Способ получения разветвленных алкиловых эфиров 2-/4-(2-пиперидиноэтокси)-бензоил/-бензойной кислоты или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1992 года по МПК C07D211/36 

Изобретение относится к получению новых сложных эфиров (2-пилеридиноэ- токси}-бензоил -бензойной кислоты общей формулы

О II

Э-с-С-осн2снгыО

А

О Q-C- I

я.

R,

где R4 и RS одинаковые или различные означают СтС4-алкил;

RO - водород или Ci-Сл-алки., или их фармацевтически прием-темы солеи, обладающих спазмолитической активностью.

Целью изобретения является разработка на основе известных методов способа получрчия новых соединений, обладающих высокой спазмолитической активностью, более устойчивого и стабильного действия.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Изопропил-2 -4-(2-пипери- диноэтокси)бензоил -бензоат.

К 2-(4-гидроксибензоил)бензойной кислоте (60 г, 0,25 моль) добавляли 2-пропанол (1020 мл) и концентрированную H,2SC4(25 мл

.

X

о о ю ел

Сл5

и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 24 ч. Затем 2-про- панол отгоняли в вакууме. Остаток растворяли в этилацетате (1000 мл), охлаждали и промывали раствором бикарбоната натрия (2 х 500 мл), затем водой (750 мл), сушили и концентрировали с получением 70 г изопро- пилового эфира в виде темного масла, которое может быть перекристаллизовано из диизопропилового эфира с получением белых кристаллов, т.пл. 95-97°С,

Смесь изопропилового эфира (28,4 г, 0,1 моля), 2-пиперидиноэтилхлорида (23,6 г, 0,16 моль) и безводного К2СОз (57 г, 0,38 моль) в сухом 2-бутаноне (1000 мл) нагревали с обратным холодильником 6 ч. Растворитель отгоняли в вакууме, смесь переливали в воду (800 мл) и экстрагировали этилацетатом(1 л). Этилацетатный слой промывали 1 %-ным водным раствором КОН, затем водой (2 х 500 мл), сушили над безводным N32S04 и концентрировали с получением 36 г темного вязкого масла, В результате очистки методом тонкослойной хроматографии (силикагель, СНС з-ЕЮАс-СНзОН, 74:20:6) получали 33 г (83%) целевого соединения в виде вязкого масла, которое может быть перекристаллизовано из н-пентана при -6°С с получением белых кристаллов, Т.пл. 34-35°С,

С другой стороны, смесь изопропилового эфира (28,4 г, 0,1 моль) 2-пиперидиноэ- тилхлорид гидрохлорида (25,9 г, 0,14 моль), безводного К2СОз (38,7 г, 0,28 моль) в 2-бутаноне (215 мл), содержащем воду (9,5 мл), нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч. После описанной обработки получали 34,5 г целевого соединения с выходом 87%.

Пример 2. 3-Метил-бут-2-ил-2- 4-(2- пиперидиноэтокси)-бензоил -бензоат.

Смесь 2-(4-гидроксибензоил)-бензой- ной кислоты (15 г, 0,06 моль) З-метил-2-бута- нола (100 мл), конц. H2S04 (3 мл, 0,05 моль) и толуола (100 мл) загружали в колбу, соединенную с трубкой Сокслета, заполненной безводным Na2S04 (50 г), и снабженную холодильником. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником 4 ч, охлаждали, выливали в измельченный лед и обрабатывали насыщенным раствором NaHCOs (60 мл). Полученную смесь экстрагировали с помощью эти- лацетата (2 х 500 мл) и этилацетатный слой промывали водой (2 х 500 мл), сушили над безводным N32S04 и концентрировали с получением 20 г З-метил-2-бутилового эфира, представляющего собой вязкое масло,

Смесь полученного эфира (10 г, 0,03 моль), гидрохлорида 2-пиперидиноэтилхлорида (7,58 г, 0,08 моль) и безводного КаСОз

(11,5 г, 0,08 моль) в метилацетате (80 мл, доля водь 4,6%) кипятили с обратным холодильником 4 ч. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали. Остаток растворяли

в этилацетате (150 мл) и этилацетатный слой промывали водой и осушали над безводным NaaSOa. Концентрированием этилаце- татного слоя получали 10,2 г масла. Фильтрацией через нейтральный глинозем

0 (промывка с 10% этилацетат-петролейным эфиром) и концентрированием получали 9,5 г (70%) (3-метил-бут-2-ил)(2-пипериди- ноэтокси)-бензоил -бензоата в виде вязкого масла.

5ПримерЗ. Гидрохлорид (3-метил-бут2-ил)(2-пиперидиноэтокси)-бензоил - бензоата.

8 г (3-метил-бут-2-ил)(2-пипериди- ноэтокси)-бензоил -бензоата растворяли в

0 300 мл сухого диэтилового эфира. К зтому раствору медленно прибавляли фионый HCI (20 мл), перемешивая до тех пор, пока рН не стал равен 2-3. Растворитель отгоняли в вакууме и остаток растирали с сухим диз5 тиловым эфиром, получая белый осадок, который отфильтровывали. Выход 4,1 г (48%). Т.пл. 127-129°С: Сод. (расч.) для C26H34CIN04, %: С 67,88; Н 7,45; N 3,04; CI 7,70. Определено. %: С 67,64: Н 7.21; N 3,31;

0 С 7,90.

Пример 4. (3..3-/l.-i-/ie- : 1.л-бут-2 ил)-2- 4-(2-пиперидиноэтокск; бскзсил -&ензоат. 3,3-Диметил-2-бутиловь : ;: эфир 2-(4- гидроксибензоил)-бэнзойной кислоты

5 получали с 70%-ным выходом аналогично 3-метил-2-бут / ловому тфиру (пример 3). Указанное соединение получали из 3.3-ди- метил-2-бутилового эфира 2-(4-гидрокси- бензиол)-бензойной кислоты аналогично

0 (3-метил-бут-2--ил)(2-пиперидикоэток си)-бензоил -бензоату (пример 2). Выход 60%.

Пример 5. (3.3-Димет1-ы-5ут-2-ил)-2- 4-(2-пиперидиноэтокси)-ббнзоил -бензоата

5 гидрохлорид.

Названное соединение получали из (3,3- диметил-бут-2-ил)(пипер /1ДинозтОг си) -бензоил -бензоата с выходом 69% аналогично получению (3-метил-бут-2-ил)(20 пиперидиноэтокси)-бензоил -бензоата гидрохлорида {пример 3). Т.пл. 136-140°С. Анал.расч. для С27НзбС МО 5, %; С 68,40: Н 7.65; N 2,95: С 7,47. Определено, % С 68,73; Н 7.76; N3.10: С 7.60.

5Полученные соединения изобретения

обладают следующими специальными свойствами: низкие скорости гидролиза в присутствии эстеразы: мощное и длительное антиспастическое действие, и in vitro и in vivo; повышенная биопоименимость при

оральном применении на млекопитающих в соответствии с продемонстированным в описанных экспериментах с использованием следующих тестовых соединений:

Тестовое соединение I.

Метил-2- 4-(2-пиперидиноэтокси)бензо- ил -бензоат гидрохлорид (питофенон).

Тестовое соединение II.

Гидрохлорид изопропил-2- 4-(2-пипери- диноэтокси)бензоил -бензоата.

Тестовое соединение III.

(2-Пиперидиноэтокси)-бензоил -б- ензойная кислота.

Эксперимент 1.

Скорости энзимного гидролиза для тестовых соединений.

Эстеразу свиной печени (0,5У 2 мкг) предварительно инкубировали в 40 мМ трис-HCI буфера, рН 8, в течение 5 мин при 37°С. Реакцию инициировали добавлением тестового соединения (конечная концентрация 1 мМ) до конечного объема 250 мкл. Энзимную реакцию прерывали через различные интервалы времени путем добавления 60 мкл 1М уксусной кислоты. Раствор подщелачивали (рН 10,5) путем добавления 0,4 М NaOH, и щелочной раствор быстро экстрагировали (трижды) 2,5 мл хлороформа. Аликвоту водного верхнего слоя разбавляли двойным количеством дистиллированной воды и измеряли оптическое поглощение при длине волны 290 нм. Рассчитывали количество образовавшегося тестового соединения IH (молярная экстин- ция 14400). Полученные результаты представлены в табл.1.

Эксперимент 2.

Антиспастическая активность на изолированной модели подвздошной кости морской свинки.

Мелкие кишки, полученные из только что умерщвленных морских свинок (вес 200-400 г) любого пола, очищали и хранили в тиродном растворе. Кусочек подвздошной кости закрепляли в ванне для органов, содержащей тиродный раствор при 37°С, и выдерживали под нагрузкой 0,5-1,0 г. Раствор непрерывно аэрировали сжатым воздухом. После начального периода равновесия стандартизировали субмаксимальную дозу ацетилхолина, требуемую для измеряемого сокращения.

Изменения натяжения регистрировали с помощью устройства для измерения изотонической деформации, присоединенного к ткани, и реакции регистрировали на записывающем устройстве с движущейся лентой.

Следили за антиспастической активностью соединений при различных их концентрациях и из кривых в координатах доза - отклик рассчитывали значения iCso. Полученные результаты представлены в табл.2. Эксперимент 3.

Антиспастическая активность у анестезированных собак.

Самцов нечистокровных собак весом 10-15 кг анестезировали пентабарбитоном натрия (35 мг/кг, внутривенно). Для поддер0 жания анестезии осуществляли медленное вливание пентабарбитона (5 мг/хг/ч). Для облегчения спонтанного дыхания вставляли катетеры для регистрации кровяного давления и применения лекарств. После лепаро5 томии небольшую часть тонкой кишки до двенадцатиперстной кишки удаляли и вставляли наполненный солевым раствором баллон, после чего отверстие зашивали. Затем в мезентериевую артерию вставляли

0 мелкий полиэтиленовый катетер, который достигал участков кишечника, содержащих баллон, с целью ввода карбахола или ацетилхолина. Затем к баллонному катетеру присоединяли датчик давления Статхама с

5 целью регистрации как кругового, так и продольного сокращения мышц. Все параметры записывались на четырехканальног/. устройстве Нихон-Кодена. Сокращения кишок регистрировали после применения

0 стандартной дозы карбахола или ацетилхо- лина (0.5-3 мкг).

Бнутридуоденальное применение. Тестовые соединения I и II применяли интрадуоденальнос дозировками 3, 10 и 20

5 мг/кг и через различные интервалы времени оценивали спазмолитическую активность.

Антиспастическую активность оценивали путем расчета процента понижения аго0 нии, вызванной сокращениями, а также отмечали начало и длительность действий. Тестовые соединения растворяли в дистиллированной воде (1% раствор). Полученные результаты приведены в табл.3.

5Внутривенное применение.

Тестовые соединения I и II прим-эняли с различными дозировками (10, 30, 100, 300 и 1000 мкг/кг) внутривенно, и спазмолитическую активность определяли через различ0 ные интервалы времени.

Антиспастическую активность определяли путем расчета понижения агонии, вызванной сокращениями. Значения IDso рассчитывали из кривой доза - отклик. Пол5 ученные результаты представлены в табл.4. Эксперимент 4.

Испытуемые соединения I и II применяли орально в количестве 10-100 мг/кг, за 30 мин до введения суспензии угля (0,2 мл), 10% древесного угля в 5% аравийской камеди (на находящихся в течение 18 ч в неподвижности мышах, мужские или женские особи, вес в интервале 18-25 г). Через 30 мин после применения угля животных умертвля- ли и измеряли степень пропульсии в тонкой кишке. Ингибиторную активность тестового соединения на транспорт угля оценивали как процент ингибирования по сравнению с длиной кишки. В контрольной группе применяли 10 мл/кг солевого раствора. Полученные результаты представлены в табл.5.

Эксперимент 5.

Влияние испытуемого соединения II {гидрохлорид изопропил-2 4-(2-пипериди- ноэтокси)-бензоил -бензоата} на подвижность тонкой кишки находящихся в сознании собак,

В этих экспериментах использовали самцов собак весом 15-20 кг. По крайней мере за 4 недели до эксперимента собак снабжали миниатюрными датчиками силы деформации (Т1-ТЗ) (2x4 мм), которые вшивали в кишку в указанных местах. Кабели датчика вставляли в катетер, который имел вилку для внешнего соединения с электрической сетью. Такой катетер, выполненный из нержавеющей стали, имплантировали в стенку брюшины чуть ниже реберной дуги. Каждый датчик соединяли с измерительным мостом. Полученные сигналы хранили в памяти компьютера HP 9835 А, что позволяло осуществлять последующий анализ данных,

Т1: Проксимальная тощая кишка.

Т2: Дистальная тощая кишка,

ТЗ: Подвздошная кость.

Животных переставали кормить за 18 ч до эксперимента, давая воду ad libidum. Все эксперименты начинали между 8-9 ч утра.

Определяли следующие параметры подвижности.

Интегральную площадь под концентрационной кривой через 10 мин интервалы (11 10 мин) в качестве фазы активности I + II. Длительность действия лекарства в минутах. Длительность миграции комплекса внутри пищеварительного тракта (мин) в качестве меры фазы активности III.

Обработки.

Тестовое соединение N применяли в дозировке 0,2 и 0,5 мг/кг внутривенно или 5 мг/кг i.g., в среде физиологического раствора, в объеме 1 мл/кг (внутривенно) или 2 мл/кг (i.g.), n 3-6. Контрольное п 26. Ссылочные вещества: бускопан, нитофенон,

Бускопан применяли в дозировках 0,3 и 1 мг/кг внутривенно, в среде физиологического раствора, в объеме 1 мг/кг, п 4-6, Питофенон применяли в дозировках 1

мг/кг, внутривенно, в среде физиологического раствора, в объеме 1 мл/кг, п 8. Статистические методы, Значения IDso определяли графически. Результаты: табл.6-8.

Все три соединения ингибируют спонтанную подвижность тонкой кишки у находящихся в сознании собак (табл.6-7). Порядок изменения мощности соединений; 0 тестовое соединение 11 бускопан питофе- нон.

Значения внутривенных ICso, определенные из максимального ингибирования (табл.7), составила, мг/кг: 5 Тестовое соединениеБускопан600 Питофенон1000 Эффект ингибирования от внутривен- 0 ной инъекции 0.5 мг/кг тестового соединения II длился примерно 1 ч, тогда как длительность действия бускопана при внутривенном применении с дозой 1 мг/кг составила только 30 мин (табл.6). 5 При внутрижелудочном применении соединения Ив количестве 5 мг/кг может достигаться заметное ингмбирование фазы активности III (та5л.8).

Эксперимент 6.

0Влияние на подвижность толстой кишки

у собак, находящихся в сознании.

Во всех экспериментах использовали самцов собак весом 15-20 кг. По крайней мере за четыре недели до эксперимента со- 5 бак снабжали миниатюрными датчиками силы деформации (Т1-Т2) (2x4 мм), которые вшивали в указанные места кишок Кабели датчика вставляли в катетер, который имел вилку для подключения к внешней электри- 0 ческой сети. Такой катетер из нержавеющей стали имплантировали в стенку брюшины чуть ниже реберной дуги. Каждый датчик присоединяли к измерительному месту. Полученные сигналы хранили в памяти ком- 5 пьютера HP 9835 А с целью дальнейшего анализа полученных данных Т1: поднятие толстой кишки в 10 см от илеоцевального клапана (ICY).

Т2: по поперечнику толстой кишки в 25 0 см от ICY.

За 18ч до эксперимента животным переставали давать пищу, воду давали ad libidum. Все эксперименты начинали между 8-9 ч утра.

5Определяли следующие параметры:

Длительность цикла в мин. Длительность моторного комплекса толстой кишки (CMC) (мин).

Максимальная высота концентраций (АУ: усл.ед.).

Данные, полученные с двух участков регистрации (Т1-Т2), объединяли.

Тестовое соединение II применяли с дозировкой 3 мг/кг, внутрижелудочно в среде физиологического раствора в объеме 2 мл/кг, п 5, контрольное п 23.

Статистические методы. Для определения статистически значимого различия (р 0,05) использовали непарные t-опыты. Лишь статистически значимые отличия указаны индексом , Результаты; табл.9.

Таким образом, испытуемое соединение II в количестве 4 мг/кг, внутрижелудочно, полностью ингибирует подвижность толстой кишки (CMC) у собак, находящихся в сознании, за 2 ч, Доза в 1 мг/кг, внутрижелудочно, неэффективна. Бускопан при дозировках 3 и 10 мг/кг, внутрижелудочно, не оказывает влияния на подвижность толстой кишки находящихся в сознании собак.

Формула изобретения

Способ получения разветвленных алки- ловых эфиров (2-пиперидиноэток- 25 си)бензоил -бензойной кислоты общей формулы

О-с-О-оснгсн21О А

о

O-C-RC

Ь

нс

где R4 и RS одинаковые или различные означают СгС -алкил;

Re - водород или СтС -алкил, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что сложный эфир 2-(4-гидроксибензоил)чбензойной кислоты общей формулы

где R4, RS и Re имеют указанные значения, обрабатывают 2-пиперидиноэтилгалогенидом с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде солей.

Таблица 1

Использование: в качестве веществ, обладающих спазмолитической активностью. Сущность изобретения: продукт - разветвленные алкиловые эфиры (2-пипериди- ноэтокси)-бензоил бензойной кислота: общей формулы О с-@-осн2сн2мО R, т C-C--RC i R, где v, КБ одинаковые или различные означают СтС -алкил; Re - водород или Сг С4-алкил. Реагент 1: сложный эфир 2-(4 гид- роксибензонл)-бензойной кислоты. Реагент 2: 2-пиперидиноэтилгалогенид. Условия реакции: в присутствии основания. 9 табл. КЛ

Таблица 2

Спазмолитическая активность после интрадуоденального применения на

анестезированных собаках

Н.а. - не активно.

Спазмолитическая активность после внутривенного применения на анестезированных собаках

Влияние на желудоч Ю ;/|| G ,,j нропульсыо Мониь .

Р 0,001 по сравнению со значением 6С мг/кг для питофенона (неспаренный t - тест)

Таблица 6

Влияние на подвижность тонко ,.-и.ша, („dja ачт ности I и II) (площад,, под кривой сокращения в м| 1x10 мин как кера голви ности килки для фаз I и II)

Таблица 3

Т а б л и ц а 4

о л v, и а 5

Влияние на подвижность тонкой кишки у собак, находящихся в сознании (фазы активности 1-И) , внутривенно (площадь под концентрационной кривой в м1 1x10 мин в качестве меры подвижности кишки для фаз I и II)

Результаты показывают средние значения + стандартное отклонение.

Когда значения посге применения лекарства достигают 90% или более от значений до применения лекарств.,

Таблица 8

Влияние на подвижность тонкой кишки у собак, находящихся в сознании (активность фазы ill); внутрижелудочнсе применение

Результаты показывают среднее значение ± стандартное отклонение (SD).

р 0,05 относительно контроля.

на моторный комплекс толстой к . . . сознании (путь применения: внутрижелупочно)

Таблица ° Влияние на моторный комплекс толстой кишки (CMC) кишечника собак, находящихся

Таблица 7