Способ микроклонального размножения раувольфии Советский патент 1993 года по МПК C12N5/04 

Изобретение относится к биотехнологии и может применяться для ускоренного размножения растений с их одновременным оздоровлением от фитопатогенных микроорганизмов.

Целью изобретения является разработка способа микроклонального размножения разных видов раувольфии, в том числе видов, являющихся .источником ценных алкалоидов, используемых в медицине.

Пример. Вычлененные из однолетних побегов пазушные почки с участком побега после поверхностной стерилизации переносят в асептических условиях на простерили- зованную питательную среду следующего состава, мг/л:

Макросоли по Мурасиге-Скугу 1/3, микроэлементы по Мурасиге-Скугу; Fe-хелат5 мл/л Глицин 2 Аскорбиновая кислота 3-5 ИУК 0,3-0,5 БАП 0,01-0,1 Гумат натрия 30-50

Сахароза15-20 г/л Агар 5-7 г/л Пробирки с высаженными пазушными почками помещают в термостатированные условия (22-28°С) с 12-16-часовым световым днем и с освещением 1000-2000 люкс.

Через 30-50 дней из почек вырастают стебельки, которые в асептических условиях .отделяют от остатка стебля исходного рас- . тения. В дальнейшем стебельки либо укореняют, либо размножают далее. С целью размножения стебельки разрезают на фрагменты с одной пазушной почкой и культивируют в тех же условиях.

Дальнейшее размножение выросших из пазушной почки растений проводят либо на среде указанного выше состава, либо же на среде следующего состава, мг/л:

МакросолИ по Мурасиге-Скугу 80%, микроэлементы по Мурасиге-Скугу,

Fe-хелат .5 мл/л Аденин 5 Кинетин 1 а-НУК 0,5 Тиамин 1 Аскорбиновая кислота 3-5

ел

с

со а со

о

со

Гумат натрия30-50 Сахароза 20 г/л Агар 5-7 г/л Укореняют растения на питательной среде следующего состава, мг/л:

Макросоли по Уайту, микроэлементы по Мурасиге-Скугу,

Fe-хелат5 мл/л Глицин 2 Аскорбиновая кислота . 3 ИУК - 0,5 Гумат натрия 50 Сахароза 10 г/л Агар 5-7 г/л Укорененные растеньица высаживают в почву и выращивают, как это принято для тропических растений.

По изложенному способу были размножены, укоренены, высажены в почву и выращены до взрослого состояния раувольфии змеиная Rauwolfia serpentirra, раувольфия мутовчатая Rauwolfia verticillata, раувольфия седоватая Rauwolfia canescens, раувольфия рвотная Rauwolfia vomitoria, раувольфия китайская Rauwolfia chinensis, раувольфия кафрская Rauwolfia caffra. Все размноженные In vitro растения нормально развивались, цвели и плодоносили, отличались здоровым внешним видом. Других отличий по сравнению с исходными растениями не установлено. В таблице даны результаты микроклонального размножения разных видов раувольфии на основе культивирования пазушных почек стебля.

Наиболее легко по изложенному способу размножается раувольфия рвотная, относительно трудно - раувольфия китайская и раувольфия седоватая, Последние два вида для эффективного размножения мо выращивать попеременно на приведенных составах питательных сред.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет размножать разные виды раувольфии. Это особенно важно для тропических, фармакологических ценных видов как при их выращивании в теплице, так и для ускоренного размножения ценных форм с одновременным их оздоровлением от фито- патогенных микроорганизмов.

ф о р м у л а и з о б р е те н и я

Способ микроклонального размножения раувольфии, включающий эксплантацию пазушных почек на модифицированную питательную среду Мурасиге-Скуга, получение

растительного материала, культивирование его до получения растений-регенеран- тов и их укоренение, отличающийся тем, что эксплантацию осуществляют на питательную среду, содержащую макросоли

по Мурасиге-Скугу в концентрации, равной 1/3 указанной в прописи, микроэлементы по Мурасиге-Скугу, 5 мл/л Fe-хелата, 2 мг/л глицина, 3-5 мг/л аскорбиновой кислоты, 0,3-0,5 мг/л ИУК, 0,01-0,1 мг/л БАП, 30-50

мг/л гумата натрия, 15-20 г/л сахарозы. 5-7 г/л агара, культивирование растительного материала осуществляют на питательной среде того же состава или на питательной среде, содержащей макросоли по МурасигеСкугу в концентрации, равной 80% от указанной в прописи, микроэлементы по Мурасиге-Скугу, 5 мл/л Fe-хелата. 5 мг/л аденина, 1 мг/л кинетина, 0,5-мг/л а-НУК, 1 мг/л тиамина, 3-5 мг/л аскорбиновой кислоты, 30-50 мг/л гумата натрия, 20 г/л сахарозы, 5-7 г/л агара, и укоренение осуществляют на питательных средах того же состава или на Питательной среде, содержащей макросоли по Уайту, микроэлементы по

Мурасиге-Скугу, 5 мл/л Fe-хелата, 2 мг/л глицина, 3 мг/л аскорбиновой кислоты, 0,5 мг/л индолилуксусной кислоты, 50 мг/л гумата натрия, 10 г/л сахарозы, 5-7 г/л агара.

Ср«да I, среда 2, соча 3 - номер среди порядке приведет ее состава а тексте заявки.

Использование: биотехнология, медицина, фармакология. Сущность изобретения: растения различных видов раувольфии размножают с высоким коэффициентом размножения путем введения в культуру пазушных почек и пассирования на питательные среды специально подобранного состава. 1 табл.