Способ обнаружения гиперурикемии Советский патент 1993 года по МПК G01N33/52 

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для обнаружения гиперурикемии при подагре и хронических нефритах.

Целью изобретения является ускорение и снижение травматичности способа.

Указанная цель достигается тем, что диагностику гиперурикемии осуществляют путем определения мочевой кислоты в слезе больного и при значении мочевой кислоты в слезе свыше 120 мкмоль/л судят о наличии гиперурикемии.

Предлагаемый способ по времени занимает не более 15 мин: 2 мин на взятие слезы, 10 мин на проведение реакции (разливание реактивов 5 мин, термостатирование 5 мин), 3 мин на регистрацию показаний прибора.

Способ осуществляют следующим образом.

У больного глазной пипеткой берут каплю слезы (0,03 мл) после поднесения к носу ватки, смоченной 10% нашатырным спиртом. Для определения мочевой кислоты использовали специфичный, фермента- тивный метод. Он основан на расщеплении мочевой кислоты уриказой до аллантоина, углекислого газа, перекиси водорода с последующей индикаторной реакцией. Под действием пероксидазы из перекиси с амино-4-антипирином и 3,5- дихлор-2-гидроксибензолсульфоновой кислотой образуются хромоген, соляная кислота и вода.

Опытная проба, К 0,02 мл слезы добавить 1 мл рабочего раствора. Смешать, инкубировать 5 мин при 37°С в термостате. Измерить экстинкцию в кювете на спектрофотометре при длине волны 520 нм против холостой пробы. Окраска стабильна 30 мин. Рабочий раствор готовят следующим обра00

о ю

00

3

00

зом: к 25 мл 150 ммоль/л фосфатного буфера, рН 7 с 3,5-дихлор-2-гидроксибензол- сульфоновой кислотой (2 ммоль/л) добавляют уриказу ( 100 ед/л), перокси- дазу ( 5; 200 ед/л), 4-аминоантипирин (0,25 ммоль/л).

Холостую пробу обрабатывают также, как опытную, но вместо слезы берут 0,02 мл физиологического раствора.

Калибровочную пробу обрабатывают как опытную, но вместо слезы берут 0,02 мл стандартного (476 мхмоль/л) раствора мочевой кислоты. Измеряют при тех же условиях против холостой пробы.

Еоп

Расчет вели по формуле: А

п, где

А - количество мочевой кислоты, мкмоль/л; Еоп экстинкция опытной пробы; Ек - экс- тинкция калибровочной пробы; п 476 мкмоль/л.

Установлено,-что в слезе здорового человека содержится 62,9 + 5,5 мкмоль/л мочевой кислоты. Колебания у отдельных лиц были от 28 до 90 мкмоль/л.

В сыворотке крови здоровых людей содержание мочевой кислоты 351,5 + 10,9 мкмоль/л. Колебания у отдельных лиц от 245 до 418 мкмоль/л. Средний коэффициент слеза/кровь 0,18.

У больных с гиперурикемией (при подагре, заболеваниях почек) в слезе содержится 191,6 + 22,3 мкмоль/л мочевой кислоты. Максимум содержания мочевой кислоты у обследуемых больных составил 305 м мкмоль/л, минимум 121 мкмоль/л.

В-сыворотке крови больных с гиперурикемией содержание мочевой кислоты 663,0 + 47,8 мкмоль/л. Максимум в сыворотке 884, минимум 514 мкмоль/л мочевой кислоты. Средний коэффициент слеза/кровь у больных 0,29. При статистической обработке разница между содержанием мочевой кислоты в слезе здоровых людей и больных с гиперурикемией высоко досто-- верна (Р 0,001).

При повышении мочевой кислоты в слезе выше 120 мкмоль/л диагностирировали гиперурикемию. ..

Данные подтверждены клиническими и лабораторными испытаниями на 16 здоровых людях, 5 больных подагрой и 16 больных хроническим нефритом на базе нефрологического и кардиологического отделений МСЧ № 9 г. Перми с 23 июня 1989 года по 24 июля 1990 года.

П р и м е р 1. Здоровый человек У. 42 .года....

Анализ слезы от 19 декабря 1989 г.

Мочевая кислота 69 мкмоль/л.

Анализ крови от 19 декабря 1989 г. Мочевая кислота 324 мкмоль/л, У обследуемого содержание мочевой кислоты в слезе и крови в норме. П р и м е р 2. Больной Т., 46 лет.

Поступил в нефрологическое отделение с жалобами на боли в пояснице, головную боль, боли в области первого плюснефалан- гового сустава. Диагноз при поступлении: мочекаменная болезнь, симптоматическая гипертензия. Состояние больного удовлетворительное, кожа бледная. Границы сердца в пределах нормы, тоны сердца ритмичные. Артериальное давление 170/100. Дыхание везикулярное. Живот мягкий, безболезненный. Почки не пальпируются. Симптом Пастернацкого положителен с обеих сторон.

Из биохимического анализа крови: мо- чевина 9,5 мкмоль/л, мочевая кислота 784 мкмоль/л.

Анализ слезы: мочевая кислота 236 мкмоль/л, что свидетельствует о наличии гиперурикемии,

Анализ мочи: цвет соломенножелтый. мутная, реакция кислая. Удельный вес 1012; белок 0,33 г/л; лейкоциты 20-25; цилиндры гиалиновые 2-3; зернистые 2-4; эпителиальные клетки 7-8. Ураты -н-f. Таким образом, у больного повышено в крови содержание мочевой кислоты, мочевины, в слезе повышено содержание мочевой кислоты.

Окончательный диагноз: Мочекаменная болезнь, симптоматическая гипертензия. Подагрический артрит первого плюснефа- лангового сустава.

ПримерЗ. Больная Л„ 27 лет. Поступила в нефрологическое отделе- ние с жалобами на головную боль, слабость, быструю утомляемость. Состояние удовлетворительное, кожные покровы бледные, сухие. Лицо пастозное. Тоны сердца ритмичные, артериальное давление 150/90. Дыхание везикулярное, живот мягкий, безболезненный.

Обший анализ крови: эритроциты 3,1 -10 /л; гемоглобин 102 г/л; цветной показатель 1; лейкоциты 6,0 10°/л; С02 33 мл/ч.

Из биохимического анализа крови: белок 79,4 г/л; мочевина 25,7 ммоль/л; креа- тинин 0,47 ммоль/л; мочевая кислота 514 мкмоль/л..

Анализ мочи: моча мутная, реакция кислая. Белок 3,3 г/л; эпителиальные клетки 5-7; лейкоциты 8-10; эритроциты 20-30. Анализ слезы от 26 сентября 1989 года. Мочевая кислота 181 мкмоль/л.

Таким образом, у больной анемия, увеличено содержание мочевины, креатинина, мочевой кислоты в крови, увеличено содержание мочевой кислоты в слезе.

Окончательный диагноз: хронический гломерулонефрит, гипертонический вариант, обострение. Хроническая почечная недостаточность 2-3 степени.

Содержание мочевой кислоты в слезе повышено у больных только при наличии гиперурикемии. При повышении мочевой кислоты в слезе свыше 120 мкмоль/л диагностируем гиперурикемию.

Предлагаемый способ диагностики гиперурикемии значительно быстрее и проще известного способа, легко переносится больными, атравматичен. Особую ценность представляет при использовании в динами0

5

ке заболевания. Способ прост, надежен и доступен для использования в рядовых кли- нико-биохимических лабораториях. Формула изобретения Способ обнаружения гиперурикемии, включающий определение в биологической жидкости уровня мочевой кислоты путем добавления к пробе реагента, состоящего из 3,5-дихлор-2-гидрокСибензолсульфоновой кислоты, уриказы, пероксидазы и 4-амино- антипирина, инкубации смеси в течение 5 мин при 37°С с последующей спектрофото- метрией при 520 нм, отличающийся тем, что, с целью ускорения и снижения травматичности способа, уровень мочевой кислоты определяют в слезной жидкости и при значении этого показателя выше 120 ммоль/л судят о наличии гиперурикемии.

Использование: медицина, клиническая биохимия. Сущность изобретения: к слезной жидкости добавляют реагент, состоящий из 3,5-дихлор-2-гидроксилбензол- сульфоновой кислоты, уриназы, пероксидазы и4-аминоантипирина, инкубируют смесь в течение 5 мин при температуре 37°С и определяют уровень мочевой кислоты путем спектрофотометрии при 520 им и при значении этого показателя выше 120 ммоль/л судят о наличии гиперурикемии. Положительный эффект: способ атравмати- чен, использование способа позволяет в течение 15 мин определить наличие гиперурикемии.