СПОСОБ СОЗДАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ МОДЕЛИ АЛЛЕРГИИ К ТУБЕРКУЛЕЗНЫМ АЛЛЕРГЕНАМ Российский патент 2009 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к аллергологии и иммунологии, в частности к моделированию аллергии инфекционно-аллергических болезней, и может быть использовано при титрации туберкулезных аллергенов (туберкулинов) и в учебном процессе при отработке навыков туберкулинодиагностики туберкулеза у животных и противопоказаний к ее применению.

Известны способы сенсибилизации морских свинок вакциной БЦЖ или живыми вирулентными микобактериями туберкулеза разных видов (Авербах М.М., Литвинов В.И. - Иммунологические основы противотуберкулезной вакцинации. М., Медицина, 1970. 213 с.; Фрадкин В.А. - Диагностические и лечебные аллергены. М., Медицина, 1990. 256 с.).

Существующие методы сенсибилизации лабораторных животных - морских свинок к туберкулезным аллергенам не безопасны и не включают аллергизацию других видов животных и, естественно, не позволяют проводить контроль туберкулинов и отрабатывать навыки туберкулинодиагностики и противопоказаний к ее применению.

За прототип взят «Способ моделирования туберкулезной аллергии у животных и птиц» - (А.С. СССР №1452368, 1986), включающий аллергизацию животных и птиц сенсибилизирующим средством, состоящим из 10 г сухих автоклавированных микобактерий туберкулеза бычьего вида, 10 мл 50% гидроксида алюминия, 10 мл 50% гидрата окиси магния, 10 мл минерального масла и физиологического раствора до 100 мл для подкожного введения 5 мл крупному рогатому скоту, 2-3 мл свиньям и 0,3-0,5 мл курам и морским свинкам.

Недостатком способа является высокая выраженность кожных реакций на туберкулин, завышенная концентрация гидроксида алюминия и образования гнойных абсцессов у животных из-за наличия минерального масла.

Для устранения указанных недостатков и создания безопасной биологической модели аллергии к туберкулезным аллергенам разработан состав сенсибилизирующей суспензии, состоящий из 10±2,0 мг/мл автоклавированных микобактерий туберкулеза и 1-3 мг/мл гидроксида алюминия без добавления минерального масла и гидрата окиси магния, которые вместе с липидосодержащими микобактериями (до 45%) являлись причиной образования гнойных абсцессов у животных.

Целью предлагаемого изобретения является повышение безопасности и расширение видового разнообразия биологической модели аллергии для контроля туберкулинов для млекопитающих, птиц и т.д., отработки навыков туберкулинодиагностики и установления противопоказаний к ее применению с помощью суспензии из 10±2,0 мг/мл автоклавированных микобактерий туберкулеза разных видов в гидроксиде алюминия (1-3 мг/мл) и физраствора.

Поставленная цель достигается созданием аллергизирующей суспензии из автоклавированных микобактерий туберкулеза разных видов, способной вызывать стабильную аллергию у животных к туберкулину путем однократного подкожного введения 5,0 мл крупному рогатому скоту, 2-3 мл свиньям и 0,3-0,5 мл курам и морским свинкам.

В патентной и научно-технической литературе не обнаружены технические решения, аналогичные заявляемому, что позволяет сделать вывод о новизне предлагаемого решения.

Использование 10±2 мг/мл автоклавированных микобактерий туберкулеза разных вводов (бычьих, птичьих и атипичных) в суспензии 1-3 мг/мл гидроксида алюминия в предложенном способе сенсибилизации животных для последующей титрации туберкулинов, отработки навыков туберкулинодиагностики и установлению противопоказаний к ее применению позволяет достичь эффекта указанного в цели изобретения - повышение безопасности биологической модели и расширение видового разнообразия.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Способ приготовления суспензии из автоклавированных микобактерий туберкулеза разных видов (бычьих, птичьих и атипичных) для сенсибилизации животных с целью создания безопасной модели аллергии включает измельчение в фарфоровой ступке 1 грамма убитых микобактерий туберкулеза, прибавление 1-3 мг/мл гидроксида алюминия и физраствора до 100 мл. Полученную гомогенную суспензию переносят в 10, 20 и 100 мл флаконы и подвергают автоклавированию при 1,0 атм в течение 20-30 минут.

Перед подкожным введением животным суспензию подогревают до 35-37°С.

Пример 2. Испытание аллергизирующей суспензии на безвредность. На подкожное введение суспензии из убитых микобактерий туберкулеза у 26 коров, 16 морских свинок и 12 голов свиней по истечении 30, 45 и 60 суток образований гнойных абсцессов не происходило.

Пример 3. Морские свинки массой 350±50 г в количестве 10 голов были аллергизированы подкожным введением во внутреннюю поверхность бедра 0,3 мл суспензии из автоклавированных микобактерий туберкулеза бычьего вида. По истечении 30 дней животным внутрикожно ввели по 0,1 мл стандартного раствора туберкулина для млекопитающих в разведении 1:500 и 1:1000 и раствора туберкулина - ППД для птиц в аналогичном разведении. При учете реакции по гиперемии кожи через 24 часа на туберкулин для млекопитающих в разведении 1:500 размеры воспаления составили в среднем 14±1,0 мм, а на разведении 1:1000 гиперемия достигала 11±1,0 мм, а на птичий соответственно 10±1,0 и 8±1,0 мм.

Полученные результаты позволяют дифференцировать аллергическую реактивность морских свинок, вызванную сенсибилизацией суспензии из убитых микобактерий туберкулеза бычьего вида с помощью туберкулинов для млекопитающих и птиц.

Пример 4. Сенсибилизацию 26 коров провели суспензией из автоклавированных микобактерий туберкулеза бычьего вида (1-я группа), 14 коров сенсибилизировано суспензией из убитых микобактерий туберкулеза птичьего вида (2-я группа) и 12 коров подвергнуты сенсибилизации инактивированных атипичными микобактериями (3-я группа). Через 30-45 суток и через 7 месяцев указанным животным внутрикожно ввели одновременно в среднюю треть шеи слева и справа туберкулин для млекопитающих, птиц и КАМ.

При учете реакции через 72 часа утолщения кожной складки у коров первой группы на туберкулин для млекопитающих составило 16±2,0 мм, на туберкулины для птиц - 9,0±1,0 мм и на КАМ - 6±1,0 мм.

Полученные результаты подтверждают не только активность, но и специфичность туберкулезных аллергенов.

Пример 5. Для сенсибилизации суспензией из убитых микобактерий туберкулеза бычьего и птичьего видов использовано по 12 голов свиней. Через 30 суток и 7 месяцев животным внутрикожно ввели туберкулин для млекопитающих (справа ушной раковины) и туберкулин для птиц (слева ушной раковины). При учете реакции через 48 часов у животных, сенсибилизированных убитыми микобактериями бычьего вида на туберкулин для млекопитающих, отек и гиперемия вдвое превышала размеры на месте введения туберкулина для птиц, а у свиней, аллергизированных убитыми микобактериями туберкулеза птичьего вида, размеры реакции вдвое превышали на введение туберкулина для птиц, чем на введение туберкулина для млекопитающих.

Пример 6. Куры в возрасте 7-9 месяцев в количестве 22 голов подкожно во внутреннюю поверхность бедра ввели по 0,3 мл суспензию из убитых микобактерий туберкулеза птичьего вида, а через 30, 45 и 60 суток в бородку был введен туберкулин для птиц в объеме 0,1 мл.

При учете реакции через 30-36 часов у всех кур отмечено стабильное увеличение в 2-3 раза бородки. Повторное исследование через 60 суток не выявило снижение интенсивности реакции на введение туберкулина для птиц.

Изобретение относится к биотехнологии. Различные виды животных сенсибилизируют суспензией, состоящей из 10±2,0 мг/мл убитых микобактерий туберкулеза разных видов (бычьих, птичьих и атипичных), 1-3 мг/мл гидроксида алюминия и физраствора до 100 мл, путем однократного подкожного введения 5,0 мл крупному рогатому скоту, 2-3 мл свиньям и 0,3-0,5 мл курам и морским свинкам. Через 30-45 суток внутрикожно вводят туберкулин и определяют аллергическую реакцию на животных. Биологическая модель служит для контроля туберкулезных аллергенов, отработки навыков туберкулинизации и определения противопоказаний к ее применению. Способ позволяет создавать безопасную биологическую модель широкого спектра действия.

Способ создания биологической модели аллергии у животных к туберкулезным аллергенам (туберкулинам), включающий сенсибилизацию животных путем введения аллергизирующей суспензии, состоящей из автоклавированных микобактерий туберкулеза, гидроксида алюминия, физраствора и последующее введение туберкулина, при этом сенсибилизацию животных проводят аллергизирующей суспензией, состоящей из 10±2,0 мг/мл автоклавированных микобактерий туберкулеза разных видов, сорбированных в 1-3 мг/мл гидроксида алюминия и физраствора до 100 мл путем однократного подкожного введения 5,0 мл крупному рогатому скоту, 2-3 мл свиньям, 0,3-0,5 мл курам и морским свинкам.