Способ определения бронхоспазма аллергического генеза при воспалительных заболеваниях легких Советский патент 1992 года по МПК G01N1/28 

ч

w

Ё

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что в крови исследуют полинукле- арные лейкоциты, в которых определяют содержание катионных белков, при этом исследования проводят одновременно двух мазков, один из. которых до выявления катионных белков облучают ультрафиолетовым светом в течение 2-3 мин. При увеличении содержания катионных белков в клетках облученного мазка по отношению к необлученному на 16% и больше определяют бронхоспазм аллергического генеза. Способ значительно повышает точность диагностики.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Из периферической крови готовят два мазка. Оба мазка (до и после УФ-воздейст- вия) изготовляются из одной пробы крови, взятой из пальца или вены в количестве не менее 0,2 мл с одним из используемых антикоагулянтов (гепарин, цитрат или оксалат натрия) в соотношении 10:1. Для УФ-воз- действия 0,1 мл крови помещают на предметное стекло с лункой и облучают в течение 2-4 мин. Через 1-2 мин после облучения кровь перемешивают (не выключая лампы) 2-кратным набором ее в пипетку. Для облучения используют ртутно-к-варцевую лампу мощностью 250 Вт Облучение производят

при расстоянии 40 см от лампы до поверхности крови. Затем из оставшейся необлученной порции крови и облученной готовят два мазка с последующей окраской на кати- онные белки по Шубичу с последующей ци- тоспектрофотометрией по Шерудило и определяют содержание катионных белков в ПНЛ мазков обеих порций крови. Возможно определение содержания катионных белков визуально с помощью микроскопа по балльной системе. При увеличении показателя содержания катионных белков в ПНЛ после воздействия УФ в сравнении с показателем содержания катионных белков без воздействия на 16% и больше диагностируют бронхоспазм аллергического характера при воспалительных заболеваниях легких.

Окраска мазков по Шубичу.

Высушенные свежеприготовленные мазки фиксируют 60-90 с 5%-ным раствоVJ

СЛ СЛ О

ю

О)

ром сульфосалициловой кислоты или 3-4 мин в парах формалина, тщательно промывают дистиллированной водой, высушивают и окрашивают 1-2 мин в 0,1%-ном растворе бромфенолового синего в 0,05 М боратном буфере (рН 8,2), после чего мазки промывают в трех сменах этого же буфера по 1-2 мин в каждой смене, высушивают и производят докраску (необязательно) ядер 1 %-ным раствором сафранина 30-60 с.

Цитоспектрофотометрия по Шерудило заключается в том, что оптическую плотность клетки измеряют на одном и том же зонде при двух длинах волн экстинкции. Экстинкция использованного в реакции крабителя при 2-й длине волны должна составлять 0,4-0,6 экстинкции при 1-й длине волны. Масса красителя в клетке, отражающая количество окрашенного вещества (ка- тионный белок), определяется по формуле, учитывающей оптические плотности клетки при 1-й и 2-й длинах волн экстинкции использованного красителя, при тех же длинах волн и площадь зонда.

Диагностический показатель установлен эмпирически.

Пример 1. У больного А., находившегося на лечении по поводу хронического об- структивного бронхита с клинико-функ- циональными проявлениями бронхоспаз- ма, взяли из пальца 0,2 мл крови в пробирку с 0,02 мл 1,34%-ного раствора оксалата натрия. 0,1 мл крови поместили на предметное стекло с лункой и воздействовали на нее в течение 2-3 мин с помощью лампы Q-139. Расстояние от лампы до поверхности крови 40 см. Спустя 1,5 мин перемешали кровь 2-кратным набором ее в пипетку, не выключая лампы. Затем из необлученной и облученной порций крови сделали мазки и окрасили одним и тем же реактивом на ка- тионные белки по Шубичу. С помощью ци- тоспектрофотометра установили, что показатель содержания катионных белков в ПНЛ в порции крови без облучения равен 1,07 усл.ед., после УФ-воздействия - 1,47 усл.ед. Увеличение составляет 37,38%. Таким образом, по предлагаемому способу у

больного диагностирован бронхоспазм аллергического характера

Исследование по прототипу по тесту ППН выявило сенсибилизацию к эуфеллину, новокаину.

Пример 2. У больного Б., находившегося на лечении по поводу хронического об- структивного бронхита с клинико-функ- циональными проявлениями бронхоспазма,

исследование по предлагаемому способу показало, что показатель содержания катионных белков в ПНЛ порции крови без воздействия УФ равен 1,24 усл.ед., после УФ-воздействия - 1,31 усл.ед. В этом случае

диагностический показатель равен 5,64%, и по предлагаемому способу у больного не диагностирован бронхоспазм аллергического характера.

Исследование по прототипу по тесту

ППН у этого больного не выявило сенсибилизации к бактериальным аллергенам и лекарственным препаратам.

Таким образом, предложение основано на экспериментально установленной способности УФ оказывать разное влияние на ПНЛ в зависимости от характера бронхоспазма с последующей регистрацией этой разницы цитохимическим определением в ПНЛ катионных белков.

Способ позволяет определить бронхоспазм аллергического генеза с большой вероятностью.

Формула изобретения Способ определения бронхоспазма аллергического генеза при воспалительных заболеваниях легких, путем исследования мазков крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследуют полинуклеарные лейкоциты, в которых определяют содержание катионных белков, при этом исследования проводят одновременно двух мазков, один из которых до выявления катионных белков облучают ультрафиолетовым светом в течение 2-3

мин, и при увеличении содержания катионных белков в клетках облученного мазка по отношению к необлученному на 16% и больше определяют бронхоспазм аллергического генеза.