Способ моделирования процессов развития коры больших полушарий Советский патент 1992 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в экспериментальной гистологии для изучения закономерностей развития (процессов клеточной пролиферации и дифференцировки) различных органов и систем, в частности головного мозга. Оно может быть использовано также в экспериментальной эндокринологии, фармакологии и других областях медицины.

Известно, что введение минералокорти- коидов в дозах 0,02-0,8 мкг/100 г массы ин- тактным животным вызывает у них отклонения от нормы показателей мочи и крови, аналогичные Изменениям, возникающим у человека при первичном альдостеро- низме(синдроме Конна) Розен В.Б., Основы эндокринологии, М., Высшая школа. 1984). Способ моделирования ускоренного развития коры больших полушарий мозга в литературе нами не найден.

Прототипом, может служить способ моделирования нарушений развития коры больших полушарий у плода путем введения беременным животным биологически активных веществ, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, на 14-й день беременности однократно вводят продигио- зан (см. авт. св. N 1422238). Однако в

противоположность авторам, создавшим модель недоразвития коры больших полушарий мозга, необходимо было получить модель ускоренного ее развития.

Цель изобретения - получение ускоренного развития теменной коры.

Цель достигается тем, что в способе моделирования ускоренного развития коры больших полушарий мозга путем введения биологически активного вещества в дозах 2,0 - 0.8 мкг/100 г массы тела в период 7 - 14 суток беременности самкИ, крысам вводят внутримышечно дезоксикортикосте- рон-ацетата в последние 1-2 нецели беременности.

Способ осуществляется следующим образом.;....:...: ,..

Пример. ДО КА вводили внутримышечно ежедневно крысам II группы в течение последних 7 суток беременности по 4 мкм. Так как масса тела самки в процессе беременности в эти сроки увеличивалась с 400 г до 500 г, доза ДОКА на 100 г массы постепенно падала с 1,0 мкг до 0,8 мкг.

Пример 2. ДОКА вводили внутримышечно ежедневно крысам III группы в течение последних 14 суток беременности по 4 мкг. Так как масса тепа самки в эти сроки

VI

00

00

ел VI

беременности увеличивалась с 200 г до 500 г, доза ДОКА на 100 г массы постепенно уменьшалась с 2,0 мкг до 0,8 мкг. Дозы ДОКА преднамеренно брали довольно высокими (1,0 - 2,0 мкг/100 г), учитывая, что его значительная доля задерживается плацентарным барьером. Интакгные беременные крысы составили 1 контрольную группу. Новорожденные животные также были разделены на 3 соответствующие Группы. Переднетеменную кору новорожденных крысят изучали методами световой и электронной микроскопии. На полутонких срезах, окрашенных толуидииовым синим, измеряли толщину коры с помощью окуляр- микрометра определяли среднюю величину профильного поля тел, ядер и цитоплазмы 50 крупных пирамидных нейронов V слоя и их ядерно-цитоплазматического отношения; подсчитывали количество тел нейронов (отдельно учитывая многоядрышковые) и глиальных клеток в нижних ее слоях (V-VII), на площади, соответствующей 100 окулярным измерительным сеткам стандартной площади при увеличении 90 х 15 х 1,5 и устанавливали глиальный й ндекс (глин/нейрон); на той же площади с помощью той же самой сетки подсчитывали процентное соотношение долей объема теменной коры, приходящихся на тела нейро- нов, глиальных элементов и нейропиль.

По результатам исследования проводили статистический анализ, Различия считали значимыми (по Стыоденту) при уровне Р 0,05. Расчеты выполнены на ДВК-2,

Полученные результаты. I группа. У новорожденных крысят от интактных самок нейроны коры - недостаточно зрелые клеточные элементы, что выражается в более или менее плотном их расположении и преобладании крупного ядра над цитбплазмой, в отсутствие или слабом развитии гранулярного эндоплазма- тического ретикулума. Глиальные элементы представлены преимущественно не- дифференцированными и дифференцирующимися глиобластами. Астробласты и микроглиоциты встречаются р едко, обычно около сосудов. Гематоэнцефалический барьер обнаруживает признаки структур- но-фунТсциЪнальной незрелости, выражающиеся в недоразвитии базальной мембраны, отсутствием сплошной оболочки ёстроцитарных ножек и ре- зрелобтй пЬследних, наличии широких экЫ рйвазальных промежутков. Базальная мембрана имеет вид нешироких полосок слабоосмиофильчого филаментозного ма- териал а В местах наибольшей удаленности клеточных тел (астробластов, перицитов) и

со стороны экстравазальных промежутков она развита очень слабо или полностью отсутствует.

IIгруппа. При введении ДОКА в дозах 1,0-0,8 мкг/100 г увеличиваются абсолютная и относительная массы большого мозга, утолщается теменная кора, увеличивается профильное поле тела, ядра и цитоплазмы крупных пирамидных нейронов, уменьшается их ядерно-цитоплазматическое отношение, нарастает число многоядрышковых нейронов. Укрупнение нейронов подтверждается и уменьшением их плотности на единицу стандартной площади при неизменяющемся количестве долей объема, занятых их телами. Все эти изменения нейронов в совокупности с усилением базо- филии цитоплазмы свидетельствуют о повышении степени их дифференцировки. Это подтверждается и следующими ультраструктурными признаками: увеличением количества митохондрий, численности и протяженности цистерн гранулярного эн- доплазматИческого ретикулума, гипертрофией пластинчатого комплекса Гольджи, повышенным образованием на телах и отро- стах нейронов конусов роста (мест образования отростков) и др. Чаще по сравнению с контролем встречаются митотически делящиеся глиобласты, а также дифференцирующиеся глиобласты и астробласты - клетки более крупные и дифференцированные, чем недифференцированные глиобласты. Плотность расположения глиальных элементов и количество долей объема, приходящихся на них, не изменяются. Тем не менее с утолщением теменной коры количество их в целом увеличивается. Повышается содержание микроглиоцитов и отмечаются признаки их активизации.

В тонком строении гематоэнцефаличе- ского барьера установлены ультраструктурные признаки усиления синтетических и обменных процессов в эндотелиоцитах и перицитах (гипертрофия ядер и цитоплазмы, гиперплазия их органелл); удлинение и повышение осмиофильности специализированных плотных контактов между эндотелиоцитами; утолщение базальной мембраны и развитие ее на большем протяжении сосуда; увеличение числа и степени зрелости концевых ножек астробластов.

IIIгруппа. При введении ДОКА в дозах 2,0 - 0,8 мкг/100 г в течение последних 14 суток беременности в теменной коре крысят возрастает количество долей объема, приходящихся на глиальные элементы, при неизменной плотности их расположения. Это является доказательством укрупнения зна чительной части данных клеток. Митозы тли5 17835716

областов отмечаются реже (в сравнении соера. Кора мозга у ДОКА - зависимых живоII группой). Чаще встречаются дифференци-тных по степени развития гематоэнцефалирующиеся глиобласты и астробласты (поческого барьера, и дифференцировки

сравнению с 1 и И группами). Обнаружи-глиальных нервных элементов соответствуваются единичные клетки, похожие на5 ет коре 6 - 7 дневных белых крыс,

олигодендроциты. Также повышается со-Модель очень удобна для изучения продержание микроглиоцитов и отмечаютсяцессов пролиферации и дифференцировки

признаки их активации. Еще в большей сте-клеточных элементов мозга и становления

пени (в сравнении со I группой) выраженыгематоэнцефалического барьера. Ее можно

утолщение теменной коры: увеличение аб-10 рекомендовать в качестве одной из моделей

солютной и относительной масс большогодля изучения влияния избытка минераломозга; свето- и электрон номикроскопиче-кортикоидов в системе мать-плод на проские признаки дифференцировки крупныхцессы морфогенеза различных систем и

пирамидных нейронов и ускоренного разви-органов у потомства. Выявленные морфотия гематоэнцефалического барьера. В те-15 функциональные критерии изменений оргаменной коре крысят II группы болеенов у детенышей могут быть использованы

выражены (по сравнению с I и II) деструктив-в разработке рекомендаций по коррекции

ные изменения глиобластов, нервных отро-этих изменений, что может быть внедрено в

стков и сосудистой стенки, не имеющиепрактику акушерства и педиатрии,

широкого распространения. Однако увели-20

чение доз ДОКА свыше 2,0 мкг/100 г и дли-Формула изобретения

тельности воздействий (более 14 .суток)Способ моделирования процессов размогут привести к грубым деструктивным из-вития коры больших полушарий путем ввеме нениям, отеку мозга и гибели животных.дения биологически активных веществ

Таким образом, при меньших дозах ДО-25 самке на 14 день беременности, о т л и ч аКА (Игруппа) более выражены процессыю щ и и с я тем. что, с целью полумения

пролиферации глиобластов, при большихускоренного развития теменной коры у подозах и длительности воздействия гормо-- томства вводят дезоксикортикостерон-аценом(III группа)-процессы ускорения диф-тат в дозе 2,0-0,8 мг/300 г массы тела

ференцировки нейронов, глиобластов и30 внутримышечно в период с 7 по 14 день

становления гематоэнцефалического барь-беременности.

Изобретение относится | экспериментальной медицине. Способ позволяет получить ускоренное развитие теменной коры у новорожденных крысят. Для этого на 7-14 сутки беременности животных - матерей вводят дезоксикартИкостерон-ацетат внутримышечно в дозе 2,0-0,8 мкг/100 г массы тела.