Способ подготовки эпителиальных клеток желудочно-кишечного тракта к исследованию Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии.

Целью изобретения является получение большего выхода клеток и их лучшей сохранности.

Способ осуществляют следующим образом.

Получают биоптат желудочно-кишечного тракта, извлекают, промывают в человеческой сыворотке группы АВ (IV).

Далее измельчают в чашке Петри сухими ножницами в капле человеческой сыворотки группы АВ. Затем измельченную массу фильтруют в центрифужные пробирки через капроновую сеточку с последующим смыванием остатком ткани на сетке несколько раз сывороткой. Центрифугируют в режиме 1500 об/мин в течение 10 мин. Удаляют недостаточную жидкость, оставляя небольшое количество (высотой 1-2 мм) над осадком. Полученную суспензию пипетиру- ют и раскапывают на сухое предметное стекло с последующим размазыванием капель. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют в растворе метилового спирта и ледяной уксусной кислоты в соотношении 3:1. Затем проводят гидролиз 1н. НС при комнатной температуре в течение 2 мин, затем при 60°С 6 мин. Остужают стекла при комнатной температуре и промывают дистиллированной водой. Препарат окрашивают в течение 15 мин раствором азура II и эозина.

Краска готовится перед употреблением следующим образом: 10 мл дистиллированной води, 7 капель 5%-ного Na2COs, 5 мл 0,1%-ного раствора азура II и 2 мл 0,1 %-ного раствора эозина.

При микроскопическом анализе мазок представляет собой расположенные по одиночке или группами по 2-3 клетки, из которых 80-90% с ненарушенной ядерной и цитоплазматической оболочкой. Структура ядра и цитоплазмы нормальной морфологии. Достаточно четко выявляются клеточные границы. Цитоплазма окрашена в

СО

с

х|

со ел VI со XI

синевато-сиреневый цвет (или сиреневый), ядро и микроядра - в густой синий. Микроядра представляют собой образование округлой или слегка овальной формы, диаметром 1/3 до 1/4 м диаметра ядра. Микроядра его выявляются и дифференцируются от других образований неядерного происхождения.

П р и м е р 1. Участок кишки, желудок или преджелудок промывают в растворе Хе- никса. Выворачивают слизистой оболочкой наверх и с помощью предметного стекла, делают соскоб. Соскоб помещают в 0,25%- ный раствор трипсина. Перемешивают на магнитной мешалке в течение 15 мин. Филь- труют через капроновую сеточку. Центрифугируют в режиме 3000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость удаляют. В осадок добавляют фиксатор (метанол - уксусная кислота в соотношении 3:1). выдер- живают в холодильнике в течение 15 мин. Меняют фиксатор до тех пор, пока осадок не становился белым (2-3 раза). Раскапывают на мокрые предметные стекла (по 6-8 капель на стекло). Высушивают на воздухе. Окрашивают препарат азуром II и эозином, Пои просмотре все клетки разобщены, лежат отдельно и легко анализируются.,

П р и м е р 2. Извлеченные органы желудочно-кишечного тракта промывают в че- ловеческой сыворотке группы АВ. Измельчают в чашке Петри сухими ножницами в капле человеческой сыворотки той же группы. Измельченную массу фильтруют в центрифужных пробирках через капроновую сеточку с последующим смыванием остатков ткани на сетке несколько раз сывороткой. Центрифугируют в режиме 1500 об/мин в течение 10 мин. Удаляют надосадочную жидкость, оставляя неболь- шое количество (высотой 1-2 мм) над осадком. Суспензию пипетируют и раскапывают на сухое предметное стекло с последующим размазыванием капель. Препарат высушивают на воздухе. Фиксируют в растворе метилового спирта и ледяной уксусной кислоты в соотношении 3:1. Проводят гидролиз 1 н. HCI при комнатной температуре в течение 2 мин, затем при 60.°С 6

мин. Остужают стекла при комнатной температуре и промывают дистиллированной водой. Препарат окрашивают в течение 15 мин раствором азура II и эозина.

При микроскопическом анализе препарат представляет собой расположенные по одиночке или по 2-4 клетки, из которых 80- 90% с целостной ядерной и цитоплазмен- ной оболочкой. Структура цитоплазмы и ядра нормальной морфологии. Достаточно четко выявляются клеточные границы. Цитоплазма окрашена в синевато-сиреневый или в сиреневый цвет, ядро и микроядра - в густой синий. Микроядра представляют собой образования округлой или слегка овальной формы, диаметром от 1/3 до 1/4 мм диаметра ядра. Препарат является пригодным для выявления микроядер.

Способ позволяет получить одиночные, расположенные по одной или по 2-4 клетки, из которых 80-90% с целостной ядерной и цитоплззменной оболочкой. Структура цитоплазмы и ядра нормальной морфологии. Достаточно четко выявляются клеточные границы. Цитоплазма окрашена в синевато- сиреневый или в сиреневый цвет, ядро и микроядра - в густой синий, Микроядра представляют собой образования округлой или слегка овальной формы, диаметром от 1 /3 до 1 /4 мм диаметра ядра. Препарат является пригодным для выявления микроядер и последующего исследования.

Формула изобретения Способ подготовки эпителиальных клеток желудочно-кишечного тракта к исследо- ванию путем измельчения ткани, извлечении клеток, их центрифугировании с последующим приготовлением мазков и окрашивании в красителе, отличающий- с я тем, что, с целью большего выхода клеток и их лучшей сохранности, клетки извлекают соскобом, а измельчение проводят в сыворотке крови АВ с последующим их промыванием в той же сыворотке, при этом перед окрашиванием мазки обрабатывают

Iн, HCI при температуре 60°С в течение 2-3 мин, а в качестве красителя используют азур

IIи эозин.

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологическим методам исследования. Целью является получение большего выхода клеток и их лучшей сохранности. Цель достигается тем, что клетки извлекают соскобом, а измельчение проводят в сыворотке крови АВ с последующим промыванием клеток в той же сыворотке. Окрашивание мазков полученных клеток проводят азур II и эозином. При этом перед окрашиванием мазки обрабатывают 1 Н. HCI при 60°С в течение 2-3 мин. Способ позволяет получить качественные препараты эпителиальных клеток, на которых хорошо видна структура ядра и микроядер.