коррекции денервационных нарушений в пересаженной почке.

СПОСОБ ОЦЕНКИ ЭФФЕКТИВНОСТИ РЕИННЕРВАЦИИ НЕФРОТРАНСПЛАНТАТА, включающий гетеротопическую пересадку почки в таз с активным восстановлением ее иннервации и нейроморфологическое исследование изъятого в посттрансплантационном периоде опытного органа, отличающийся тем, что пересаживают билатерально на подвздошные сосуды в беспочечный реципиентный организм две антигенно идентичные почки от одного донора, реиннервируют их сравниваемыми способами и после одномоментного изъятия обоих трансплантатов в срок интереса, иссекают из каждой почки одинаковые чрезворотные и чресполюсные взаимно перпендикулярные центральные органные блоки, в кортикальном и медуллярном слоях которых определяют иннервационные индексы и внутритканевые концентрации нейромедиаторов, и по результатам сравнительного сопоставления величин соответствующих параметров двух почек делают заключение о степени эффективности оцениваемой реиннервации.