Способ консервирования фармакоцитов с включенной L-аспарагиназой Советский патент 1992 года по МПК A61K47/00 

Изобретение относится к медицинской биохимии и может быть использовано при хранении новых лекарственных форм на основе эритроцитов

Эритроциты-носители заполненные лекарственным препаратом (фармакоциты), не равнозначны целым эритроцитам по устойчивости к различным воздействиям и хранению. Прочность этих клеток по сравнению с исходными эритроцитами снижена и зависит от способа их получения. Методы консервирования фармакоцитов должны отличаться от методов консервирования целых эритроцитов и различаться в зависимости от того, каким способом они были получены (те насколько сохранилась целостность их мембраны и функциональная полноценность)

Изобретение прототипа не имеет так как вопросы консервирования и хранения эритроцитов, содержащих внутри фармакологический препарат, в отечественной и зарубежной научно-патентной литературе не изучены

Целью изобретения является разработка способа хранения (консервирования) эритроцитов с L-аспарагиназой внутри полученных диализным методом

Поставленная цель достигается путем строгой стандартизации процесса диализного получения эритроцитов-носителей, нагруженных L-аспарагиназой, и хранения полученных фармакоцитов при 4±2°С в ре- суспендирующем растворе Эритронаф (в соотношении эритроциты: раствор Эритронаф 2 1), содержащем дополнительно глюкозу в концентрации 1,5 г/100 мл.

Пример Получение и хранение фармакоцитов, заполненных препаратом L-ac- парагиназы)

Для приготовления эритроцитов-носителей с фармакологическим препаратом внутри использовали эритроцитную массу полученную путем удаления из дозы консервированной донорской крови заготовленной на стандартном гемоконсерван- те Глюгицир и хранившейся в контейнере Темакон 500/300 при температуре 4±2°С в течение 1-2 сут

сл

с

VJ VJ

XI

00 00 XJ

В качестве фармакологического препарата, вводимого в эритроциты, использовали препарат L-аспарагиназы, применяемый в клинике при терапии ряда лейкозов (с активностью 10000 М.Е. во флаконе).

Все процедуры приготовления фарма- коцитов проводили в строго стерильных условиях на аппарате Искусственная почка - диализаторе ДИП-02,

Эритроцитную массу отмывали трижды стерильным апирогенным раствором 0,9%- ного хлорида натрия (охлажденного до температуры 4±2°С). Параллельно готовили раствор L-аспарагиназы, для чего 20 флаконов препарата растворяли в 20 мл дистилли- рованной воды. Приготовленный раствор L-аспарагиназы переводили в контейнер с эритроцитами в стерильном ламинарном боксе через стерилизующий фильтр Суи- некс (фирмы Миллипор, США). Затем тща- тельно перешивали содержимое контейнера.

Диализная установка заполнялась предварительно охлажденным до 4±2°С ли- зирующим раствором, который содержал АТФ-5 г/л; глюкозу-5 г/г,; MgSCM -1,2 г/л, Na2HPCMx12 НаО - 16 г/л. Гипотонический диализ проводили при комнатной температуре в диализной установке путем 10-минут- ной встречной циркуляции смеси эритроцитов с L-аспарагиназой и данного лизирующего раствора. Через 10 мин после начала гипотонического диализа в смеси восстанавливали нормальную тоничность, для чего в емкость с лизирующим раствором вносили рассчитанное количество NaCI (45 г/5 л). Температуру смеси за 10-15 мин поднимали до 37°С с помощью водяного термостата. Процесс репарации проводили при данной температуре в течении 30 мин, после чего суспензию готовых эритроцитов- носителей с препаратом L-эспарагиназы

внутри вновь переводили из диализной установки в полимерный контейнер Гемакон 500/300.

Для полного удаления вышедшего из эритроцитов гемоглобина фармакоциты сначала откручивали, а потом трижды отмывали физиологическим раствором путем центрифугирования (2000g x 5 мин). Последний супернатант имел бледно-розовый цвет.

Для дальнейшего консервирования и хранения к отмытым фармакоцитам прибавляли ресуспендирующий и консервирующий раствор Эритронаф (ВФС 42-1859-88) в соотношении 2:1, к которому предварительно стерильно добавляли раствор глюкозы до концентрации 1,5 г/100 мл.

Содержимое контейнера тщательно перемешивали и хранили затем при температуре 4±2°С.

Из одной дозы крови получали шесть лечебных доз препарата L-аспарагиназы (с активностью по 10000 М.Е.).

Стерильность, жизнеспособность и функциональная полноценность фармако- цитов, оцененные по данным бакпосева, а также по тестам на осмотическую резистен- тность эритроцитов и по сохранению до 48% уровня внутриклеточного АТФ (международный трансфизиологический стандарт) сохранялись в течение 7 сут. В течение всего этого срока сохранялась также активность препарата L-аспарагиназы внутри фармако- цитов (см.таблицу).

Формула изобретения

Способ консервирования фармакоци- тов с включенной L-аспарагиназой, полученных диализным методом, заключающийся в том, что фармакоциты ре- суспендируют в соотношении 2:1 в растворе Эритронаф, содержащем глюкозу в концентрации 1,5 г/100 мл, и хранят при 4°С.

Использование в области медицинской биохимии, в частности при консервировании новых лекарственных средств на основе эритроцитов. Сущность изобретения: получение фармакоцитов с включенной L-acna- рагиназой диализным методом, с полным соблюдением условий асептики Фармако- циты консервируют в соотношении 2:1 в растворе Эритронаф, содержащем глюкозу в концентрации 1,5 г/100 мл Полученные фармакоциты хранятся при температуре 4± 2°С Способ позволяет сохранить жизнеспособность и функциональную полноценность фармакоцитов в течение 7 сут 1 табл

Изменение ряда параметров фармакоцитов в процессе хранения