Способ прогнозирования течения пиелонефрита Советский патент 1992 года по МПК G01N33/68 G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, в частности к клинической урологии и нефрологии.

Среди наиболее распространенных методов определения активности воспалительного заболевания почек используются данные клинических анализов крови и мочи с подсчетом количества лейкоцитов в осадке мочи. К недостаткам способа относится приблизительность подсчета содержания лейкоцитов в моче, отсутствие зависимости от

характера и тяжести воспалительного процесса в почках при хроническом пиелонефрите связанной с наличием инфекции в нижних мочевых путях. В связи с вышесказанным, изменения количества лейкоцитов в моче часто не коррелируют с тяжестью течения пиелонефрита и, кроме того, невоз-можно прогнозировать возможность развития осложнений.

Известен также способ оценки выраженности воспалительного процесса в поч;;;:х пг;м остром и хроническом пиелоне:фри е по определению степени бактериурии. Хотя этот метод позволяет характеризовать (e iiiocTb воспаления, он обладает 11|)рк141чес; и теми же недостатками, что и пре/1)-; Дуилмй.

Наиболее близким аналогом к заявляемому способу(прототипом)явллется способ опредялен / я тяжести течения воспаления в почках 1 выраженности интоксикации по огределенмю уровня средних молекул в кроки больнь х. Ыедостатком этого метода является тот факт, что сама концепция токС11ческого действия средних молекул является дискутабельной. Недостатком Э1О1Ч.) мет;,ца при его применении в клини-йской ;|ра;(тике для характеристики выражен мсхми остроты заболевания и тяжести i:ocioi H /i ; больного является его недостагоч ;оя чупстсительность и специфичность к :.ОС;ииительным заболеваниям.

1;ель:о изобретения является повыше:11-:е lOii-iccTn прогнозирования тяжести гочеммя острого и хронического пиелонеф;оо осуществляется следующим обp:.JO.

i--ie более чем за 48 часов до момента )СЧ;пьзопан11я выделялась стандартная .-:кросомнля фракция из коркового вещестоа почек здоровых крыс. Микросомы сусги;м,г1п:1ов /1и п 1-1,5 мл среды выделения и замоиЕ;к1тали до момента использования,

Гчрогз-- больных взятая натощак в пробирки с 0.3 мл 1,34% оксалата К центрифу Iiporia/jacb и плазма бралась для исследований,

Д.ая определения влияния плазмы крови больпькх иг истинную Са-АТФазную актиомость микросом почек крыс брались стаканчикм объемом 3 мл с 1 м/f соответствуюш.ей среды инкубации и с добавлением суспензь микросом, добавляемых непосije/icrReHJio перед опредеинкубацией. СаА1С ззиV 0 активность микросомной o,QKi.,if-.-A Определяли по образованию неорr;-jJi.:-i8CKaro фосфата и рассчитывали как pc.:3i iijci : между АТФазной активностью ми1фосор.1 в присутс1вии и в отсутствии в среде Сгг . В 1 ом и 2-ом стаканчиках среда иггкуоацш-; имела следующий состав; 100 NM kCL 4 мМ MoCl2, 40 мкМ CaCl2, 5 мМ 0.5 мМ узбамн, 10 мМ имидазол {рН - 7,2 при 37°С), а в 3-ем и 4-ом стаканчиках среда не содержала ионов Са и в среде инкубации вместо CaCi2 был добавлен 0,5 мМ ЗГТА. Перед инкубацией во все пробы добавляли аламе1И..Н1Н (20 мкг./1мл). обеспечивающий опрь/ 8леиие истинной Са-АТФазной активности гиикросо-м (6). Содержание белка определяли по биуретовой реакции. Работа Са-АТФазной системы микросом запускалась добавлением 3 м.моль АТФ.

Определение действия плазмы крови

больных на Са-АТФазную активность микросом почек крыс.

В 1-ом и 3-ем стаканчиках определяли активность Са-АТФазы в присутствии плазмы крови больных, для чего в каждый

0 из них добавляли 0,05 мл исследуемой плазмы, микросом и инкубировали 3 минуты при 37°С, после чего реакцию запускали добавлением 3 м.моль АТФ. Во 2-ом и 4-ом стаканчиках определяли истинную

5 Са-АТФазную активность микросом с добавкой, соответственно объему добавленной ранее в пробах 1,3 плазмы, среды инкубации. Пробы инкубировали 3 минуты и реакцию запускали 3 м.моль АТФ. Инкубацию проводили 1 минуту, останавливали реакцию трихлоруксусной кислотой. В дальнейшем определяли во всех пробах количество образовавшегося в результате гидролиза АТФ АТФазами неорганического

5 фосфора с помощью наборов фирмы Лахема ЧССР.

Принимая истинную Са-АТФазную активность микросом за 100%. определяли % снижения истинной Са-АТФазной активности микросом при добавках плазмы больных, В качестве контроля обязательно в каждой серии исследований, наряду с плазмой крови больных спиелонефритом, испытывали плазму крови здоровых людей.

5 Рассчитывали % снижения Са-АТФазной активности микросом почек крыс при дейст,вии плазмы крови больных с пиелонефритом, по отнощению к значениям активности определенной в присутствии плазмы здоро0 вых людей.

При добавлении в среду инкубации плазмы крови здоровых людей отмечалось некоторое снижение Са-АТФазной активности микросом почек крыс, однако это сниже5 нив не превышало 12% от исходной истинной Са-АТФазной активности микросом, тогда как плазма крови больных с пиелонефритом ингибировала эту активность в значительно большей степени. Особенно

0 .выраженным ингибирование отмеиено при остром пиелонефрите, причем степень ингибирования коррелировала с тяжесгью состояния больного,

П р и м е р 1. Больной К-ко поступил с

5 диагнозом пузырно-мочеточниковый рефлюкс, хронический пиелонефрит. После операции уретероцистоанастомоз разв илась атака острого пиелонефрита. Состояние больного средней тяжести, температура тела 37.8 С: 8 общем анализе крови лейкоцитоз, ускорение СОЭ (лейкоциты 15600, СОЭ-37 мм/час), в клиническом анализе мочи лейкоцитурия (лейкоциты покрывают все поле зрения). Проведенное исследование ингибирующего влияния плазмы крови больного на Са-АТФазную активность микросомной системы почек крыс показало снижение Са-АТФазной активности микросом по сравнению с истинной активностью, которая составляла 38,9%. В контрольном исследовании с плазмой крови здорового донора ингибирование составляло 5,9%. Концентрация средних молекул в сыворотке крови, измеренная при -254 нм - 0,405 усл.ед., а при -280 нм - 0,417 усл.ед., в то время как в контрольной сыворотке эти величины составляли 0,249 усл.ед., 0,254 усл.ед. соответственно. Больному была проведена антибактериальная терапия и атака острого пиелонефрита была купирована.

Данным примером проиллюстрировано ингибирование Са-АТФазной активности микросомной фракции плазмой крови больного, которое меньше критического уровня (40%) и которое сопровождается неосложненным течением острого пиелонефрита.

П р и м е р 2. Больная В-ва поступила в клинику с диагнозом двухсторонняя ахалазия мочеточников. После операции (уретероцистоанастомоз с обеих сторон) развилась атака острого пиелонефрита. Состояние больной в момент исследования тяжелое, температура тела 38°С. В общем анализе крови лейкоцитоз, ускорение СОЭ (лейкоциты 16500, СОЭ-30). в клиническом анализе мочи лейкоцитурия (лейкоциты покрывают все поле зрения). Проведено исследование ингибирующего действия плазмы крови больной на Са-АТФазную активность микросом почек крысы, которое составило по сравнению с истинной Са-АТФазной активностью фракции 72,7%, а при контрольном исследовании с плазмой здорового донора - 6%. По сравнению с уровнем Са-АТФазной активностью в придутствии плазмы здорового донора, Са-АТФазная активность микросом под действием плазмы больной снизилась на 71 %. Уровень средних молекул сыворотки составлял 0,44% усл. ед. при Я-254 нм,м и 0.461 усл.ед. при Я-280 нм.

Несмотря на назначенную антибактериальную терапию, подобранную с учетом высеянной из мочи микрофлоры, состояние больной ухудшалось, наростала гнойная интоксикация, в связи с чем был проведен сеанс гемосорбции, после которого состояние больной улучшилось, явления интоксикации значительно уменьшились. При

повторном исследовании ингибирующей активности плазмы крови больной на Са-АТФазную активность микросом почки крысы. снижение активности по сравнению с истинной Са-АТФазной активностью составило 37,1%, а по сравнению с активностью в присутствии контрольной плазмы на 30.4%. На фоне продолжающейся антибактериальной терапии атака пиелонефрита была купирована в течение последующих нескольких дней.

Из данного примера видно, что резкое снижение Са-АТФазной активности микросом под действием плазмы крови больного

сопряжено с осложненным течением острого пиелонефрита, что проявляется в тяжелой интоксикации и неэффективности антибактериальной терапии.

Для клинической практики важно, что

на основании предлагаемого способа можно предполагать осложненное течение пиелонефрита с проведением экстракорпоральных методов детоксикации в более ранние сроки.

Сопоставляя диагностическую ценность заявляемого способа и метода-прототипа (по возрастанию уровня средних молекул) можно отметить, что в 1-ом п 2-ом случаях увеличение концентрации средних

молекул в сыворотке крови было приблизительно однозначным. Общепринятые тесты (температура тела, клинические анализы крови и мочи) также не документировали тяжесть состояния больных. В то же время.

предлагаемый способ выявил существенную разницу в ингибирующей активности плазмы, более выраженной у больной Ввой. Таким образом, заявляемый способ наиболее точно отражает тяжесть состояния и

необходимость проведения более интенсивных методов лечения у больных с атакой острого пиелонефрита.

П р и м е р 3. Больная Г-ль поступила с диагнозом хронический пиелонефрит,

структура нижней трети правого мочеточника. Состояние больной удовлетворительное. температура тела нормальная, в общем анализе крови - без патологии. В общем анализе мочи - лейкоцитурия (лейкоциты

покрывают все поле зрения). Клиренс креатинина - 122 мл/мин.

Проведено исследование ингибирующего действия плазмы крови больной на Са-АТФазную активность микросомной

фракции почек крысы. Ингибирование составило 12,2%, а при исследовании с контрольной плазмой - 9,4%. Концентрация средних молекул сыворотки была при А -254 нм 0.154 усл.ед., а при А-280 нм - 0,192 усл.ед..

что в пределах нормы. Больной начато комплексное лечение уросептиками и в течение 15 дней признаки активности хронического пиелонефрита были ликвидированы.

П р и м е р 4. Больной Л-ри поступила с диагнозом хронический пиелонефрит, 2-х сторонний пузырно-мочеточниковый рефлюкс, нейрогенный мочевой пузырь. Состояние больной в момент исследования удовлетворительное, температура тела нормальная, общий анализ крови - без патологии. В общем анализе мочи-лейкоцитурия, эритроцитурия (лейкоциты покрывают в.се поле зрения). Клиренс креатинина - 95 мл/мин. При обследовании обнаружено: отсутствие функции правой почки, у.ретерогидронефроз слева, нарушение проходимости пузырио-мочеточникового соустья слева. Проведено исследование ингибирующего действия плазмы крови больной на Са-АТФазную активность микросом почек крыс. Ингибирование ферментной активности по сравнению с истинной Са-АТФазной активностью микросом составило 26.4%, а по сравнению со значением АТФазной активности микросом в присутствии контрольной плазмы- 17%. Концентрация средних молекул сыворотки при -254 нм -- 0,262 усл.ед., а при -280 нм - 0,290 усл.ед,, что в пределах нормы. После проведенного лечения больная выписана с нефростомическим дренажом, лейкоцитурией для продолжения антибактериального лечения по назначенной схеме и повторной госпитализацией после завершения лечения.

Из данного примера видно, что при более значительном ингибировании плазмой

крови Са-АТФазной активности микросом почек крыс у больных хроническим пиелонефритом отмечается более низкая эффективность противовоспалительной терапии и

требуется более тщательный подбор адекватных методов лечения,

Представленные примеры показывают, что предлагаемый способ позволяет прогнозировать выраженность и характер течения

не только при остром, но и при хроническом пиелонефрите.

Практическое применение заявляемого способа в клинической практике облегчит или документально подтвердит степень тяжести течения пиелонефрита, поможет выбрать наиболее эффективный способ лечения, что позволит избежать развития осложнений и улучшить результаты лечения больных с острым и хроническим пиелонефритом.

Формула изобретения

Способ прогнозирования течения пиелонефрита, включающий исследование плазмы крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, плазму крови добавляют в среду инкубации, содержащую стандартную микросомную систему коркового вещества почек крысы, определяют Са-АТФазную активность микросом до и после инкубации с плазмой крови больного и при снижении относительно исходного уровня у больных с острым пиелонефритом на 40% и более, а у больных с хроническим пиелонефритом на 24% и более прогнозируют осложненное течение болезни.

Изобретение относится к медицине, е частности к клинической урологии и нефрологии. Цель изобретения - повышение точ-'ности прогнозирования течения острого и хронического пиелонефрита. Поставленная цель достигается путем определения степени снижения истинной Са-АТФазной активности микросомной фракции коркового вещества почек интактных крыс под действием плазмы крови больных острым и хроническим пиелонефритом. При снижении истинной Са-АГФазной активности микро- сом в присутствии плазмы крови больного с острым пиелонефритом более чем на 40%предполагается осложненное течение, по- требующее проведения дополнительных вмешательств с возможным применением экстракорпоральных методов детоксика- ции. Снижение Са-АТФазной активности микросом почек крыс под действием плазмы крови больных с хроническим пиелонефритом более чем на 20% указывает на активность процесса, осложненность течения и необходимость длительной терапии. Практическое применение заявленного способа в клинической практике облегчит или документально подтвердит степень тяжести течения пиелонефрита, поможет выбрать наиболее эффективный способ лечения, что позволит избежать развития осложнений, улучшить результаты лечения больных с острым и хроническим пиелонефритом. Применяемый способ принесет определенный экономический эффект за счет сокращения времени для подбора наиболее эффективного способа лечения больных. Возможно, что снижение Са-АТФазной активности микросом почек крыс может наблюдаться и при некоторых других воспалительных заболеваниях.слс«ш,»