СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ХРОНИЧЕСКОГО ПЕРСИСТИРУЮЩЕГО ГЕПАТИТА И ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ Российский патент 1996 года по МПК G01N33/68 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине.

Известен способ дифференциальной диагностики между хроническим персистирующим гепатитом и циррозами печени, основанный на применении анамнестических, клинических и лабораторных данных (лейкоцитоз, изменение активности трансаминаз, протеинограммы, содержания биллирубина крови) (З.В.Бондарь. Клиническая гепатология. М. Мед. 1970, с. 406; Е.В.Крутских. Дифференциальная диагностика хронических заболеваний печени. М. Мед. 1980, с. 214; С.Д. Подымова. Болезни печени. М. Мед. 1984, с. 478).

Однако, выраженность клинических показателей (увеличение печени в размерах, наличие желтухи, симптомов интоксикации и др.) и лабораторных изменений является минимальной как при хроническом персистирующем гепатите, так и при начальных проявлениях циррозов печени. Клинические и лабораторные признаки не являются специфическими для данной патологии. Особую сложность представляет проведение дифференциальной диагностики между хроническим персистирующим гепатитом и начальными проявлениями циррозов печени.

Известна диагностика этих заболеваний с помощью цитохимических тестов, заключающаяся в заборе крови, инкубации ее в растворе нитросинего тетразолия (НСТ) (Клиническое значение показателей спонтанного НСТ-теста при хроническом гепатите у детей. Моделирование и клиническая характеристика фагоцитарных реакций. Горький, 1989, с. 168-175), и учет этих реакций.

Однако повышение показателей НСТ-теста было выявлено как при персистирующем гепатите, так и при циррозе, при этом исследуемые величины между собой практически не отличались.

Целью изобретения является повышение точности дифференциальной диагностики за счет учета общей бактерицидной активности нейтрофилов крови.

Цель достигается тем, что при наличии клинической симптоматики у больных проводят забор крови, осуществляют постановку цитохимических реакций на катионные белки и восстановление нитросинего тетрозолия, рассчитывают интегральную цитохимическую активность на абсолютное количество нейтрофилов крови и при величине 4,0 6,0 диагностируют цирроз печени, а при повышении этого показателя выше 7,0 диагностируют хронический персистирующий гепатит.

Способ осуществляют следующим образом.

1. Определение содержания катионных белков в мазках крови проводили по методике М. Г. Шубича (1974). Мазки крови фиксировали 60 с 5-ным раствором сульфосалициловой кислоты, промывали дистиллированной водой, высушивали, окрашивали в течение 2 мин 0,1-ным раствором бромфенолового синего в 0,05 М боратном буфере (рН 8,2), промывали в 3-х смывах этого же буфера по 2 мин в каждой смене. После промывания дистиллированной водой и высушивания мазки микроскопировали. Содержание катионных белков выражали в условных единицах на основании вычисления среднего гистохимического коэффициента (СКГ) по формуле Астальди, Верга (1957)

где цифры 3, 2, 1, 0 степень интенсивности окраски (А гранулы занимают всю цитоплазму клетки, Б гранулы занимают 3/4 части цитоплазмы, В - единичные гранулы, 0 отсутствие гранул); 100 количество просмотренных клеток.

2. Определение способности нейтрофилов восстанавливать нитросиний тетразолий (НСТ) проводили по методике М.Г.Шубича и В.Г.Медниковой. В силиконовые пробирки добавляли по 0,1 мл венозной крови (гепаринизированной) больных и по 0,1 мл 2-ного раствора НСТ в 0,2 М фосфатном буфере. Пробирки помещали на 30 мин в термостат при 37^oC. После 15-минутного охлаждения при комнатной температуре из верней части готовили мазки, высушивали и фиксировали их в абсолютном метаноле. Мазки окрашивали по Романовскому и микроскопировали с масляной иммерсией, определяя число формаксан-положительных нейтрофилов на 100 клеток. Для оценки интенсивности НСТ-реакции проводили расчет среднего гистохимического коэффициента.

Для расчета суммарной бактерицидной активности нейтрофилов применяли формулу

где Л количество лейкоцитов крови;
Н количество нейтрофилов в формуле крови;
СГК¹ средний гистохимический коэффициент содержания катионных белков;
СГК² средний гистохимический коэффициент интенсивности НСТ-реакции.

Суммарная бактерицидность здоровых колеблется от 5,6 до 6,8 и составляет в среднем 6,98±0,18 (табл. 1).

Обоснованием достоверности предлагаемого способа является то, что хронический персистирующий гепатит является следствием развития воспаления септической, либо асептической природы, тогда как клинические проявления цирроза печени зависят от развития соединительной ткани без воспалительного поражения органа.

Основными клетками, принимающими участке в развитии воспалительных реакций являются нейтрофилы крови, которые при активности (воспалении) выделяют содержимое лизосомальных ферментов, разрушающих здоровые ткани (в данном случае паренхиму печени).

Для повышения точности диагностики в предлагаемом способе учитывают активность 2-х систем нейтрофилов, принимающих участие в развитии воспалительной реакции кислородзависимую, активность которой отражает НСТ-реакция, и независимая от кислорода, головную роль в которой играют катионные белки (А.Н.Маянский, Д.Н.Маянский, 1989).

Пример 1. Больная З. 1929 г. рождения (N ист. болезни 3461-432) поступила в гастроэнтерологическое отделение Киевской областной больницы 17.02.90 г. Диагноз: Микро-макронодуллярный цирроз печени.

Содержание лейкоцитов крови 4,4•10⁹/л в пределах нормальных величин, содержание сегментоядерных нейтрофилов 65 Интенсивность НСТ-реакции 0,25, а содержание катионных белков 1,82.

Таким образом, исследованные показатели практически не отличались от данных у здоровых лиц. Суммарная бактериальная активность составила 5,94 условных ед. и практически не отличается от данных здоровых лиц.

Пример 2. Больной К. 1937 г.рождения (N истории болезни 3246-410) поступил в гастроэнтерологическое отделение Киевской областной больницы 1.02.90 г. Диагноз: хронический персистирующий гепатит.

Содержание лейкоцитов крови 706•10⁹/л, сегментоядерные нейтрофилы 64 Интенсивность НСТ-реакции 0,27. Содержание катионных белков 1,91. У больного исследованные показатели практически не отличались от здоровых лиц, тогда как суммарная бактерицидная активность составили 10,55 условных ед. значительно превысила нормальные величины.

Дифференциальная диагностика между гепатитами и циррозами печени проведена различными способами: базовый способ (общеклинические методы), способ-прототип (по результатам НСТ-реакции) и по предлагаемому способу с вычислением интегральной бактерицидной активности.

По данным архивного (секционного) материала при проведении дифференциальной диагностики с использованием базового способа (общеклинические методы) и 50 больных диагноз хронического персистирующего гепатита был выставлен ошибочно (табл. 1).

При применении способа-прототипа процент ошибок был снижен до 32 а при использовании предлагаемого способа до 12,5
Таким образом, точность дифференциальной диагностики при применении предлагаемого способа была повышена в 4 раза по сравнению с базовым и 2,5 раза по сравнению со способом-прототипом.

Достоверность точности способа дифференциальной диагностики с применением предлагаемого способа (табл. 2) подтверждена статистически (Критерий Х²).

Использование: в медицине, в частности в гепатологии. Сущность изобретения: осуществляют постановку цитохимических реакций по выявлению содержания катионных белков и интенсивности реакции восстановления нитросинего тетразолия, рассчитывают сумму этих показателей на абсолютное число нейтрофилов крови и при величине суммарной бактерицидной активности 7,0 и более диагностируют хронический персистирующий гепатит, а при значении 6,0 и менее - цирроз печени. Способ позволяет повысит точность дифференциальной диагностики данных патологий. 2 табл.

Способ дифференциальной диагностики хронического персистирующего гепатита и цирроза печени путем исследования крови больного, отличающийся тем, что осуществляют постановку цитохимических реакций по выявлению содержания катионных белков и интенсивности реакции восстановления нитросинего тетразолия, рассчитывают сумму этих показателей на абсолютное количество нейтрофилов крови, и при величине суммарной бактерицидной активности 7,0 и более диагностируют хронический персистирующий гепатит, а при значении 6,0 и менее цирроз печени.