Способ определения эндогенной интоксикации Советский патент 1993 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики эндогенных интоксикаций любого происхождения.

Известен способ диагностики эндогенной интоксикации при почечной недостаточности путем определения в сыворотке крови субстратов эндогенной интоксикации средней молекулярной массы с помощью обработки сыворотки крови 20-25% трихлоруксусной кислотой с последующим центри- фугированием и определением в супернатанте белково-пептидных компонентов методом Лоури.

К недостаткам известного способа относятся недостаточно высокая точность, определенная техническая сложность, что связано с использованием метода Лоури. На осуществление аналитического этапа способа затрачивается не менее АО минут.

Целью изобретения является повышение точности, упрощение и ускорение способа диагностики эндогенной интоксикации.

Цель достигается тем, что сыворотку или плазму крови депротеинируют трихлоруксусной кислотой в конечной концентрации не менее 8%, отделяют осадок белка центрифугированием, в супернатанте проводят биуретовую реакцию с реактивом Венедикта и через 15 мин (после добавления реактива Бенедикта) проводят спектрофото- метрическое определение в супернатанте субстратов эндогенной интоксикации - определяют оптическую плотность пробы при 330 нм, и при значениях более 0,25 опт.ед./мл диагностируют эндогенную интоксикацию.

Способ осуществляют следующим образом.

Образцы биологической жидкости (сыворотки или плазмы крови) в количестве 1,0 мл депротеинируют добавлением 0,2 мл трихлоруксусной кислоты в конечной концентрации не менее 8%:

- через 5 мин осадок белка отделяют центрифугированием: центрифугирование осуществляют в течение 5-15 мин при 3000 об/мин:

(Л

XI

о

VJ

о ел

Ч)

- после осаждения белка проводят в супернатанте биуретовую реакцию с реактивом Бенедикта: 0,5 мл супернатанта переносят в пробирки, содержащие 1,5 мл НаО и 2,0 мл 6%-ного раствора NaOH, добавляют 0,2 мл реактива Бенедикта (опыт); в контрольные пробирки вместо супернатанта вносят дистиллированную воду; , - не менее чем через 15 минут измеряют оптическую плотность пробы при 330 нм в опыте и контроле в кюветах с длиной оптического пути 10 мм;

- количество субстратов эндогенной интоксикации (биуретположительных веществ) выражают в единицах оптической плотности при 330 нм на 1 мл биологической жидкости. Для расчета величину оптической плотности Еззо умножают на 2 (для приведения к 1 мл) и на разведение, которое складывается из разведения биологической жидкости при депротеинировании в 1,2 раза и исходного разделения биологического материала (если таковое имеется);

- при величине оптической плотности, превышающей 0,25 опт.ед./мл диагностируют эндогенную интоксикацию.

Осуществление заявляемого способа при обследовании 14 здоровых доноров показало, что среднее значение содержания субстратов эндогенной интоксикации в норме составляет 0,22 ±0,01 опт.ед./мл, а предельное значение (верхняя граница нормы) для содержания биуретположительных веществ-0,25 ед./мл.

Пример 1. Больной Д-н поступил с проникающим ранением толстого кишечника. На второй день после оперативного вме- шательства состояние ухудшилось, развился разлитой перитонит, t 39,5 . У больного взято 4 мл крови, которую центрифугировали в течение 10 минут при 3000 об/мин. К 1,0 мл полученной сыворотки добавляли 0,2 мл 60% ТХУ, центрифугировали в течение 30 минут при 3000 .об/мин. Полученный супернатант - 0,5 мл - перенесли в пробирку, добавили 1,5 мл дистиллированной воды и 2,0 мл 6% NaOH и 0,2 мл реактива Бенедикта. Через 15 минут замеряли оптическую плотность при 330 нм против контроля (в контроле заменяли сыворотку крови на 0,9% Nad). Величина оптической

плотности - 0,434 ед., т.е. содержание субстратов эндогенной интоксикации составило 1,042 опт. ед/мл, что превышает верхнюю границу нормы в 4,17 раза. В соответствии с предложенным способом постзвлен диагноз: синдром эндогенной интоксикации. Диагноз подтвержден клинически.

П р им е р 2. Больной Ч-в, 2.9 лет, Поступил с жалобами на боли в правой подвздошной области, слабость, головную боль, диспептические явления, t ° 39,7° С, При физикальном обследовании заподозрен острый аппендицит. При оперативном вмешательстве был удален гангренозноизмененный аппендикулярный отросток, обнаружен местный перитонит. В соответствии с предложенным способом определено содержание субстратов эндогенной интоксикации в сыворотке крови больного; Еззо 0,252

ед., содержание биуретположительных субстратов эндогенной интоксикации - 0,605 опт.ед./мл, что превысило верхнюю границу нормы в 2,42 раза. Диагноз: эндогенная интоксикация, что соответствует клиническому состоянию больного.

По сравнению со способом-прототипом повысилась точность диагностики. Способ более прост в техническом осуществлении, так как содержит меньше технологических

операций. Продолжительность аналитического этапа предложенного способа составляет 15 мин.

Способ определения эндогенной интоксикации, Использование: в медицине, в ла. .I бораторной практике. Цель: повышение точности, упрощение и ускорение способа. Сущность изобретения: после осаждения белка крови трихлоруксусной кислотой, центрифугирования, к супернатанту добавляют щелочь и реактив Бенедикта и через 15 мин устанавливают оптическую плотность пробы при 330 нм и при значениях более 0,25 опт.ед./мл определяют наличие эндогенной интоксикации. Положительный эффект: использование способа позволит на 20% и более повысить точность способа и почти в 1,5 раза ускорить его.