СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА Российский патент 1999 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к клинической иммунологии и может быть использовано в медицинской практике в качестве оценочного теста на определение у людей индивидуальной дифференцированной активности систем Т- и В-лимфоцитов, как показателей клеточного иммунитета или иммунологической реактивности.

Иммунологическую реактивность человеческого организма можно определить чисто иммунологическими методами: начиная с момента выделения пула лимфоцитов из образцов крови с последующим разделением на фракции Т- и В-лимфоцитов (фекол-гепаковый метод), выделением отдельных фракций внутри Т-лимфоцитов (хелперы, супрессоры, активаторы и т.д.), идентификацией современными методами иммуноферментного анализа с моноклональными антителами к каждому конкретному типу, постановкой реакций розеткообразования, бласттрансформации и миграции лимфоцитов. Перечисленные методы дают значительный объем информации о характеристике индивидуального клеточного иммунитета, однако их постановка занимает достаточно длительный промежуток времени, очень дорогостоящая ввиду высокой стоимости оборудования и реактивов, а следовательно, не имеет широкого применения в повседневной медицинской практике. Кроме того, в клинической иммунологии до настоящего времени нет четких критериев оценки нормального иммунологического статуса, т. к. пределы колебаний количественных показателей весьма значительны.

Известны способы для оценки состояния клеточного иммунитета путем постановки кожных проб. В частности, в клинических исследованиях по определению индивидуальной чувствительности к различным антибиотикам и другим аллергенам, когда внутрикожно вводят 0,1- 0,2 мл того или иного исследуемого материала. На месте его введения появляются покраснение, отечность и уплотнение кожи, которые и принято называть папулой. Реакцию учитывают по диаметру папулы вначале через 15-20 минут (реакция немедленного типа), а затем аналогично через 24- 48 часов (реакция замедленного типа). В реакции немедленного типа наряду с рядом факторов неспецифического иммунитета, наиболее активно проявляется реакция В-лимфоцитов. В реакции же замедленного типа отражаются в основном функциональные характеристики системы Т- лимфоцитов. Информацию об иммунологической реактивности макроорганизма можно получить и в ходе постановки кожных проб с препаратами туберкулина, паротитного антигена и некоторых других. Однако, в этих случаях, наличие в сыворотке крови специфических антител к возбудителям туберкулеза и эпидемического паротита препятствует получению достоверного ответа на уровень активности как Т-, так и В-лимфоцитов.

Более достоверные результаты могут быть получены при направленном определении активности системы лимфоцитов в случае использования для постановки кожной пробы такого митогена, как фитогемагглютинин (1). Однако для широкого клинического применения препарат не может быть использован ввиду того, что он может вызывать агглютинацию эритроцитов.

Таким образом, используемые с различной частотой в медицинской практике кожные пробы, практически не дают достоверной информации об уровне иммунологической реактивности человеческого организма.

Задача, на решение которой направлено заявляемое изобретение, состоит в разработке способа определения активности клеточного иммунитета, позволяющего достоверно, информативно и в краткие сроки определять уровень дифференцированной активности Т- и В-лимфоцитов.

Сущность изобретения состоит в том, что экспресс-определение уровня дифференцированной активности Т- и В-лимфоцитов проводят путем постановки кожной пробы препаратом антилимфоцитарного иммуноглобулина (АЛГ) в объеме 0,1 мл, содержащем 10 лимфотоксических единиц (ЛЕ) (ВФС-42-1598-86).

Способ осуществляют следующим образом: в кожу сгибаемой медиальной поверхности предплечья с помощью одноразового шприца вводят препарат АЛГ в дозе 10 ЛЕ (стандартный препарат, выпускаемый промышленным образом, содержит 1000-12000 ЛЕ, поэтому его предварительно - разводят в 100 раз стерильной водой для инъекций). Это оптимальная доза, хотя реакцию вызывают как большие, так и меньшие дозы АЛГ. Меньшая доза может быть использована в случае определения активности системы лимфоцитов у людей, страдающих различными аллергическими проявлениями, а большая доза - у людей с выраженными явлениями иммунодефицита.

При проведении теста измерялась величина папулы по двум взаимно перпендикулярным направлениям.

Для контроля в кожу сгибаемой медиальной поверхности другого предплечья одноразовым шприцем внутрикожно вводили плацебо (лошадиный иммуноглобулин в разведении 1: 100 на воде для инъекций). Нормальным явлением считали отсутствие папул в реакциях как немедленного, так и замедленного типа. Если внутрикожное введение АЛГ вызывает реакции замедленного типа, немедленного типа, которые проявляются в реакции гиперчувствительности, то это отражает активность клеточного иммунитета.

Способ поясняется следующими примерами:
Пример 1. Высшее учебное заведение Т. Группа студентов в количестве 26 человек, клинически здоровых, не имевших в анамнезе болезней крови, наследственных и каких-либо хронических заболеваний, а также каких бы то ни было аллергических проявлений, в возрасте от 20 до 25 лет, обоих полов. Постановку кожной пробы осуществляли путем внутрикожного введения 10 ЛЕ препарата АЛГ. В качестве плацебо в другую руку внутрикожно вводили лошадиный иммуноглобулин в разведении 1:100. При учете результатов через 20 минут после введения АЛГ (реакция немедленного типа) выявлен средний диаметр папулы, равный 25 мм, при колебаниях от 20 до 28 мм, что соответствует достаточной активности системы В-лимфоцитов периферической крови. Учет результатов через 24 часа (реакция замедленного типа) после введения АЛГ выявил средний диаметр папулы в 20 мм при колебаниях от 16 до 25 мм, что, в свою очередь, соответствует достаточной активности системы Т- лимфоцитов. При этом на месте введения плацебо ни через 20 минут, ни через 24 часа папулы выявлено не было. Таким образом, среди лиц, клинически здоровых, не страдающих системными или хроническими заболеваниями, а также аллергическими проявлениями, не выявлено недостаточности функций систем Т- и В-лимфоцитов, что подтверждает выраженную реакцию клеточного иммунитета и позволяет быстро (уже через 24 часа) и достоверно оценить состояние систем как Т-, так и В-лимфоцитов как удовлетворительное.

Пример 2. Завод по производству акрилсодержащих полимеров С. 72 работника, занятых непосредственно производством акрилсодержащих полимеров и изделий из них, в возрасте от 26 до 52 лет со стажем работы на данном предприятии от 4 до 12 лет, обоих полов, страдающие частыми заболеваниями гриппом и острыми респираторными заболеваниями, а также гнойно-воспалительными заболеваниями кожных покровов. Постановку кожной пробы осуществляли путем внутрикожного введения препарата АЛГ в дозе 10 ЛЕ. Учет результатов выявил отсутствие папулы у 52 обследованных как через 20 минут, так и через 24 часа, что свидетельствует о подавленном состоянии функций систем Т- и В- лимфоцитов. Положительная реакция немедленного типа обнаружена у 18 человек, причем у 13 из них диаметр папулы находился в пределах от 5 до 10 мм, что говорит о частичной недостаточности функции системы В- лимфоцитов. У 5 обследованных диаметр папулы находился в пределах 20- 22 мм, что подтверждает выраженную реакцию системы В-лимфоцитов и соответствует норме. Положительная реакция замедленного типа отмечена лишь у 2 обследованных. Средний диаметр папулы составлял 20 мм, что подтверждает выраженную реакцию системы Т-лимфоцитов. Таким образом, из общего числа обследованных лишь 5 человек ( что составляет менее 7 процентов) имеют нормальную функцию клеточного иммунитета, проявляющуюся в достаточно выраженной активности систем Т- и В- лимфоцитов.

Пример 3. Клиника сосудистой хирургии М. 50 больных, страдающих ишемической болезнью сердца, атеросклерозом магистральных сосудов, облитерирующим эндартериитом, тромбозом, подлежащих оперативному лечению. Постановку кожной пробы осуществляли путем введения препарата АЛГ в дозе 10 ЛЕ за несколько дней до операции. Учет результатов реакции немедленного типа у пациентов, у которых папула либо отсутствовала вообще, либо была слабо выражена (средний диаметр в пределах 5-10 мм) позволил достоверно прогнозировать развитие осложнений атеросклеротического характера в виде тромбозов в ходе течения послеоперационного периода (в течение 3 недель). Учет результатов реакции замедленного типа у пациентов, у которых папула либо отсутствовала вообще, либо была слабо выражена (средний диаметр в пределах 3-7 мм) позволил достоверно прогнозировать развитие осложнений по типу присоединения вторичной инфекции в ходе течения послеоперационного периода. В тех же случаях, когда и через 20 минут, и через 24 часа регистрировали выраженность систем клеточного иммунитета (средний диаметр папул находился в пределах 20-25 мм в реакции немедленного типа и 16-25 мм в реакции замедленного типа) послеоперационное течение протекало гладко, практически без каких-либо осложнений.

Пример 4. Химическое предприятие по производству солей металлов (марганца, кобальта, магния, никеля, теллура, ванадия и др. ) К. 209 работников, занятых непосредственно в производственных цехах, обоих полов, со стажем работы на данном предприятии от 5 до 20 лет, со средним возрастом 41 год. Первичную постановку кожной пробы осуществляли путем внутрикожного введения препарата АЛГ в дозе 10 ЛЕ. Так как учет результатов выявил отсутствие папулы у 95 процентов обследованных как через 20 минут, так и через 24 часа, что свидетельствовало о выраженном подавлении реакций клеточного иммунитета, повторную постановку кожной пробы осуществляли путем внутрикожного введения 100 ЛЕ препарата АЛГ с целью определения степени выраженности иммунодефицита. Учет результатов этого исследования выявил отсутствие папулы у 15 человек как в реакции немедленного, так и замедленного типа, что позволило установить у этих обследованных ярко выраженное состояние иммунодефицита с высоким риском развития онкологических заболеваний. Это и было подтверждено в дальнейшем при детальном клиническом обследовании этой группы лиц. Наличие выраженной папулы (пределы размеров от 5 до 25 мм) как через 20 минут, так и через 24 часа свидетельствовали о частичном угнетении функций систем Т- и В-лимфоцитов. Полученные данные обследования легли в основу схемы назначения иммунокоррегируюшей терапии лицам с умеренно выраженным иммунодефицитом, в результате применения которой отмечено уменьшение проявлений астено-вегетативного синдрома и аллергических реакций, заметно снизилась заболеваемость гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями.

Источники информации.

1. Александер Дж.У., Гуд Р.А. Иммунология для хирургов. - М.: Мир, 1974, с. 71.

Изобретение относится к клинической иммунологии и может быть использовано в медицинской практике в качестве оценочного теста на определение у людей индивидуальной дифференцированной активности систем Т- и В-лимфоцитов. Способ включает внутрикожное введение митогена и параллельно с ним плацебо. Затем измеряют диаметр папулы в кожных реакциях немедленного и замедленного типа. Определяют выраженности функции систем Т- и В-лимфоцитов по диаметру папулы на введение митогена по сравнению с введением плацебо. При этом в качестве митогена вводят антилимфоцитарный иммуноглобулин в дозе от 10 до 850 лимфотоксических единиц. При диаметре папулы от 20 до 28 мм в реакции немедленного типа определяют функцию системы В-лимфоцитов периферической крови как выраженную реакцию. При диаметре папулы от 16 до 25 мм в реакции замедленного типа определяют функцию системы Т-лимфоцитов как выраженную реакцию. Перечисленные показатели позволяют определить активность клеточного иммунитета как нормальную. Способ позволяет назначить иммунокорригирующую терапию лицам с умеренно выраженным иммунодефицитом, тем самым снизить проявление астеновегетативного синдрома и аллергических реакций, снизить заболеваемость гриппом и острыми респираторными вирусными инфекциями.

Способ определения активности клеточного иммунитета, включающий внутрикожное введение митогена и параллельно с ним плацебо, последующее измерение диаметра папулы в кожных реакциях немедленного и замедленного типа и определение выраженности функций систем Т- и В-лимфоцитов по диаметру папулы на введение митогена по сравнению с введением плацебо, как показателя активности клеточного иммунитета, отличающийся тем, что в качестве митогена вводят антилимфоцитарный иммуноглобулин в дозе 10 - 850 лимфотоксических единиц и при диаметре папулы 20 - 28 мм в реакции немедленного типа определяют функцию системы В-лимфоцитов периферической крови как выраженную реакцию, при диаметре папулы 16 - 25 мм в реакции замедленного типа определяют функцию системы Т-лимфоцитов как выраженную реакцию, что позволяет определить активность клеточного иммунитета как нормальную.