СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АДГЕЗИВНОСТИ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ Российский патент 2000 года по МПК G01N33/48 G01N33/49 

Изобретение относится к области медицины, а именно к измерению характеристик крови в организме (лабораторной оценки свойств клеток периферической крови человека и животных с диагностическими и научно-исследовательскими целями).

Во всех областях прикладной и экспериментальной медицины известны широкое распространение и высокая информативность подсчета лейкоцитарной формулы периферической крови.

Известно, что все клетки организма осуществляют дистантное и контактное взаимодействие.

Клетки периферической крови в кровеносном русле взаимодействуют не только со структурами сосудов, но и между собою.

Существует несколько механизмов контактного взаимодействия клеток крови. Среди них - способность клеток крови к адгезии к окружающим их объектам. Степень адгезивности лейкоцитов и эритроцитов крови и значение этого феномена изучены недостаточно.

Конкретным проявлением адгезивности лейкоцитов в организме является их склеивание друг с другом, адгезия их к стенке капилляров и венул, а вне организма - прилипание лейкоцитов к стеклу, нейлону и другим объектам. Проявлением адгезивности эритроцитов является способность их формировать сладж-феномен.

Адгезивность клеток крови в определенной степени отражает их функциональное состояние, при многих патологических процессах это свойство клеток усиливается и включается в патогенетические цепи этих процессов (лихорадка, воспаление, инфекционный процесс, некроз и другие).

Подсчет лейкоцитарной формулы дает представление о соотношении различных видов лейкоцитов в крови, но не содержит информации о свойствах и взаимодействии этих лейкоцитов
Существующие методы определения адгезивных свойств клеток, основанные на дорогостоящих и сложных процедурах выделения адгезивных структур определенных видов клеток крови, требуют специальной аппаратуры, химреактивов, оборудования и специально подготовленного персонала.

Во многих случаях такая громоздкая процедура определения адгезивных свойств лейкоцитов является излишней и при отсутствии необходимости изучения тонких механизмов межклеточных взаимодействий предлагаемый нами метод является достаточно информативным для суждения об адгезивных свойствах различных видов лейкоцитов и отчасти эритроцитов в условиях нормы и патологии.

В настоящее время в медицине известен способ определения ауторозеткообразования в периферической крови при обзорном просмотре мазков крови /Д.И.Бельченко, "Розеткообразование в периферической крови крыс при гипокинезии". "Космич. биология и авиакосмич. медицина", 1990, N 4, стр. 58-59/. При всех достоинствах указанный метод ограничен изучением лейкоцитарно-эритроцитарных взаимодействий при различных патологических процессах, что суживает, на наш взгляд, рамки получаемой информации и области применения метода, поскольку не учитывает взаимодействие лейкоцитов с другими клетками крови.

В качестве прототипа использован метод подсчета процента "агломерированных лейкоцитов" в мазке крови при просмотре его по диагонали /М. И. Китаев, В. М.Евстратов, В.Н.Клейменов, "Лимфоцитарно-гранулоцитарное взаимодействие в феномере аллергической агломерации лейкоцитов (аллергенолейкергии) у больных инфарктом миокарда". "Здравоохранение Киргизии", 1986, N 1, стр. 43-45/. (В современной литературе вместо термина "агломерация" используется термин "агрегация"). На наш взгляд, подсчет количества агрегированных лейкоцитов при просмотре мазка по диагонали является недостатком метода. Поскольку в процессе изготовления мазка практически все агрегированные клетки оказываются смещенными на края мазка и в его "хвостовую" часть, поэтому при просмотре мазка по диагонали, при котором поле зрения микроскопа перемещается преимущественно в участках, лишенных агрегированных клеток, агрегаты клеток могут оказаться в стороне от просматриваемых зон мазка, в связи с чем, очевидно, авторам метода и приходилось сосчитывать 500 лейкоцитов, которые не могли все находиться на одной диагонали, а это увеличивало процент ошибки и усложняло процедуру. Кроме того, в данном методе не предусмотрено изучение лейкоцитарно-эритроцитарных взаимодействий, которое позволяет оценить не только лейкоцитарную адгезивность, но более широкие аспекты взаимодействий клеток периферической крови.

Учитывая изложенное выше, нами предлагается следующий способ определения адгезивности клеток периферической крови.

В мазке крови, окрашенном азуром и эозином унифицированным методом Романовского /"Лабораторные методы исследования в клинике", Справочник, под ред. В.В.Меньшикова, М., Мед., 1987/, подсчитывается лейкоцитарная формула. В отличие от стандартного способа перемещения поля зрения меандрами, проходящими преимущественно через центральные участки мазка, предлагается вести счет формулы на "верхнем" или "нижнем" крае мазка. При этом перемещение объектива микроскопа производится таким образом, чтобы верхний (нижний) срез поля зрения совпадал с краем мазка. Учитываются все виды неразрушенных лейкоцитов, кроме находящихся в кромке мазка, которые чаще всего оказываются разрушенными, деформированными, трудно идентифицируемыми, а их взаимодействие с окружающими их клетками носит чаще всего случайный характер и зависит не только от свойств клеток.

В числе агрегированных лейкоцитов включаются любые виды лейкоцитов, образующих плотные межклеточные контакты с одним и более лейкоцитов (лейкоцитарные агрегаты), с тремя и более эритроцитами (лейкоцитарно-эритроцитарные розетки), а также смешанные лейкоцитарно-эритроцитарные агрегаты с различным количеством клеток, вовлеченных в клеточный агрегат. Участие тромбоцитов в образовании клеточных агрегатов не учитывается, хотя в ряде случаев эти структуры содержатся в агрегатах. Не учитываются также межэритроцитарные агрегаты без лейкоцитов (сладж).

Свободные (не агрегированные) лейкоциты не имеют указанных контактов с соседними клетками.

С помощью вариантов регистрации результатов предлагаемый способ позволяет провести различную степень глубины проработки изучаемых показателей. Например, в зависимости от цели исследования, возможны следующие варианты регистрации лейкоцитов с учетом их агрегабильности:
1. Подсчет 100 (200, 300 и т.д.) лейкоцитов с пометкой агрегированных и учетом состава взаимодействующих клеток. Этот вариант регистрации дает ориентировочное представление об адгезивных свойствах клеток.

2. Подсчет процентного содержания всех видов лейкоцитов (лейкоцитарной формулы) с пометкой агрегированных и учетом состава взаимодействующих клеток. Данный вариант дает наиболее полное представление о состоянии адгезивных свойств интересующих клеток.

3. Подсчет определенного вида лейкоцитов с пометкой агрегированных.

Данный вариант дает ориентировочное представление об адгезивных свойствах интересующих видов лейкоцитов (гранулоциты, агранулоциты, моноциты и т.д.).

Как показали наши наблюдения, различные виды лейкоцитов проявляют неодинаковые агрегабильные свойства в различные периоды развития патологического процесса и болезни. Например, при лихорадке в лихорадочный период резко повышаются адгезивные, в том числе розеткообразующие свойства гранулоцитов, а в постлихорадочный (спустя 1-2 недели) моноциты (макрофаги) и в меньшей степени лимфоциты.

Процентное соотношения адгезированных и неадгезированных лейкоцитов, сосчитанных предлагаемым способом в различные периоды болезни, дают представления о динамике процессов (воспалительного, лихорадочного, инфекционного, иммунного и др.), влияющих на адгезивные свойства отдельных видов лейкоцитов.

Таким образом, предлагаемый нами способ определения адгезивных свойств клеток периферической крови основан на хорошо известных методических приемах, предельно прост и доступен для изучения в лаборатории с минимальным материалом обеспечением и в то же время представляет исследователю широкую информацию о состоянии кроветворной, иммунной, микроциркуляторной и других систем с выходом на более высокие системные уровни, чего не может дать ни один из использованных аналогов и прототипов. Следует подчеркнуть, что лейкоцитарная формула, сосчитанная предлагаемым способом, во многих случаях значительно отличается от сосчитанной стандартным способом и, на наш взгляд, точнее отражает истинные изменения в составе лейкоцитов на данный период развития данной болезни.

Изобретение относится к области медицины, а именно к измерению характеристик крови в организме (лабораторная оценка свойств клеток периферической крови человека и животных с диагностическими и научно-исследовательскими целями). Способ оценки адгезивных свойств клеток периферической крови включает подсчет процентного содержания отдельных видов лейкоцитов, взаимодействующих между собою и с эритроцитами, с учетом особенностей распределения клеточных агрегатов в мазке крови. Технический результат: способ точнее отражает истинные изменения в составе лейкоцитов на данный период развития данной болезни.

Способ определения адгезивности клеток периферической крови, заключающийся в регистрации лейкоцитов с учетом их агрегабильности, отличающийся тем, что при подсчете лейкоцитов учитывается их местонахождение в мазке и взаимосвязь их с другими клетками.