Способ подготовки Т-розеткообразующих клеток крови для их светового и электронномикроскопического исследования на цитологических мазках-блоках Советский патент 1993 года по МПК G01N33/48 G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, цитологии и иммунологии,

Цель изобретения - повышение точности выделения специализированных иммунных Т-розеткообразующих клеток.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения клеток крови на цитологических мазках-блоках при световом и электронномикроскопи- ческом исследовании, включающего приготовление мазка, выбор клеток подлежащих электронномикроскопическому изучению, фиксацию, обезвоживание, заключение материала в эпоксидную смолу, специализированные иммунные Т-розетко- образующие клетки наносят на площадку пирамиды блоке, заточенного для ультратонкой резки, и обезвоживание материала осуществляют до выбора клеток подлежащих электронномикроскопическому исследованию.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом:

Иммунные Т-розеткообразующие клетки Т-системы иммунитета, полученные после завершения реакции розеткообразования фиксируют в пробирке в 1%-ном растворе глютаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,2-7,4) при 20-25°С в течение 15 мин, затем, после кратковременной промывки в фосфатном буфере, в 1%-ном растворе четы- рехокиси осмия на том же буфере на 10 мин. После промывки в буфере проводят дегидратацию и инфильтрацию клеток в 70° спирте в течение 5 мин .по 2 смены, в абсолютном ацетоне на 5 мин, затем клетки осаждают центрифугированием при 1000 об/мин в течение 3 мин (при объеме взвеси клеток - 0,2 см3). Надосадочный слой удаляют. Осадок клеток ресуспендйруют в 0,04-0,05 CMJ абсолютного ацетона, Мазки готовят на площадке пирамиды блока, заточенного для ультратонкой резки. Полученные мазки Т-клёток просмат00

о

Ч|

со о

00

ривают в светооптическом микроскопе посредством объектива с увеличением в 20 раз, блоки для этого устанавливают на предметных стеклах в вертикальном положении. В таком положении Т-розетки достаточно освещены светом, проходящим, параллельно оси блока. При отсутствии интересующей клетки, площадку пирамиды блока очищают от клеток ватным тампоном и на очищенную поверхность вновь наносят порцию клеток. Процесс повторяют до нахождения нужной клетки. Когда интересующая клетка найдена, то на поверхность площадки наносят каплю эпоксидной смолы с катализатором. Полимеризацию материала производят при 60°С в течение 48 ч. Площадки для мазков готовят на блоках ранее использованных для электронномикроскопических исследований.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет с высокой точностью выделять специализированные иммунные Т-розетко- образующие клетки для получения высококачественных срезов в исследовательской работе.

и

10

15

20

25

На чертеже показана Т-розеткообразу- ющая клетка, расположенная на площадке блока-шаблона, заточенного для ультратонкой резки.

Т-розеткообразующая клетка 1, 2, 3;

Эритроцит 1У Лимфоцит 2, Контакты между лимфоцитом и эритроцитом 3.

Площадка блок-шаблона 4.

Блок-шаблон 5.

Формул а изо бретени я

Способ подготовки Т-розеткообразую- щих клеток для их светового и электронно- микроскопического исследования на цитологических мазках-блоках, включающий приготовление мазка, выбор клеток, подлежащих изучению, их фиксацию, обезвоживание, нанесение на площадку пирамиды блока и заключения в эпоксидную смолу с последующим микроскопическим исследованием, отличающийся тем, что, с целью повышения точности исследования, мазки готовят на площадке пирамиды блока, заточенного для получения ультратонких срезов, при этом фиксацию и обезвоживание клеток проводят до выбора клеток, подлежащих изучению.

Использование: в области иммунологии, гематологии и цитологии. Сущность изобретения: готовят мазки и затем проводят выбор Т-розеткообразующих клеток, подлежащих электронномикроскопическому изучению, фиксируют их, обезвоживают, заключают материал в эпоксидную смолу, причем мазки готовят на площадке пирамиды блока, заточенного для получения ультратонких срезов, а фиксацию и обезвоживание клеток осуществляют до выбора клеток, подлежащих электронномикроскопическому изучению. Способ позволяет повысить точность исследования клеток. 1 ил.