Способ определения антистрессовой активности брассиностероидов Советский патент 1992 года по МПК A01G7/00 G01N21/00 

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к анализу физиологически активных веществ, и может быть использовано для определения антистрессовой активности брассиностероидов при засолении.

Известен способ определения антистрессовой активности брассиностероидов путем измерения устойчивости проростков бобов в условиях водного стресса (Zhao lu.Ju. The Yffet of 24-epibrassinollde on Stem elongation and resistance to enviromnet.alstr.ess in munig bean seedings. Тезисы международного совещания в Галле (ФРГ) Брассиностероиды-химия, биоактивность, применение, 1990, с.26).

Известен способ определения антистрессовой активности брассиностероидов путем определения общего синтеза белка в условиях повышенной температуры.

Этот способ заключается в осуществлении контакта биообьекта -тестера -листьев пшеницы, предварительно обработанных брассиностероидом, со стрессовым фактором - повышенной температурой и последующем сравнении количества образовавшегося белка с белком в необработанных листьях пшеницы.

Недостатками способа являются невозможность его использования для определения антистрессовой активности при засолении, а также его трудоемкость из-за сложности и длительности выделения белков.

Цель изобретения - получение возможности определения влияния брассиностероидов на устойчивость растений к солевому стрессу и упрощение способа.

Поставленная цель, достигается способом определения антистрессовой активности брассиностероидов путем осуществления контакта и биообьекта-тес- тера с брассиностероидом и стрессовым фактором и определения степени влияния брассиностероидов на реакцию растения, причем в качестве биообъекта-тестера используют отрезки листьев ячменя, в качестве стрессового фактора - раствор хлорида

Ј

Ч

ел о о

СА)

натрия, взятое количество отрезков листьев ячменя делят на четыре части, контакт первой и второй частей с раствором брассино- стероида осуществляют 1,5-2,0 ч, контакт третьей и четвертой частей с дистиллированной водой осуществляют то же время, затем вторую и четвертую части подвергают воздействию хлорида натрия в концентрации 0,3-0,5 М в течение 23-25 ч, а определение степени влияния брассиностероидов на реакцию растения производят по содер- жанию в них пролина срачнением между собой разниц показаний между второй частью и первой, а также между четвертой частью и третьей, где первая и третья части служат контролем.

Выбор заявляемых интервалов определяется оптимизацией всех условий способа,

П р и м е р 1, Растения ячменя сорта Винер выращивают в ящиках с почвой. У растений в возрасте 10-12 дней срезают листья первого яруса. Отбирают выравненные по размеру листья. Из них вырезают отрезки длиной 2,5 см и раскладывают по 9 штук по чашкам Петри диаметром 10 см на фильтровальную бумагу, смоченную 8 мл раствора брассиностероида, на 2 ч. Для каждого варианта опыта используют 3 чашки. При круглосуточном освещении исследуют набор концентраций брассиностероида . 106, , , . Контролем берут листья, инкубированные в 8 мл дисти- лированной воды. Через 2 ч прединкубации отрезки переносят на растворы брасси но- стероида тех же концентраций, содержащие 0,5 М NaCI. Часть контрольных листьев переносят на 8 мл NaCI. Таким образом опыт имеет три контроля: на дистиллированной воде, на растворах брассиностероида, на растворе хлористого натрия. Через 24 ч определяют содержание пролина по мето ду Bates (Bates et at., 1973, Rapid de termination of free prollne for vater-strees Studies PlantsoJI 39: 205-207). Для каждой пробы берут по три отрезка и для каждого варианта проводят по три определения. Отрезки растирают в 5 мл 3%-ной сульфосали- циловой кислоты. Полученный раствор фильтруют через фильтр Сынпор № 4. 2 мл фильтрата приливают в пробирку, содержащую 2 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл нингидринового красителя, который готовят по методу Bates. 1,25 мл нингидрина разводят в 20 мл 6 М ортофосфорной кислоты и 30 мл ледяной уксусной кислоты. Пробирки с исследуемым материалом кипятят на водяной бане 1 ч. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 522 нм против контрольного раствора.

Пример показывает, что предлагаемый

способ позволяет определить влияние брассиностероидов и их синтетических аналогов на устойчивость растений к солевому стрессу по снижению накопления пролина в ответ на солевой стресс. Результаты представлены в таблице.

Снижение содержания пролина (% от контроля) в отрезках листьев ячменя при воздействии брассиностероидов и хлорида натрия

П р и м е р 2. Проводят аналогично примеру 1 с той разницей, что контакт примера-тестера с анализируемым раствором осуществляют 1,5 ч, а опытный объект подвергают воздействию смеси растворов хлорида натрия в течение 23 ч. Результаты представлены в таблице.

П р и м е р 3. Проводят аналогично примеру 1 с той разницей, что контакт объекта-тестера с анализируемым раствором

проводят 2,5 ч, а опытный объект подвергают воздействию смеси раствором брассиностероида и хлорида натрия, либо одного хлорида натрия в течение 25 ч. Результаты представлены в таблице.

П р и м е р 4. Проводят аналогично примеру 1 с той разницей, что концентрацию хлорида натрия берут 0,3 М, Результаты испытаний представлены в таблице.

П р и м е р 5. Проводят аналогично

примеру 1 с той разницей, что концентрацию хлорида натрия берут 0,4 М.

Результаты примеров показывают, что появилась возможность определить влияние брассиностероидов на устойчивость

растений к солевому стрессу при упрощении способа.

Формула изобретения Способ определения антистрессовой

активности брассиностероидов путем воздействия на биологический тест-объект стрессового фактора и сравнения физиоло- го-биохимических показателей тест-объектов, обработанных и необработанных

брассиностероидами. отличающи йся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве стрессового фактора используют 0,3- 0,5 М раствор хлорида натрия, в качестве тест-объекта - высечки из листьев ячменя, а

в качестве физиолого-биохимического показателя определяют содержание пролина.

Использование: физиология растений, анализ физиологически активных веществ. Сущность изобретения: определение антистрессовой активности брассиностероидов проводится путем воздействия на высечки из листьев ячменя брассиностероидов и стрессового фактора 0,3-0,5 М раствора хлорида натрия с последующим определением содержания пролина в высечках из листьев ячменя, обработанных и необработанных брассиноСтероидами. 1 табл.