СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОДЕИНА Российский патент 2014 года по МПК G01N33/15 G01N30/90 

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах.

В настоящее время известны и широко используются спектрофотометрические методы для определения кодеина в лекарственных препаратах. Большинство этих методов предполагает предварительное разделение компонентов смеси экстракцией или тонкослойной хроматографией (ТСХ). Все это затрудняет проведение анализа, усложняет и удлиняет его. Кроме того, проведение экстракции часто связано с использованием токсичных органических растворителей.

Так, известен способ экстракционно-фотометрического определения 0,01 - 0,1 мг/мл кодеина [Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия. - Киев: Высшая школа, 1989. 447 с.]. Способ основан на реакции кодеина с тропеолином 00, продуктом которой является окрашенный ионный ассоциат, экстрагирующийся хлороформом.

К недостаткам этого способа можно отнести необходимость проведения многократной экстракции, а также использование токсичных органических растворителей (хлороформа и метилового спирта).

Наиболее близким техническим решением, выбранным в качестве прототипа, является способ спектрофотометрического определения не более 1 мг/мл кодеина [Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия. - Киев: Высшая школа, 1989. 447 с.], заключающийся в предварительном разделении компонентов смеси методом ТСХ, элюировании с хроматографической пластины зоны, содержащей кодеин, фильтровании полученного раствора и последующем измерении его оптической плотности при длине волны 285 нм.

К недостаткам данного способа можно отнести затраты времени, связанные со стадиями элюирования и фильтрования, дополнительный расход реагентов и материалов, а также потери целевого компонента.

Техническим результатом, на достижение которого направлено предлагаемое изобретение, является сокращение времени обнаружения и количественного определения кодеина, уменьшение трудоемкости процесса, уменьшение вероятности потерь целевого компонента.

Технический результат достигается тем, что в способе определения кодеина, включающем разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии с выделением хроматографической зоны кодеина реактивом Драгендорфа, новым является то, что количественное определение кодеина проводят в области его проявленной зоны непосредственно в твердой фазе путем измерения коэффициента диффузного отражения при длине волны 520 нм.

Указанные отличия позволяют сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию «новизна». Признаки, отличающие заявляемый способ от прототипа, не выявлены в других технических решениях при изучении данной и смежных областей химии и, следовательно, обеспечивают заявляемому решению соответствие критерию «изобретательный уровень».

Сущность способа заключается в том, что проводят предварительное разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии с выделением хроматографической зоны кодеина с характерной для этого алкалоида оранжевой окраской (R_f=0,23±0,02). Далее измеряют коэффициент диффузного отражения (R) в области проявленной зоны кодеина непосредственно в твердой фазе при длине волны 520 нм на спектрофотометре «Пульсар» по отношению к образцу сравнения - фон пластинки.

Коэффициент диффузного отражения пересчитывают в функцию Гуревича-Кубелки-Мунка по уравнению:

ΔF(R)=[(1-R)²/2R]-[(1-R₀)²/2R₀],

где R и R₀ - коэффициенты диффузного отражения прореагировавшего образца и фона соответственно.

Концентрацию кодеина определяют по градуировочному графику, построенному в координатах ΔF(R)-С, где С - концентрация кодеина в растворе (мкг/мл).

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Извлечение кодеина из лекарственного препарата проводят по известной методике (Швайкова М.Д. Токсикологическая химия. - М: Медицина, 1975, 376 с.). Далее сухой остаток растворяют в 20 мл этанола. Полученный раствор 0,2 мл наносят на линию старта хроматографической пластинки. Правее на расстоянии 2 см на линию старта наносят каплю раствора «свидетеля» (стандартный раствор кодеина в этаноле, 1000 мкг/мл). Нанесенные на пластинку пробы растворов подсушивают на воздухе, а затем пластинку переносят в камеру для хроматографирования, насыщенную парами растворителей (ацетон-хлороформ-аммиак в соотношении 24:12:1). После продвижения фронта растворов на 10 см выше линии старта пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают реактивом Драгендорфа (кислотный раствор иодвисмутата калия). В области проявленной зоны кодеина непосредственно в твердой фазе измеряют коэффициент диффузного отражения (R) при длине волны 520 нм, пересчитывают в функцию Гуревича-Кубелки-Мунка, количество кодеина находят по градуировочному графику.

Для построения градуировочного графика из исходного раствора кодеина в этаноле (1000 мкг/мл) путем разбавления готовят рабочие растворы следующих концентраций: 25, 50, 100, 250, 500, 750 мкг/мл. На хроматографические пластинки наносят по 0,2 мл полученных рабочих растворов, повторяют вышеописанные операции ТСХ и измеряют соответствующие значения R и R₀. Предел обнаружения кодеина, рассчитанный по 3S-критерию, составил 9 мкг/мл (n=5, Р=0,95). Градуировочный график линеен до 1000 мкг кодеина на 1 мл раствора.

Оценку правильности результатов определения кодеина проводят методом «введено-найдено». С этой целью готовят модельные растворы кодеина с концентрациями 40, 200, 400, 600, 800 мкг/мл растворением точных навесок кодеина фосфата в этаноле.

Результаты определения кодеина в модельных растворах приведены в табл.1, в лекарственных препаратах в табл.1, где С - концентрация кодеина (мкг/мл), S - стандартное отклонение, Sr - относительное стандартное отклонение, δ - доверительный интервал.

Таблица 1 - Результаты количественного определения кодеина в модельных растворах (n=5, Р=0,95) Концентрация кодеина (С±δ), мкг/мл S S_r Введено Найдено 40 42±3 2,5 0,06 200 193±12 9,7 0,05 400 412±20 16,5 0,04 600 590±22 17,7 0,03 800 808±20 16,2 0,02

Относительное стандартное отклонение в пределах линейного участка градуировочного графика не превышает 0,06 (6%).

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Обнаружение и количественное определение кодеина в лекарственном препарате «Пенталгин Плюс» (ОАО «Фармстандарт-Лексредства», г.Курск, Россия).

Таблетку лекарственного препарата тщательно измельчают в фарфоровой чашке, переносят в делительную воронку на 100 мл, растворяют в 10 мл 0,01н НСl и экстрагируют диэтиловым эфиром трижды порциями по 10, 5, 5 мл в течение 15 мин. Экстракт, так называемое «кислое извлечение» из лекарственного препарата, содержит фенобарбитал, напроксен, а также часть кофеина.

Водный остаток подщелачивают 25%-ным раствором аммиака до рН 10 и экстрагируют 5 мл хлороформа в течение 15 мин. Органическую фазу фильтруют через бумажные фильтры (красная лента) и выпаривают досуха при комнатной температуре. Экстракт, так называемое «щелочное извлечение», содержит кодеин, парацетамол, метамизол натрия, а также оставшуюся часть кофеина.

«Щелочное извлечение» из лекарственного препарата используют для количественного определения содержания кодеина. Для этого сухой остаток растворяют в 20 мл этанола. Полученный раствор 0,2 мл наносят на линию старта хроматографической пластинки. Правее на расстоянии 2 см на линию старта наносят каплю раствора «свидетеля» (стандартный раствор кодеина в этаноле, 1000 мкг/мл). Нанесенные на пластинку пробы растворов подсушивают на воздухе, а затем пластинку переносят в камеру для хроматографирования, насыщенную парами растворителей (ацетон-хлороформ-аммиак в соотношении 24:12:1). После продвижения фронта растворов на 10 см выше линии старта пластинку вынимают из камеры, подсушивают на воздухе и опрыскивают реактивом Драгендорфа (кислотный раствор иодвисмутата калия). В области проявленной зоны кодеина непосредственно в твердой фазе измеряют коэффициент диффузного отражения (R) при длине волны 520 нм, пересчитывают в функцию Гуревича - Кубелки - Мунка, количество кодеина находят по градуировочному графику.

Пример 2. Обнаружение и количественное определение кодеина в лекарственном препарате «Пенталгин Н» (ОАО «Фармстандарт-Лексредства», г.Курск, Россия) проводится по описанному в примере 1 способу.

Пример 3. Обнаружение и количественное определение кодеина в лекарственном препарате «Седальгин-Нео» («Балканфарма-Дупница АД», г.Дупница, Болгария) проводится по описанному в примере 1 способу.

Результаты количественного определения кодеина в лекарственных препаратах приведены в табл.2.

Таблица 2 - Результаты количественного определения кодеина* в лекарственных препаратах (n=5, P=0,95) Наименование препарата Концентрация кодеина (С±δ), мкг/мл S S_r Расчетные рецептурные данные Найдено Пенталгин Плюс 400 386±24 19,3 0,05 Пенталгин Н 400 417±26 20,9 0,05 Седальгин-Нео 500 512±25 20,5 0,04

∗в пересчете на кодеина фосфат

Приведенные примеры подтверждают пригодность предлагаемого способа количественного определения кодеина в интервале концентраций до 1000 мкг кодеина на 1 мл раствора. Предел обнаружения по предлагаемому способу составляет 9 мкг/мл.

Таким образом, в результате использования заявляемого технического решения существенно сокращается время определения кодеина без ухудшения других метрологических характеристик, уменьшается трудоемкость процесса. Кроме того, уменьшается вероятность потерь целевого компонента, имеющих место в прототипе при элюировании с хроматографической пластины зоны, содержащей кодеин, и фильтровании полученного раствора.

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах. Способ определения кодеина включает разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии с выделением хроматографической зоны кодеина реактивом Драгендорфа, при этом количественное определение кодеина проводят в области его проявленной зоны непосредственно в твердой фазе путем измерения коэффициента диффузного отражения при длине волны 520 нм. Изобретение обеспечивает сокращение времени обнаружения и количественного определения кодеина, уменьшение трудоемкости процесса, уменьшение вероятности потерь целевого компонента. 2 табл., 3 пр.

Способ определения кодеина, включающий разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии с выделением хроматографической зоны кодеина реактивом Драгендорфа, отличающийся тем, что количественное определение кодеина проводят в области его проявленной зоны непосредственно в твердой фазе путем измерения коэффициента диффузного отражения при длине волны 520 нм.