Способ определения поражений билиарного тракта у детей Советский патент 1992 года по МПК G01N33/68 C12N9/22 

Изобретение относится к медицине, педиатрии, может быть использовано для диагностики поражений гепатобилиарной системы.

Подавляющее большинство лабораторных тестов для оценки функционального состояния печени и в том числе билиарной системы характеризуются низкой специфичностью и чувствительностью.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

Для достижения цели определяют активность 5 -нуклеотидазы в сыворотке крови и в дуоденальном содержимом в присутствии аденозин-5-фосфата в качестве субстрата.

Принцип метода: определяют активность фермента путем измерения скорости гидролиза АМФ в присутствии ингибитора 5-нуклеотида ы ионами никеля с последующей регистрацией уровня н(2органического фосфора (Фн) по М,М,Алимовой,

Способ ос/ществляется следующим образом.

Определение общей фосфогидролитической активности: 0,2 мл сыворотки крови или дуоденального содержимого инкубируют при 37°С с 0,1 мл 20 мМ MnSO и 1,5 мл 40 мМ вероналового буфера рН 7,5 в присутствии 0,2 мл 10 мМ АМФ, Реакцию останавливают 2 мл 10% ТХУ, Через 15 мин пробу центрифугируют, отделяют осадок, а в 1,5 мл супернатанта определяют Фн,

Определение активности неспецифической щелочной фосфатазы проводят параллельно: 0,2 мл сыворотки крови или дуоденального содержимого смешивают с 0,1 мл 20 мМ MnSO и 1,3 мл 40 мМ веронолового буфера п рН 7,5, добавляют 0,2 мл 0,1 М раствора NiCl2 и 0,2 мл АМФ, Реакцию останавливают 2 мл 10% ТХУ, отделяют осадок центрифугированием и в 1,5 мл супернатанта определяют Фн (фотометрирование) против раствора сравнения при нм).

Различие в активности опытной и контрольной проб в единицах освобожденного Фн дает активность 5 -нуклеотидазы и выражается в нмолях субстрата гидролизованного Б 1 с в 1 л раствора (нкат),

Расчет; стандартный раствор содержит в 1,2 мл 0,003 мг Фн или 3000 нг,

а.м. сЬосфата - 30,97 D

1 нМ фосфата - 30,97 нг

3000 нг Фн соответственно 97 нМ

9,7 1Ш Е

/.Х сшвиосгь фер-.е-нтв - ----

718,5- - , вст

где - разносгь зкстинций опытном и контрольной проб ,

ст зкстинция стандартного раствора,

1800 - коэффициент для пересчета активности в секунду

0,075 кратность разведения.

Активность 5 -нуклеотидазы у детей контрольной группы составила 154 нкат. npti воспалительных поражениях билиариой систер 1Ы активность 5 -нуклеотидазы297 (,001).

В группе детей с дмскинезией желчевыводящих путей по гипомоторному типу активность 5 -иуклеотидазы в сыворотке крови возрастала до 205±О 5 нкат(,001).

Увеличение активности фермента прямо пропорционально длительности заболе аний, сгепени выраженности симптомов

интоксикации и увеличению размеров печени.

У больных и гипермоторной формой дискинезии желчевыводящих путей средние

показатели активйости фермента составили

163± 1,5 нкат и достоверно не отличались от

контрольной группы.

В таблице 1 приведены данные об активности 5 -нуклеотидазы в дуоденальном содержимом у детей с билиарной патологией (в нкат).

Проведенные исследования показали, что при заболевании билиарной системы у детей повышение активности 5 -нукпеотидазы в дуоденальном содержимом происходит раньше, чем в сыворотке крови.

Формула изобретения

1.Способ определения поражений билиарного тракта у детей путем исследования активности фермента в сыворотке крови, о т л ич 3 ю щ и и с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, исследуют активность 5-нуклеотидазы. и при ее увеличении в 1,5 раза и более относительно

группы доноров определяют поражение билиарного тракта.

2.Способ по п.1,отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа.активность 5-нуклеотидазы определяют в дуоденальном содержимом.

Использование: медицина, педиатрия, ранняя диагностика синдрома цитолиза при патологии билиаоного тракта у детей. Целью изобретения является повышение чувствительности способа. Сущность изобретения: определяют активность 5-нуклео- тидазы в сыворотке крови и в дуоденальном содержимом у детей с патологией билиарно- го тракта, 1 з.п, ф-лы.

IАктивность 5-нуклеотидазы Хронический холецистолангит (25) |Дискинезия желчевыводящих путей по гипомоторному типу (20) Дискинезия желчевыводящих путей по гепермоторному типу (10) Здоровые дети 784± 14 594±11 398±4 384 ±4 ,001 ,001