Способ определения микотоксинов в кормах Советский патент 1992 года по МПК G01N33/02 C12Q1/00 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к микотоксикологии.

Известен способ определения микоток- синов в кормах, который заключается в скармливании цыплятам токсического корма с последующим наблюдением за состоянием птицы.

Недостатком данного способа является длительный срок наблюдения за состоянием птицы.

Цель изобретения - идентификация вида микотоксина в корме

Цель достигается тем, что готовят водную вытяжку в режиме встряхивания в течение 4 ч, из полученной вытяжки отделяют супернатант при 17 000 об/мин в течение 15 мин и вводят курам, предварительно сенсибилизированным мицелиальными антигенами из грибов рода Aspergillus, Penicillium и Fusarlum, а микотоксин идентифицируют по наличию аллергии.

П р и м е р 1. Для исследований необходимо иметь 8 групп кур по 10 голов в каждой в возрасте 4-8 мес. Сенсибилизацию проводят путем введения полного мицелИальМого антигена внутримышечно в область киля в дозе 2,5 мл.

1-я группа кур сенсибилизирована антигеном гриба Аспергиллюс фумигатус, 2-я группа кур - антигеном Аспергиллюс фла- вус; 3-я группа кур - антигеном Аспергиллюс нигер; 4-я группа кур - антигеном Пенициллиум гризео-розеум; 5-я группа кур - антигеном Пенициллиум исландикум; 6-я группа кур - антигеном Фузариум грамина- рум; 7-я группа кур - антигеном Фузариум монилиформе; 8-я группа кур - контрольная группа, птица не сенсибилизирована, получают доброкачественный корм.

Все птицы содержатся отдельно по группам. У птиц контрольной группы отсутствуют аллергические реакции на стандартный аллерген из чистых грибов.

П р и м е р 2. Аллерген (надосадочная жидкость экстракта подозреваемого корма) вводят внутрикожно в дозе 0,1 мл в правую бородку курам каждой из 8 групп птиц, а левая служит контролем. Результаты учитыч

Ё

VJ

сл

а

О

Ј

вают через 18 ч. Наличие положительных реакций у птиц 8-ой группы свидетельствует о наличии токсинов в комбикорме, а соответствующая группа птиц указывает на вид гриба-продуцента токсинов.

По характеру аллергических реакций можно определить степень токсичности пробы комбикорма.

При отсутствии реакции на бородке кур - корм доброкачественный и скармливается без ограничений.

При сомнительной реакции - отек ограничен, бородка утолщается в 1,5-2,0 раза по сравнению с контрольной. Корм слаботоксичен и скармливается в смеси с доброкачественным (1:1).

Положительная аллергическая реакция характеризуется наличием диффузного отека, бородка увеличена, утолщается в 2-3 раза по сравнению с контрольной. Корм токсичен подвергается детоксикации или скармливается в смеси с доброкачественным в соотношении 1:3.

Резко положительная аллергическая реакция характеризуется наличием диффузного отека, увеличением бородки в 3,0-5,0 раз по сравнению с контрольной, болезненность. Корм высокотоксичен. Весь корм подвергает детоксикации или удаляется из рациона. Зависимость токсичности корма от характера аллергических реакций приведена в таблице.

Для приготовления аллергенов-вытяжек по предложенному методу можно использовано эталонные или любые полевые штаммы указанных видов грибов, обладающие выраженной токсигенностью. В пробу пораженного зерна в стерильных условиях вносим 100 мл стерильной дистиллированной воды, вначале механически встряхиваем в течение 4-6 мин, а затем колбы с содержимым переносим на аппарат Встря- хиватель и экстрагируем в течение 4 ч, По окончании экстрагирования фильтровали через ватно-марлевый фильтр, бумажный фильтр. Полученный экстракт центрифугировали при 2 режимах: 6 тыс. об/мин в течение 30 мин и 17 тыс об/мин в течение 15 мин Полученный супернатант спивали во флаконы емкостью 50-100 мл, стерилизова ли методом тиндализации Приготовленный

аллерген-вытяжку использовали для выявления токсинов грибов в кормах

Партии зернофуража (комбикорма), вытяжки из которых показали положительный результат аллергических реакций на сенсибилизированных курах, необходимо подвергнуть обезвреживанию или скармливать. смешивая с доброкачественным в соотношении 1:3 - 1:5 в зависимости от уровня его токсичности, что можно определить по характеру отека бородок у птиц.

Таким образом, можно заключить, что в предлагаемом способе применения аллергенов для диагностики микотоксикозов птиц в качестве определителя микотоксинов в

кормах повышается специфичность и эффективности аллергена, что можно проследить по степени и характеру аллергических реакций, что дает возможность выявить пораженный корм и установить вид гриба, являющегося причиной отравления и заболевания птиц.

Предлагаемый способ приготовления исключает применение растворов химических веществ для осаждения, промывания

аллергенов, что ускоряет и упрощает технологию приготовления его.

Формула изобретения Способ определения микотоксинов в кормах, включающий приготовление вытяжки из исследуемых образцов кормов с последующими введением полученного аллергена в бородку кур и оценкой результатов, отличающийся тем, что, с целью идентификации вида микотоксина, готовят

водную вытяжку в режиме встряхивания в течение 4 ч, из полученной вытяжки отделяют супернатант при 17 000 об/мин в течение 15 мин и вводят курам, предварительно сенсибилизированным мицелиальными антигенами из грибов рода Aspergilus, Penicillium и Fuzarlum, а микотоксин идентифицируют по наличию аллергии.

Изобретение относится к ветеринарной микотоксикологии и может быть использовано для определения микс-токсинов в кормах. Сущность изобретения: из исследуемого корма готовят водную выТйжку в режиме встряхивания в течение 4 ч, отделяют супернатан при 17000 об/мин и вводят курам, которые предварительно сенсибилизированы мицелйальны ми антигенами иЗ грибов родов аспергиллюс, пенициллиум, фузариум, а результат учитывают По наличию аллергической реакции. 1 табл