Способ получения лечебного экстракта Советский патент 1993 года по МПК A61K35/78 A61K35/00 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для получения веществ, обладающих антитоксической активностью применяться при изготовлении препаратов ветеринарного назначения.

Известен способ получения лечебного препарата из биологического сырья, который заключается в том, что в качестве биологического сырья используют листья алоэ. Их предварительно консервируют, выдерживая в темноте несколько суток при температуре+ 4-8°С, промывают дистиллированной водой, очищают от зубчиков и концов, измельчают, настаивают в дистиллированной воде при комнатной температуре, затем несколько минут кипятят, фильтруют, добавляют дистиллированной воды, снова кипятят и фильтруют, разливают в ампулы, запаивают и автоклавируют.

Недостатком известного способа является его невысокая эффективность и низкий антитоксический эффект получаемого при этом продукта.

Цель изобретения - повышение зффек- V/ тивности способа, а также увеличение анти- f токсической активности получаемого препарата.3

Пример 1. Было взято 100 г куколок шелкопряда, которые тщательно измельчили и смешали с 500 мл дистиллированной. воды. Затем смесь нагревали до температу- 4 ры кипения. Полученный экстракт сливали в jOO отдельный сосуд, а биомассу куколок сме- ч| шивали с 300 мл дистиллированной воды и f нагревали до температуры кипения. Пол- (л) ученный экстракт отделяли от биомассы и s,Q смешивали с первичным экстрактом, а биомассу куколок - с 200 мл дистиллированной , воды и нагревали до кипения. Полученную третью фракцию смешивали с предыдущи- - ми экстрактами. Эту смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали для отделения биомассы куколок. Затем фильтрат выдерживали 18 часов при температуре +2°С и при этой же температуре повторно фильтровали для отделения осадка. Объем фильтрата доводили дистиллированной водои до 1 л. В полученный экстракт добавляли натрий хлористый до получения изотонического раствора, после чего разливали во флаконы и стерилизовали. Стерильный экстракт разводили физиологическим раство- ром в соотношении 1:20 и инъецировали подкожно десяти белым мышам в дозе 0,1 мл на голову однократно. Десяти контрольным рвотным подкожно вводили такую же дозу (физиологического раствора. Через семь дней всём мыиГам вво дили летальную дозу стрихнина. В результате этого, все контрольные мыши погибли, спустя 11,1 ±1,39 минуты после затравки. Мыши, которых обрабатывали экстрактом из куколок шелко- пряда, разбавленным физиологическим раствором в соотношении 1:20 в дозе 0,1 мл однократно, имели продолжительность жизни после затравки больше, чем контрольные (16,25 ± 1,55 минуты при Р/0,05). Кроме того, 4 мыши (40%) опытной группы выжили. Это говорит о высоком уровне антитоксического действия экстракта из куко- лок шелкопряда, приготовленного заявляемым способом. Антитоксическую активность оценивали также по парабиоти- ческому и антитоксическому строфантинно- му тестам (Тканевая терапия / Под ред. Н.А.Пучковской. - К.: Здоровье, 1975,- 207 с). Парабиотический тест заключался в фик- сации скорости выхода изолированных пор- тняжных мышц лягушки в изучаемом растворе из состояния парабиоза, вызванного 1% раствором хлористого калия. Контрольным раствором служил раствор Рингера. Мышцы, помещенные в экстракт из куколок шелкопряда в разведении физиологическим раствором 1:20, выходили из состояния парабиоза через 5,71 -±0,94 минуты, а контрольные - через 12,51 ±1,00 минуту (разница достоверна при Р/0,001),

Строфантинный тест заключался в обработке лягушек экстрактом из куколок шелкопряда, разбавленным физиологическим раствором в соотношёнии 1:20 в дозе 0,1 мл на одну лягушку однократно. Контрольным лягушкам инъецировали физиологический раствор в такой же дозе. Через 7 дней всем лягушкам вводили строфантин из расчета 0,2 мл на 10 г живой массы, вскры- вали грудную полость и наблюдали за продолжительностью работы сердца. Установлено, что у контрольных лягушек сердце сокращалось на протяжении 24,62± 9,12 минуты после инъекции отрав- ляющей дозы строфантина, а у лягушек, обработанных препаратом приготовленным заявляемым способом - на протяжении 60 и более минут (Р/0,001).

Антитоксические стрихнинный (1 тест), строфантинный (2 тест) и парабиотический (3 тест) тесты говорят о высоком уровне биологической активности лечебного экстракта из куколок шелкопряда,приготовленного заявляемым способом, вообще и о его антитоксическом эффекте, в частности.

Пример 2. Экстракцию из куколок шелкопряда проводили, как и в примере 1. После этого экстракт выдерживали 19 часов при температуре 3°С и при такой же температуре фильтровали. При таких условиях антитоксическая активность экстракта была следующей:

1 тест (см.пример 1) - 16,80 ±1,43 минуты при Р/0,05 (продолжительность жизни мышей после инъекции летальной дозы стрихнина), выжило 40% животных.

2 тест - скорость выхода изолированных мышц лягушек из состояния парабиоза составила 5,20 ± 0,95 минуты (Р/0,001).

3 тест - продолжительность работы сердца после введения отравляющей дозы строфантина - 60 и более минут (Р/0,001).

Пример 3. Экстракцию проводили, как и в примере 1. После этого экстракт выдерживали 20 часов при температуре 5°С и при такой же температуре фильтровали. При этом антитоксическая активность экстракта характеризовалась следующими показателями:

1 тест - продолжительность жизни мышей после инъекции летальной дозы стрихнина 16,89 ± 1,37 минуты. (Р/0,05), выжило 40% мышей.

2 тест - скорость выхода изолированных мышц лягушек из состояния парабиоза 5,38 ±0,75 минуты (Р/0,001).

3 тест - продолжительность работы сердца после введения отравляющей дозы строфантина 60 и более минут (Р/0,00).

Согласно предлагаемому способу биомассу куколок экстрагировали дистиллированной водой путем нагрева до температуры кипения в три последовательных приема. При такихусловиях происходит наиболее полная экстракция из биомассы куколок шелкопряда комплекса биологически активных веществ (табл. 1).

При условиях, отличных от предлагаемых (меньшее число экстракций, меньшая температура экстракции) ,не. достигается максимальный выход экстрагируемых веществ. При большем количестве экстракций (при одинаковом выходе экстрагируемых веществ) увеличивается трудоемкость процесса.

Первая экстракция, согласно заявляемому способу, проводилась в соотношении

1:5, вторая - 1:3, третья - 1:2 (масса куколок шелкопряда к массе дистиллированной воды). При таком соотношении реагентов достигается максимальный процент выхода экстрагируемых веществ, необходимый для промышленной технологии получения экстракта (табл. 2).

Полученные три фракции экстракта смешивают, фильтруют при комнатной температуре для отделения биомассы измельченных куколок, выдерживают 18-20 часов при температуре не выше +5°С для образования осадка, который негативно сказывается на качестве экстракта (табл. 3) и при этой же температуре повторно фильт- руют.

Согласно данным табл. 3, при режиме 18-20 часов и выдержке при температуре не выше 5°С наблюдается полное отделение осадка. Дальнейшее снижение температу- ры и увеличение продолжительности выдержки нецелесообразно, т.к. дает аналогичный эффект. При более высокой температуре осадок, который ухудшает ор- ганолептические качества экстракта, обра- зуется не полностью,

Различные режимы экстракции влияют также на биологическую (антитоксическую) активность экстракта из куколок шелкопряда (табл. 4).

Анализ данных таблицы 4 показывает, что антитоксический эффект лечебного экстракта из куколок шелкопряда, приготовленного заявляемым способом, наивысший по сравнению с препаратами, полученными при отличных от предлагаемого режимах экстракции: показатели антитоксической активности по стрихнинному (1 тест - продолжительность жизни мышей после введения летальной дозы стрихнина в мину- тах - выживаемость мышей в %), парабио- тическому (2 тест - скорость выхода

изолированных портняжных Мышц лягушки из состояния парабиоза в минутах) и стро- фантинному тестам (3 тест - продолжительность работы сердца лягушек после инъекции отравляющей дозы строфантина в минутах) самые высокие, если экстракцию проводить предлагаемым способом в три последовательных этапа и выдерживать при температуре не выше +5°С в течение 18-20 часов с последующей фильтрацией при этой же температуре. Способ прототипа для приготовления препарата из куколок шелкопряда также менее эффективен, так как дает меньшую антитоксическую активность, как и экстракт алоэ, приготовленный согласно А.С. №96478.

Таким образом, экстракция куколок шелкопряда предлагаемым способом дает возможность достигнуть повышения эффективности известного способа и увеличения антитоксического эффекта конечного продукта.

Формула изобретения Способ получения лечебного экстракта, включающий измельчение исходного сырья, экстракцию дистиллированной водой, фильтрацию, доведение дистиллированной водой до определенного объема, повторную фильтрацию, разлив, закупоривание и авто- клавирование, отличающийся тем, что, с целью повышения антитоксической активности препарата, в качестве исходного сырья используют куколки шелкопряда, экстракцию осуществляют в три приема путем нагрева до температуры кипения: сначала сырье экстрагируют в соотношении с водой 1:5, полученный экстракт сливают, затем доливают воду в соотношении 1:3, экстракт слвают, после чего доливают воду в соотношении 1:2. причем три фракции экстракта сливают вместе, фильтруют, выдерживают в течение 18-20 ч при 2-5°С.

Использование: технология получения ветпрепаратов. Сущность изобретения: куколки шелкопряда измельчают, заливают дистиллированной водой в соотношении 1:5. доводят до кипения, экстракт сливают, в биомассу заливают воду в соотношении 1:3, экстракт сливают, доливают воду в соотношении 1:2, все три фракции экстракта смешивают, фильтруют, выдерживают в течение 18-20 ч при 2-5°С, снова фильтруют, доливают натрий хлористый, разливают во флаконы и стерилизуют. 4 табл.

Влияние количества экстракций и температурного режима на извлечение биологически активных веществ из куколок шелкопряда

Т а б л и ц а 1

Влияние соотношения компонентов в процессе экстракции на выход экстрагируемых веществ

Влияние продолжительности и температуры выдержки экстракта на образование осадка

Примечание. - после фильтрации и повторного отстаивания осадок не образуется; - - после фильтрации и повторного отстаивания выпадает новый осадок.

Продолжение табл.1

Таблица2

ТаблицаЗ

Таблица4

«

Биологическая активность лечебного экстракта из куколок шелкопряда в зависимости от режима экстракции и в сравнении с прототипом