Способ определения границ хроматографических зон отдельных классов фосфолипидов при разделении их смеси методом тонкослойной хроматографии Советский патент 1992 года по МПК G01N30/90 

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способам определения границ хроматографических зон отдельных классов фосфолипидов (ФЛ) при разделении их смеси методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может найти применение при препаративном выделении различных классов липидов из сложных смесей в клинической и лабораторной практике.

Известен способ определения границ хроматографических зон веществ, в частности фосфолипидов, методом ТСХ, заключающийся в том, что пластинку с нанесенной на нее смесью помещают в камеру для хроматографии, а затем, после окончания хро- матографического разделения смеси, опрыскивают весь слой адсорбента или его

часть каким-либо агентом, который считывается неразрушающим, например, родамином В.

Недостатком этого способа является то, что на самом деле использование этого неразрушающего агента, ведет к увеличению концентрации активного кислорода в слое адсорбента, а следовательно, вызывает потери определяемых веществ в результате их окисления.

Известен также способ определения границ хроматографических зон при разделении смеси веществ методом ТСХ, включающий разделение смеси м последующее помещение пластинок в камеру, насыщенную парами иода. Появившиеся пятна желто-коричневого цвета обводят иглой, измеряют подвижность хроматографичеXI

XI 00 О 00

4

ских зон и вычисляют величины их Rf. Идентификацию проводят сравнением полученных значений Rf с имеющимися в литературе, а также с помощью стандартов. После улетучивания иода фракции злюиру- ют.

Однако этот способ не может быть признан полностью неразрушающим, так как при проведении - происходит нарушение нативной структуры олефиновых связей и их миграция, а также благодаря присутствию йода в ходе самого определения значи- тельно ускоряется процесс окисления ненасыщенных ацильных остатков.

Цель изобретения - препаративное выделение в условиях проточной ТСХ неокра- шенных и недеструктурированных фосфолипидов, а также упрощение способа обнаружения границ их хроматографиче- ских зон.

Поставленная цель достигается способом, заключающемся в нанесении смеси фосфолипидов на пластинку с тонким слоем адсорбента, пропускании через него подвижной фазы в хроматографической камере и визуального обнаружения границ образовавшихся зон индивидуальных классов фосфолипидов, причем нанесение смеси фосфолипидов на стартовую линию пластинки для ТСХ ведут параллельно с нанесением равного количества смеси красителей в отдельные точки, лежащие на той же линии, а обнаружение границ проводят по соответствию хроматографической подвижности отдельных классов фосфолипидов и соответствующих красителей.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

П р и м е р 1. На пластинку Силуфол Silufol, фирмы KavaHer, ЧСФР) размером 15x5 см, адсорбент - силикагель, толщина слоя - 150 мкм; наносят 0,2 мг смеси ФЛ (Lecitine-soybean Serva, ФРГ) и 0,2 мг смеси красителей метилового красного и 2,4- динитрофенола, растворенных в 5 мл смеси хлороформ:метанол (2:1). Помещают пластинку в хроматографическую камеру, насы- щенную парами подвижной фазы, и пропускают через тонкий слой адсорбента подвижную фазу. По достижении фронтом подвижной фазы верхнего обреза пластинки последнюю вынимают из камеры, высушивают и обнаруживают границы образовавшейся зоны фосфатидилэтанола- мина по величине Rf окрашенной зоны метилового красного (Rf 0,53) - нижняя

граница и окрашенной зоны 2,4-динитрофе- нола (Rf 0,65) - верхняя граница.

Пример 2. Проводят аналогично примеру 1, но используют смесь красителей

тропеолина 00 и лакмоида для обнаружения фосфатидилхолина. Величина Rf окрашенной зоны тропеолина 00 равна 0,32 - нижняя граница зоны фосфатидилхолина, a Rf лакмоида - 0,53 - верхняя граница зоны

фосфатидилхолина.

Пример 3. Проводят аналогично примеру 1, но используют смесь красителей светло-зеленого (Light green, Loba-cheme, Wien-Fischameno, Австрия) и магнезона ХС

и обнаруживают фосфатидилинозит. Результаты представлены в таблице.

Пример 4. Проводят аналогично примеру 1, но берут стеклянную пластинку со слоем силикагеля (производство Ляэне

Калур, Эстония), размером 20x20 см. Результаты аналогичны примеру 1.

Соответствие между красителями и различными классами природных фосфолипидов по ТСХ-подвижносгй

Из результатов по примерам 1-5 следует, что предлагаемый способ позволяет определить границы хроматографических зон отдельных классов фосфолипидов. в частности фосфатидилэтаноламина, фосфатидилхолина и фосфатидилинозита со значительным упрощением процесса. Формула изобретения Способ определения границ хроматографических зон отдельных классов фосфолипидов при разделении их смеси методом тонкослойной хроматографии (ТСХ), заключающийся в нанесении смеси фосфолипидов на пластинку с тонким слоем адсорбента, пропускании через него подвижной фазы в хроматографической камере и визуальном обнаружении границ образовавшихся зон индивидуальных классов фосфолипидов, отличающийся тем, что, с целью препаративного выделения в

условиях проточной ТСХ неокрашенных и недеструктурированных фосфолипидов, а также упрощения способа обнаружения границ их хроматографических зон, нанесение смеси фосфолипидов на стартовую линию пластинки для ТСХ ведут параллельно с нанесением равного количества смеси красителей в отдельные точки, лежащие на той же линии, а обнаружение границ проводят по соответствию хроматографической

подвижности отдельных классов фосфолипидов и соответствующих красителей.

Соотношение между красителями и различными классами природных фосфолипидов

по ТХС-подвижности

Использование: аналитическая химия, препаративное выделение отдельных классов фосфолипидов из сложных липидных смесей в клинической и лабораторной практике. Сущность изобретения: способ заключается в нанесении смеси фосфолипидов на пластинку с тонким слоем адсорбента, пропускании через него подвижной фазы в хро- матографической камере и визуального обнаружения границ образовавшихся зон индивидуальных классов фосфолипидов. Нанесение смеси фосфолипидов на стартовую линию ведут параллельно с нанесением равного количества смеси определенных красителей в отдельные точки, лежащие на той же линии. Обнаружение границ проводят по соответствию значений хроматографической подвижности отдельных классов фосфолипидов и соответствующих красителей. сл с

Класс фофолипидов

мин

верхняя граница ТСХ-зоны

2,4- динитрофенол Rf 0,65 лакмоид Rf 0,53 светло-зеленый Rf 0,285

Краситель

нижняя граница ТХС-зоны

метиловый красный

Rf 0,53 тропеолин 00 инд.

Rf - 0,32

магнезон

Rf 0.15