Способ получения разветвленных алкиловых эфиров 2-[4-(2-пиперидино-этокси)-бензоил]-бензойной кислоты или их фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1992 года по МПК C07D211/36 

х| 00

ю

Использование: в качестве веществ, обладающих спазмолитическим действием. Сущность изобретения: продукт-разветв- ленные алкиловые эфиры (2-пипериди- но-этокси)-бензоил -бензойной кислоты общей формулы О Э ОШ2СНХ1) C-RS 6 где RA и Rg - одинаковые или различные и означают Ci-Gi-алкил, Re - водород или Ci- Ci-алкил, или их фармацевтически приемлемые соли. Реагент 1: карбоксилатная соль

Изобретение относится к области получения новых сложных эфиров (2-липе- ридино-этокс и)- бен зон бензойной кислоты общей формулы:

/гл-с- -осн2сн2м()

б

где RA и RB одинаковые или различные и означают СгС4 алкил,

Нб - водород или CrC/i алкил, или их фармацевтически приемлемых солей, обладающих спазмолитической активностью.

Целью изобретения является разработка, на основе известных методов, способа получения новых соединений, обладающих высокой спазмолитической активностью, более устойчивого и стабильного действия.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами

Принятые в примерах сокращения:

ГМФА - гексометилфосфортриамид.

О)

ю

ы

Аликват 366 - хлористый метилтриокти- ламмоний.

Пример 1. Изопропил-2- 4-{2-пипери- дино-этокси)-бензоил -бензоат.

Смесь,состоящую из (2-пипериди- но-этокси)-бензоил -бензойной кислоты (1,05 г, 0,003 мл), 20 мл ГМФА и раствора NaOH (0,18 г, 0,0045 моль) в 1,5 мл воды перемешивали в течение 30 минут и добавляла 2-бромпропан (1,22 мл, 0,012 моль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 24 ч. Затем ее переливали в воду (150 мл) и экстрагировали этилацетатом. Этилацетатный слой несколько раз промывали водой, сушили над безводным Na2S04 и концентрировали в вакууме с получением 1,3 г вязкого масла. В результате очистки методом тонкослойной хроматографии (силикагель, СНзОН) получали 0,72 г (62%) целевого соединения в виде масла.

Пример 2. К смеси 2-бромпропана (0,62 г, 5 ммоль) и Аликвата 336 (0,22 г, 0.54 ммоль) добавляли сухую порошкообразную калиевую соль (2-пиридино-этокси)- бензоил -бензойной кислоты (2,15 г, 5,4 ммоль). В колбу вставляли кварцевую трубку с CaCI. и встряхивали в течение 15 мин. Затем смесь фильтровали с обратным холодильником и после этого нагревали при 60° С (температура бани) в течение 25 часов. Продукт обрабатывали 25% раствором эти- лацетата в петролейном эфире (25 мл) и фильтровали через слой нейтральной окиси алюминия (40 г, сорт I), после чего элюиро- вали 25% раствором этилацетата в петролейном эфире (150 мл). Объединенный фильтрат концентрировали с получением 1,5 г (75%) целевого соединения в виде бесцветного вязкого масла.

Пример 3. Гидрохлорид изопропил 2-{4-{2пиперидино-этокси}-бензоил}-бензоэта.

5,54 г изопропилового (2-пипериди- но-этокси)-бензоил -бензоата растворяли в 40 мл сухого CH2CI2. Прикапывали эфирный раствор HCI до рН 2-3. Избыток HCI удаляли на паровой бане. Растворитель отгоняли в вакууме с получением густого коричневого остатка, который перекристаллизовывали из смеси этиловый спирт - этиловый эфир. Полученные в результате белые кристаллы целевого соединения отфильтровывали и промывали 2% этиловым спиртом - этиловым эфиром. Выход: 3,31 г (58%)., т. пл, 110-112° С.

Вычислено, %: С 65,37; Н 7,09: N 3,18; С 8,04.

C24H30CIN04.

Найдено, %: С 65,62; Н 7,13; N 3.16; CI 8,38.

Пример 4. (3-Пентил)(2-пипери- диио-этокси)-бензоил -бензоат.

К смеси 3-бромпентана (3,78 г, 25 ммоль) w Аликвата 336 (1,11 г, 2.75 ммоль) прибавляли сухую порошкообразную калиевую соль (2-пипередино-этокси)-бензоил - бензойной кислоты (10,75 г, 27,5 ммоль). Колбу снабжали хлоркальциевой трубкой и встряхивали 15 мин, Затем подсоединяли

обратный холодильник и содержимое нагревали при 70-75° С (температура бани) в течение 19 ч. Реакционную смесь охлаждали, смешивали с 30%-ным этилацетат-петро- лейным эфиром (60 мл) и фильтровали через

слой нейтрального глинозема (80 г, сорт I) с последующей промывкой 30%-ным этила- цетат-петролейным эфиром (2,5 л). Объединенный фильтрат концентрировали с получением 9,5 г (81,7%) (3-пентил)-2-Т.4-(2пиперидмно-этокси)-бензоил -бензоата е виде вязкого масла.

Пример 5. 3-Пентил-2-{4-(2-пипериди- но-этокси)-бензоил -бензоата гидрохлорид. 9,5 г 3-пентил-2- 4-(2-пиперидино-этокси)бензоил}-бензоата растворяли в 100 мл сухого дихлорметана. Эфирный HCI прикапывали до достижения рН, равного 2-3. Растворитель отгоняли в вакууме и остаток кристаллизовали из смеси этанол-эфир (1:1). Выход

8,7 г (84%). Т. пл. 129-131° С.

Вычислено, %: С 67,88; Н 7,45; N 3,04; С 7,71.

C26H34CIN04.

Найдено, %: С 68,17; Н 7,29; N 3,14;

CI 7,57.

Пример 6. втор-Бутил-2- 4-(2-пипере- дино-этокси)-бензоил -бензоат.

К смеси (±) 2-бромбутана (1,92 г, 0,014

моль) и Аликвата 336 (0,62 г, 0,015 моль) добавляли сухой порошок калиевой соли 2- 4-(2-пипериди но-этокси)-бензоил)-бензой- ной кислоты (6,03 г, 0,015 моль). Колбу снабжали хлоркальциевой трубкой и встряхивали 5 мин, Затем к колбе подсоединяли обратный холодильник и реакционную смесь нагревали при 70-75° С (температура бани) в течение 22 ч. Реакционную смесь охлаждали, удаляли с 30%-ным этилацетатпетролейным эфиром (60 мл) и фильтровали через слой нейтрального глинозема (40 г, сорт I) с последующей промывкой 30%-ным этилацетат-петролейным эфиром (500 мл). Объединенный фильтрат концентрировали

с получением 3,8 г (66%) втор-бутил-2- 4-(3- пиперидино-этокси)-бензоил -бензоата в виде бесцветного вязкого масла.

Пример 7. втор-Бутил-2- 4-(2-пи;1ери- дииоэтокси)-бензоил -бензоата гидрохлорид.

3,8 г втор-бутил-2- 4-(2-пиперидино-этокси)6ензоил -бензоата, полученного согласно примеру 6, растворяли в 30 мл сухого СНаСЬ. Эфирный HCI прикапывали до достижения рН, равного 2-3 8 вакууме отгоняли растворитель с получением клейкого коричневого остатка, который удаляли с сухим диэтиловым эфиром; получали белый твердый продукт, который отделяли фильтрацией. Выход: 3,4 г(82%).Т. пл. 125/127° С.

Вычислено, %: С 67.32; Н 7,32; N 3,14; CI 7,95.

C25CINCM

Вычислено, %: С 67,73; И 7,03: N 3,15; CI7,98.

Полученные соединения изобретения обладают следующими специальными свойствами.

Низкие скорости гидролиза в присутствии эстеразы.

Мощное и длительное антиспастиче- ское действие In vitro и in vivo.

Повышенная биоприменимость при оральном применении на млекопитающих в соответствии с продемонстрированным в описанных ниже экспериментах с использо- ванием следующих тестовых соединений:

Тестовое соединение I:

Мети (2-п и перидии о-этокси)- бензоил -бензоат гидрохлорид (Питофенон)

Тестовое соединение II:

Гидрохлорид изопропил-2- 4-(2-пипери- дино-этокси)-бензоил -бензоата

Тестовое соединение Ml:

2-{4-(2пиперидино-этокси)-бензоил - бензойная кислота

Эксперимент 1. Скорости энзимного гидролиза для тестовых соединений. Эсте- разу свиной печени (0.5У 2 мкг) предвари- тельно инкубировали в 40 мМ Трис-НС -буфера, рН 8 0, в течение 5 мин при 37° С. Реакцию инициировали добавлением тестового соединения (конечная концентрация 1 мМ) до конечного объема 250 мкл. Энзимную реакцию прерывали через различные интервалы времени путем добав- ления 60 мкл 1М уксусной кислоты. Раствор подщелачивали (рН 10,5) путем добавления 0,4 М NaOH и щелочной раствор быстро экстрагировали (трижды) 2,5 мл хлороформа. Аликвоту водного верхнего слоя разбавляли двойным количеством дистиллированной воды и измеряли оптическое поглощение при длине волны 290 нм. Рассчитывали количество образовавшегося тестового соединения III (молярная зкстинкция 14400).

Полученные результаты представлены в табл. 1.

Эксперимент 2. Антиспастическая активность на изолированной модели подвздошной кости морской свинки:

Мелкие кишки, полученные из только что умерщрпенных морских свинок (пес 200-400 г), любого пола, очищали и хранили а гидродном растворе. Кусочек подвздошной кости закрепляли в ванне для органов, содержащей тиродный раствор при 37° С, и выдерживали под нагрузкой 0,5-1,0 г. Рас твор непрерывно озрировали сжатым возду хом. После начального периода равновесия стандартизировали субмаксимальную дозу ацетилхолина, требуемую для измеряемого сокращения. Изменение натяжения регистрировали с помощью устройства для измерения изотонической деформации, присоединенного к ткани, и реакции регистрировали на записывающем устройстве с движущейся лентой.

Следили за антиспастической активностью соединений при различных их концентрациях и из кривых в координатах доза-отклик рассчитывали значения ICso. Полученные результаты представлены в табл. 2.

Эксперимент 3. Антиспастическая активность у анестезированных собак.

Метод.

Самцов нечистокровных собак весом 10-15 кг анестезировали пентабарбитоном натрия (35 мг/кг, внутривенно). Для поддержания анестезии осуществляли медленное вливзние пентаОарбитона (5 мг/кг-ч). Для облегчения спонтанного дыхания вставляли эндотрахезльную трубку. В бедренную артерию и вену вставляли катетеры для регистрации кровяного давления и применения лекзрств. После лапаротомии небольшую часть тонкой кишки до двенадцатиперстной кишки удаляли и вставляли наполненный солевым раствором баллон, после чего отверстие зашивали Затем в мезентериевую артерию вставляли мелкий полиэтиленовый катетер, который достигал участков кишечника, содержащих баллон, с целью ввод кар&охола или ацетилхолина. Затем к бол- лонному катетеру присоединяли датчик давления Стзтхама с целью регистрации как кругового, тзк и продольного сокращения мышц. Все параметры записывались на 4- канальном устройстве Нихон-Кодпна. Сокращения кишок регистрировали после применения стандартной дозы карбохола или зцетилхолина (0,5-3 мкг).

Виутридуоденальное применение.

Тестовые соединения I и II применяли интрадуоденально с дозировками 3, 10 и 20 мг/кг и через различные интервалы времени оценивали спазмолитическую активность.

Антиспастическую активность оценивали путем расчет процента снижения агонии, вызванной сокращениями, а также

отмечали начало и длительность действия. Тестовые соединения растворяли в дистиллированной воде(1% раствор). Полученные результаты приведены в табл. 3.

Внутривенное применение.

Тестовые соединения I и II применяли с различными дозировками (10, 30, 100, 300 и 1000 мкг/кг) внутривенно, и смазмолитиче- скуго активность определяли через различные интервалы времени.

Антиспастическую активность определяли путем расчета понижения агонии, вызванной сокращениями. Значения IDso рассчитывали из кривой доза-отклик. Полученные результаты представлены в табл. 4.

Эксперимент 4.

Метод. Испытуемые соединения I и II применяли орально в количество 10-100 мг/кг, за 30 мин до введения суспензии угля (0,2 мл) животное, 10% древесного угля в 5% аравийской камеди) на находящихся в течение 18 ч в неподвижности мышах (мужские или женские особи, вес в интервале 18-25 г), Через 30 мин после применения угля животных умерщвляли и измеряли степень про- пульсии в тонкой кишке. Ингибиторную активность тестового соединения на транс- португля оценивали, как процентингибиро- вания по сравнению с длиной кишки. В контрольной группе применяли 10 мг/кг солевого растеора. Полученные результаты представлены в табл. 5.

Эксперимент 5.

Влияние испытуемого соединения II (гидрохлорид изопропил-2- 4-(2-пипериди- но-этокси)-бензоил -бензоата) на подвижность тонкой кишки находящихся в сознании собак.

Методы,

В этих экспериментах использовали самцов собак весом 15-20 кг. По крайней мере, за 4 недели до эксперимента собак снабжала миниатюрными датчиками силы деформации (Т1-ТЗ) (2 х4 мм), которые вшивали в кишку в указанных ниже местах. Кабели датчика вставляли в катетер, который имел вилку для внешнего соединения с электрической сетью. Такой катетер, выполненный из нержавеющей стали, имплантировали в стенку брюшины чуть ниже реберной дуги. Каждый датчик соединяли с измерительным мостом. Полученные сигналы хранили в памяти компьютера HP 9835 А, что позволяло осуществлять последующий анализ данных.

Т1: Проксимальная тощая кишка

Т2: Дистальная тощая кишка

ТЗ: Подвздошная кость

Животных переставали кормить за 18 ч до эксперимента, давая воду. Все эксперименты начинали между 8-9 ч утра.

Определяли следующие параметры по- движности:

Интегральную площадь под концентрационной кривой через 10 мин интервалы (11 10 мин) в качестве индекса фазы активности 1 + 1. Длительность действия лекарст- 0 ва в минутах. Длительность миграции комплекса внутри пищеварительного тракта (мин) в качестве меры фазы активности III.

Обработки:

Тестовое соединение II применяли в до5 зировках 0,2 и 0,5 мг/кг внутривенно, или 5

мг/кг (i.g.), в среде физиологического растаора, в объеме 1 мл/кг (внутривенно) или 2

мл/кг (i.g.), n 3-6. Контрольное п 26.

Ссылочные вещества: Бускопан, пито- 0 фенон.

Бускопан применяли в дозировках 0,3 и 1 мг/кг внутривенно, в среде физиологического раствора, в обьеме 1 мг/кг, п 4-6, Питофенон применяли в дозировках 1 5 мг/кг, внутривенно, в среде физиологического раствора, в объеме 1 мл/кг, п 8.

Статистические методы:

Значения IDso определяли графически.

Результаты в табл. 6-8.

0 Таким образом все три соединения ин- гибируют спонтанную подвижность тонкой кишки у находящихся п сознании собак (таблицы 6-7). Порядок изменения мощности соединений: Тестовое соединение II бус- 5 копан питофенон.

Эффект ингибировзния от внутривенной инъекции 0,5 мг/кг тестового соединения II длился примерно час, тогда как длительность действия бускопана при внут- 0 ривенном применении с дозой 1 мг/кг составила только 30 мин (табл. 6).

При внугрижелудочном применении соединения II в количестве 5 мг/кг может достигаться заметное ингибирование фазы 5 активности 111 (табл. 8),

Эксперимент 6.

Влияние на подвижность толстой кишки у собак находящихся в сознании.

Методы,

0 Во всех экспериментах использовали самцов собак весом 15-20 кг.

По крайней мере, за четыре недели до эксперимента собак снабжали миниатюрными датчиками силы деформации (Т1-Т2) 5 (2-4 мм), которые вшивали в указанные ниже места кишок. Кабели датчика вставляли в катетер, который имел вилку для подключения к внешней электрической сети. Такой катетер из нержавеющей стали имплантировали в стенку брюшины чуть ниже реберной дуги. Каждый датчик присоединяли к измерительному мосту. Полученные сигналы хранили в памяти компьютера HP 9835 А, с целью дальнейшего анализа полученных данных Т1: поднятие толстой кишки в

10см от илеоцевального клапана (ICY).

Т2: по поперечнику толстой кишки в 25 см от ICY.

За 18 ч до эксперимента животным переставали давать пищу, воду давали. Все эксперименты начинали между 8-9 ч утра.

Определяли следующие параметры:

Длительность цикла в мин. Длительность моторного комплекса толстой кишки (CMC) (мин.). Максимальная высота концентраций (АУ: условные единицы). Данные, полученные с двух участков регистрации (Т1-Т2), объединяли.

Обработки:

Тестовое соединение II применяли с дозировкой 3 мг/кг, внутрижелудочно, в среде физиологического раствора в объеме 2 мл/кг, п 5, контрольное п 23.

Статистические методы: для определения статистического значения различия (р 0,05) использовали непарные х-опыты. Лишь статические значимые отличия указаны индексом х.

Результаты: табл. 9.

Влияние на моторный комплекс толстой кишки (CMC) кишечника собак находящихся в сознании.

Путь применения: внутрижелудочно.

Таким образом испытуемое соединение

11в количестве 4 мг/кг, внутрижелудочно, полностью ингибирует подвижность толстой кишки (CMC) у собак, находящихся в

сознании за два часа. Доза в 1 мг/кг, внутрижелудочно, не эффективна. Бускопан при дозировках 3 и 10 мг/кг, внутрижелудочно, не оказывает влияния на подвижность тол- стой кишки находящихся в сознании собак.

Формула изобретения

Способ получения разветвленных алки- ловых эфиров 2-{4-(2-пиперидино-этокси)- бензоил -бензойной кислоты общей формулы Q

оснгснХ)

15

где RA и RS - одинаковые или различные и означают Ci-C/i-алкил;

Re - водород или Ст-С -алкил, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что карбоксилат- ную соль соединения общей формулы

О € - ОСН2СНг О

со о и

подвергают взаимодействию с галоидным алкилом с последующим выделением целе- вого продукта в свободном виде или в виде солей.

Таблица 1

Таблица 2

Спазмолитическая активность после интра-дуоденального применения на анестезированнь х собаках:

Не активно.

Спазмолитическая активность после внутривенного применения на анестезированных собаках:

Соединение

JDso(мг/кг, ви.ренно)

Тестовое соединение I Тестовое соединение II

Влияние на желудочно-кишечную пропульсию мышей

,001 по сравнению со значением 60 мг/кг для питофенона (неспаренный г -тест)

Таблица 3

Таблица 4

Длительность действия, мин.

0,140

0,010

10-30

60

Таблица 5

Влияние на подвижность тонкой кишки (фаза активности I и II) (Площадь под кривой сокращения в м 11x10 мин, как мера подвижности для фазы I и II)

Примечание. Результаты показывают среднее значение ± стандартное отклонение.

Влияние на подвижность тонкой кишки и собак, находящихся в сознании.(Фазы активности М) вн.венно (Площадь под концентрационной кривой им 11x10 мин в качестве меры подвижности кишки для фаз I и II)

Результаты показывают средние значения ± стандартное отклонение

Когда значения после применения лекарства достигают 90 % или более от значений до применения лекарства.

Влияние на подвижность тонкой кишки у собак, находящихся в сознании (активность фазы III), Внутрижелудочное применение

Результаты показывают среднее значение ± стандартное отклонение (SD). ,05 относительно контроля

Таблица 6

Таблица 7

Таблица 8

а: число экспериментов

Ь: число проанализированных циклов

н.о,: не определяли

Таблица 9