Способ замораживания эмбрионов или яйцеклеток Советский патент 1992 года по МПК A61D19/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству, в частности к технике консервирования биологических объектов, например эмбрионов и яйцеклеток млекопитающих, и может быть применено в центрах и пунктах трансплантации и в биологических лабораториях.

Известен способ замораживания эмбрионов в соломинках, по которому заправляют цилиндрический контейнер средой для выведения криопротектора, первым воздушным пузырьком, средой с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой, вторым воздушным пузырьком, средой для выведения криопротектора, замораживают до - 30°С и переносят в жидкий азот.

При достижении -7°С камера установки вскрывается, оттуда извлекается контейнер с эмбрионом или яйцеклеткой, и оператор переохлажденном в жидком азоте пинцетом касается стенки контейнера. Убедившись, что в контейнере образуются первые

кристаллы льда, контейнер укладывают на место и проводят посев льда в следующем.

К недостаткам данного способа следует отнести сложность процесса замораживания, возможное изменение режима, что может привести к гибели эмбрионов.

Цель изобретения - повышение сохранности зародышей после деконсервации, упрощение технологического режима замораживания и снижение затрат на крио- консервацию эмбрионов и яйцеклеток.

Поставленная цель достигается тем, что в способе замораживания эмбрионов или яйцеклеток, включающем заполнение цилиндрического контейнера средой для выведения криопротектора, первым воздушным пузырьком, средой с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой, вторым воздушным пузырьком, средой для выведения криопротектора, замораживание до -30°С и перенос в жидкий азот, заполнение цилиндрического контейнера

Х|

00

ю

СЛ О 00

первым воздушным пузырьком осуществляют при условии соотношения диаметра воздушного пузырька к внутреннему диаметру контейнера 2:1, а замораживание проводят в вертикально расположенном контейнере, причем при замораживании температуру среды с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой поддерживают выше температуры среды для выведения криопротектора не менее чем на 15°С.

Влияние размера первого воздушного пузырька йа протекание искусственной инициации кристаллизации показано в табл. 1,

Для прорастания кристаллов льда при температуре посева льда необходимо, чтобы они уже находились в нижней части. Это достигается тем, что температура там всегда ниже, чем в верхней части контейнера. Вероятность образования кристаллов и их прорастания из нижней-части контейнера в верхнюю показана в табл. 2.

На чертеже изображен контейнер для замораживания эмбрионов по предлагаемому способу.

Пример. Цилиндрический контейнер для замораживания 1 с пробкой 2 заправляют в следующей последовательности: средой для выведения криопротектора 3 на 35 мм, воздушным пузырьком 4 на 2-3 мм (оптимальность такого размера пузырька показала в табл. 1), средой с криопротектором 7 на 30 мм и эмбрионом 6, воздушным пузырьком 8 на 5-10 мм, средой для выведения криопротектора 9. Воздушные пузырьки предназначены для разведения сред для выведения криопротектора 3, 9 и замораживания 7 в течение криоконсерва- ции. Первый воздушный пузырек4 приобретает новое свойство, так как он используется не только для разделения сред 3 и 7, но и для прорастания кристаллов льда. Это достигается разделением сред 3 и 7 в йесте касания поверхности воёдуш ного пузырька 4 размером 2-3 мм с внутренней стенкой контейнера 1. Контакт между двумя средами осуществляется тонким слоем жидкости 5, адсорбированным на внутренней поверхности контейнера 1.

Замораживание проводят в вертикально расположенном контейнере. При сниже- нии температуры среды с криопротектором и эмбрионом, расположенной в центральной части контейнера, температуру среды для выведения криопротектора, находящейся в нижней части контейнера, поддержива- 0 ют ниже температуры центральной части не меньшее чем на 15°С.

Предложенный способ замораживания эмбрионов или яйцеклеток обладает рядом преимуществ. Улучшается технологичность режима замораживания, так как не требуется вмешательства оператора и доступа к объекту, что исключает нарушение режима замораживания, повышает сохранность эмбрионов после замораживания - оттаивания, при этом улучшаются условия труда технологов.

Формула изобретения

Способ замораживания эмбрионов или яйцеклеток, включающий заполнение цилиндрического контейнера средой для выведений криопротектора, первым воздушным пузырьком, средой с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой, вторым воздушным пузырьком, средой для выведения криопротектора, замораживание до -30°С и перенос в жидкий азот, отличающий- с я тем, что, с целью, повышения сохранности зародышей после деконсервации, упрощения технологического режима замораживания и снижения затрат, заполнение цилиндрического контейнера первым воздушным пузырьком осуществляют при условии соотношения диаметра воздушного пузырька и внутреннего диаметра контейнера 2:1, а замораживание проводят в вертикально расположенном контейнере, причем при замораживании температуру среды с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой поддерживают выше темпера- туры среды для выведения криопротектора не менее, чем на 15°С.

Таблица 1

0

5

0

5

0

5

Таблица 2

Использование: животноводство, а именно консервирование биологических объектов. Сущность изобретения: заполнение цилиндрического контейнера первым воздушным пузырьком осуществляют при условии соотношения диаметра воздушного пузырька к внутреннему диаметру контейнера 2:1. Замораживание эмбрионов или яйцеклеток проводят в вертикально расположенном контейнере. При замораживании температуру среды с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой поддерживают выше температуры среды для выведения криопротекторанеменеечемна 15°С. 1 ил., 2 табл.