Способ определения оптимальной лечебно-профилактической дозы цитотоксичных сывороток Советский патент 1992 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к лекарствам и медикаментам, применяемым в ветеринарии и медицине, а именно, к определению дозировки антиретикулярной (АЦС) и других видоспецифических цитотоксических сывороток.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

Техника ориентировочного определения дозировки заключается в следующем.

Цитотоксическая сыворотка, например АЦС или пневмотропная цитотоксическая сыворотка, разводится изотоническим раствором, например физиологический раствор натрия хлорида в разведении 1:600, что соответствует примерному титру реакции связывания комплемента (РСК) 1:60-1:80, в

отношении 1:800.1:1000,1:1200 ит.д. Одновременно готовятся такие же разведения аналогичной неиммунной нормальной сыворотки (контроль).

Титрация может проводиться непосредственно в хозяйстве на 1-2 клинически здоровых животных. При этом на одном и том же животном ставится до 10 и более проб различных разведений сывороток с таким же количеством контролей. Местом введения у крупных животных, например крупный рогатый скот, лошади, является область шеи, у овец - бесшерстный участок кожи, область паха, локтевого сустава, подхвосто- вые складки.

После подготовки операционного поля и дезинфекции мест иньекции спиртом рекV|

СП

Јь

ю

тификатом различные разведения АЦС или другой цитотоксической сыворотки вводятся начиная с наибольшего разведения внут- рикожно в дозе по 0,2 мл. Одновременно в симметричные участки кожи в тех же дозах и разведениях вводится нормальная, неиммунная, сыворотка. У крупных животных, крупного рогатого скота, перед введением препаратов производится измерение кожной складки при помощи штангенциркуля.

Учет результатов реакции проводится при введении сывороток при помощи иглы через 3-6 ч, а при помощи безигольного инъектора - через 6-9 (сроки естественного угасания реакции на г обой раздражитель).

За титр цитотоксической сыворотки принимается предельное ее разведение, при внутрикожном введении которого в дозе 0,2 мл на месте инъекции возникает реакция (утолщение кожной складки, отек, эритема), при полном отсутствии реакции или при выраженности ее не менее чем в 3 раза слабее, на месте введения аналогичной нормальной сыворотки.

На основании полученного титра проводится ориентировочный расчет лечебно- профилактической дозировки этих препаратов, при этом на каждый 1 кг живой массы берется 2 мл титровых единиц, например при титре АПС или пневмотропной сыворотки тканей овец или крупного рогатого скота величиной 1:1000, лечебно-профилактическая доза на 1 кг веса животного будет равна 2 мл: ,0017 и т.д. Оттитрованная таким способом сыворотка перед применением разводится изотоническим раствором (например 1:10) и вводится подкожно в дозах сучетом ее титра, разведения и живой массы животных. Например, при титре сыворотки 1:1000, разведении 1:10 и веса телят 50 кг она составит в среднем на 1 животное:0,002 млх10x50 1,0 мл.

Для уточнения дозировки вычисленная путем титрации с применением внутрикож- ной пробы доза уточняется путем изучения изменения общей иммунологической реактивности под действием различных доз изучаемой сыворотки.

Уточнение дозировки проводится на нескольких группах животных - аналогов (например, б групп по 2-3 животных в каждой группе) путем введения им различных доз изучаемой цитотоксической сыворотки. При этом за среднюю берется доза, вычисленная для данных животных на основании титрации. Так, если при титре кожной пробы 1:1000 (что, примерно, соответствует титру РСК 1:100) средняя доза для животных весом в 50 кг составляет 1,0 мл сыворотки, разведенной 1:10, то вводимые в разных

группах дозы могут составлять: 1 группа - 0,4 мл, 2 группа - 0,6 мл, 3 группа - 0,8 мл, 4 группа - 1,0 мл, 5 группа -1,2 мл, 6 группа - 1,4 мл.

5Перед подкожным введением сыворотки и затем на 2 или 3-й (можно на 6-й) день после ее введения у животных проверяется общая реактивность путем постановки внут- рикожной пробы с применением гистамина

0 или любой, специфической для данного вида животных, цитотоксической сыворотки. Применяется она в дозе 0,2 мл в удвоенном титре (например, при титре 1:1000 в разведении 1:500). В такой же дозе и титре, для

5 контроля вводятся нормальные сыворотки. Первичное и повторное введения сывороток проводятся в удаленные друг от друга симметричные участки кожи, например при первичной постановке внутрикожной пробы и

0 затем, после учета реакции, подкожном введении сыворотки с правой стороны шеи, повторная постановка внутрикожной пробы проводится елевой стороны. Учет реакции в обоих случаях проводится в те же сроки и по

5 тем же критериям, как и при указанной титрации сыворотки, а результаты, полученные при первичной и повторной постановке пробы, сопоставляются.

За оптимальную дозу сыворотки прини0 мается количество ее, при подкожном введении которого обеспечивается на месте внутрикожной инъекции возникновение наиболее выраженной, по сравнению с первичной, реакции на повторное введение

5 цитотоксической сыворотки.

Проводят исследования 3 серий кроличьих (2 серий АЦС для крупного рогатого скота и овец и одна остеотропная для овец) цитотоксических сывороток, а также

0 овечьей и ослинной антипульмональных (пневмотропных) сывороток для крупного рогатого скота. Всего в процессе отработки методики титрации и уточнения дозировки было использовано 20 овец и 172 головы

5 крупного рогатого скота (в том числе на 75 телятах). Исследования показали, что данная внутрикожная проба по своей чувствительности более чем в 10 раз превосходит известный метод РСК (например, при титре

0 РСКравном 1:100-1:110титрвнутрикожной пробы колеблется в пределах 1:1200- 1:1280). Постановка реакции не требует специальных условий, легко выполнима, а читка ее почти полностью исключает субъекти5 визм, так как пределы разведений Сывороток, обеспечивающих выраженную местную реакцию, четко прослеживаются. Например, при титрации АЦС или пневмотропной цитотоксической сыворотки на животных с хорошей реактивностью (здоровые телята в

возрасте 3-12 мес) при полном отсутствии изменений на месте введения нормальной сыворотки (контроль), среднее утолщение кожной складки на их введение могут составлять в разведениях: 1:800 - 4 мм, 1:1000 -4мм, 1:1200-3,5 мм, 1:1400-0мм, 1:1600 - О мм, 1:1800 - 0 мм (с колебаниями у различных животных - 1 мм). У слабых животных реакция может проявляться утолщением кожной складки на 2-3 мм, однако в разведении 1:1400 она также полностью исчезает. За титр в данных случаях принимается разведение 1:1200.

При подкожном введении различных доз этих сывороток (титр 1:1280 в разведении 1:10) 32 телятам весом 60-70 кг разница в утолщении кожной складки на внутрикож- ное введение этих препаратов (разведение 1:640) до и на 2-3-й день после подкожного их применения составила: при дозе 0,2 мл - 0,0 мм; 0,4 мл - 0,0 мм; 0.6 мл - 1,0 мм; 0,8 - 2,3 мм; 1,0 мл - 2,5 мм; 1,2 мл - 1,0 мм; 1,4 мл - 0,5 мм; 1,6 мл - 0,0 мм (колебания у разных животных - 2 мм).

Проведенные данные подтверждают наличие корреляционной зависимости между живой массой организма и необходимой дозировкой.

Надежность данных методов определения дозировки сывороток подтверждена результатами применения пневмотропной ци- тотоксической сыворотки в расчетных дозах на поголовье свыше 3200 телят различного возраста. Использование его позволяет более чем в 2 раза сократить потери телят от респираторных болезней и на 1-3 кг повысить их среднемесячные привесы. Формула изобретения Способ определения оптимальной ле

чебно-профилактическойдозы цитотоксиче- ских сывороток путем постановки реакции связывания комплемента с антигенами, в качестве которых используют применяемые для гипериммунизации материалы, о т л ичающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, дополнительно проводят постановку внутрикожных проб на 1-2 животных с различными разведениями сывороток до предельного, вызывающего

местную реакцию через 3-6 ч, которую принимают за титр, используемый для определения дозы на 1 кг массы животного, а затем дозу уточняют по изменению реактивности организма на подкожное введение разных

доз, близких к расчетной, причем за оптимальную принимают дозу, вызывающую максимальное повышение реактивности по внутрикожной пробе до и через 1-2 дня после введения цитотоксической сыворотки.

Изобретение относится к лекарствам и медикаментам, применяемым в ветеринарии и медицине, а именно к определению дозировки антиретикулярной и других цйтотоксических сывороток. Цель изобретения - повышение чувствительности способа. Определяют оптимальную лечебно-профилактическую дозу цитотоксических сывороток постановки внутрикожных проб на 1-2 животных с различными разведениями сывороток до предельного, вызывающего местную реакцию через 3-6 ч, которую принимают за титр, используемый для определения дозы на 1 кг массы животного, затем дозу уточняют по изменению реактивности организма на подкожное введение разных доз, близких к расчетной, причем за оптимальную принимается доза, вызывающая максимальное повышение реактивности по внутрикожной пробе до и через 1-2 дня после введения цитотоксической сыворотки. Данный способ позволяет в 2 раза сократить потери телят от респираторных заболеваний и на 1-3 кг повысить их приросты. ел с