Способ определения обсемененности желчи энтеробактериями Советский патент 1993 года по МПК G01N33/558 

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологической диагностике заболеваний человека, и может быть использовано для экспресс-идентификации энтеробактерий в желчи.

Целью предлагаемого изобретения является повышение чувствительности способа, сокращение времени анализа и его упрощения.

Поставленная цель достигается в изобретении тем, что перед исследованием желчь центрифугируют и методом двойной иммунодиффузии выявляют наличие растворимых антигенов Alcaligenes fecalis и при их обнаружении определяют обсемененность желчи энтеробактериями.

Желчный пузырь и желчные протоки при воспалительных заболеваниях билиар- ного тракта часто поражаются микроорганизмами, при этом в подавляющем большинстве случаев высевают различные

энтеробактерий. Они представляют собой родственные микроорганизмы и имеют в своем составе общие антигены, по наличию которых возможна сероидентификацич бактерий данного семейства. Е.Монцевичюте- Эрингене (Метод ускоренной оценки иммунного статуса человека. - Вильнюс, 1986) для определения в сыворотке крови антител разработала тест-систему общего антигена энтеробактерий, в качестве которой используется водно-солевой экстракт культуры Alcaligenes fecal is и кроличья антисыворотка к нему, полученная на 6-е сутки после однократной внутривенной иммунизации.

Способ определения обсемененноети желчи энтеробактериями осуществляется следующим образом. Желчь получают с помощью дуоденального зондирования отдельно по порциям или во время операции на желчном пузыре. Полученные пробы цен(Л

С

оо

Ј со

ю о

Јо

трифугируют при 3000 об/мин в течение 15 мин и с надосадком центрифугата ставят реакцию двойной иммунодиффузии в геле общепринятым методом по прилагаемой схеме (фиг. 1).

Схема постановки реакции двойной иммунодиффузии в геле для выя вления в желчи общего антигена энтеробактерий

А- антисыворотка к водносолевомуэкстракту культуры алкалигенес фекалис

1 - буфер

2 - водно-солевой экстракт культуры алкалигенес фекалис

3 - исследуемая желчь Таким образом, лунки 1 являются отрицательным контролем, а 2 - положительным контролем, где всегда должна формироваться линия преципитации.

Стекла инкубируют в течение 24 ч при 37°С и учитывают результаты. При положительном результате как и в положительном контроле между центральной лункой и лункой 3, где находится исследуемый материал, формируется идентичная линия преципитации. При отсутствии в исследуемом образце желчи общего антигена энтеробактерий линия преципитации не формируется, что свидетельствует об отсутствии в материале энтеробактерий (фиг.2).

Результаты выявления общего антигена энтеробактерий в желчи с помощью реакции двойной иммунодиффузии в геле на фиг.2.

Предлагаемый способ был успешно апробирован на кафедрах микробиологии, детских болезней с детскими инфекциями лечебного факультета, терапии 1, терапии 3 и общей хирургии Астраханского государст- венного медицинского института им. А.В.Луначарского на материале, полученном от 38 больных с заболеваниями билиар- ной системы в течение мая - августа 1988 года. Ниже приводятся результаты апробации,

П р и м е р 1. Задачей эксперимента являлось выяснение возможности выявлений в реакции двойной иммунодиффузии в геле С помощью кроличьей антисыворотки к водно-солевому экстракту Alcallgenes fecalls общего антигена у различных видов энтеробактерий. Были получены водно-солевые экстракты 24-часовых культур кишечной палочки, сальмонелл тифа, сальмонелл тифимуриум, шигелл Флекснера и Зонне путем их дезинтеграции 7-ми кратным замораживанием с последующим оттаиванием и гомогенизацией со стеклянным порошком. Реакцию двойной иммунодиффузии ставили по предложенной схеме, но вместо исследуемого образца желчи в лунку 3 вносили

экстракты энтеробактерий. Во всех случаях в опыте формировалась линия преципитации аналогичная таковой в положительном контроле. Таким образом, показана воз- можность выявления общего антигена в составе энтеробактерий (эшерихий, сальмонелл, шигелл) с помощью антисыворотки предложенной тест-системы,

П р и м е р 2. Предпринята попытка обнаружения общего антигена энтеробактерий в желчи после культивирования в ней культуры кишечной палочки. В желчь, в которой не обнаруживался с помощью предложенного способа общий антиген энтеробактерий, вносили 1 миллиард микробных клеток кишечной палочки штамма О III на 1 мл. Пробы инкубировали при 37°С в течение 24 ч, затем центрифугировали при

3000 об/мин в течение 30 минут и проводили тестирование в них общего антигена энтеробактерий в реакции двойной иммунодиффузии в геле по предложенной схеме. Исследуемые образцы давали положительный результат на наличие искомого антигена. Таким образом, оказалось возможным выявление общего антигена энтеробактерий при наличии в желчи микроорганизмов данного семейства.

Пример 3. Проводили выявление общего антигена энтеробактерий в желчи от трех больных с калькулезным холециститом, которую получали во время операции холе- цистоэктомии. Во всех исследуемых образцах с помощью предлагаемого способа был обнаружен искомый антиген. Параллельное проведение бактериологического исследования с последующим осуществлением се- роидентификации с помощью реакции

агглютинации показало, что у одного больного из желчи выделена культура сальмонелл тифа и у одного - кишечная палочка. То есть, общий антиген энтеробактерий определялся у 100% больных, а бактериологические бактерии данного семейства выделялись у 66, 7% обследованных лиц.

П риме р.4. Было проведено выявление общего антигена энтеробактерий в желчи 23 больных детей в возрасте от 9 до 14 лет с

диекинезиями желче вы водящих путей. Материал для проведения исследований получали с помощью дуоденального зондирования отдельно по порциям А,В,С. Параллельно проводилось бактериологическое исследование желчи, с помощью которого выделено: в порции А у 4 больных (17,4%) кишечная палочка и у 2 (8,7%) стафи-. лококки, в порции В у 7 человек (30,4%) кишечная палочка, в порции С у 2 (8,7%) кишечная палочка. Общий антиген энтеробактерий с помощью предлагаемого способа определялся в порции А у 4 больных (17.4%), В - 20 (87%), С - 14 (61 %).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что общий антиген энтеробакте- рий в реакции двойной иммунодиффузии выявляется в желчи значительно чаще, чем обнаруживаются энтеробактерии в данном исследуемом материале с помощью общепринятого бактериологического способа. При этом, результаты второго способа могут значительно зависеть от контаминации получаемой желчи микрофлорой во время ее забора. Возможно, такое происхождение имеют стафилококки, обнаруженные в порции А.

П р и м е р 5. Провели определение наличия общего антигена энтеробактерии с помощью предлагаемого способа в порциях А, В и С желчи, полученных путем дуоденального зондирования у взрослых больных с холециститами. Положительные результаты имели место в порции А у 2 из 12 обследованных лиц (16,7%), в порции В - 10 (83,3%)и порции С-4(33,3%)больных. При этом, исследования проводились непосредственно в клинике и результаты анализов были получены уже через 24 часа после забора материала.

Все это свидетельствует о том, что выявление в желчи общего антигена энтеро- бэктерий с помощью предлагаемого способа значительно повышает чувствительность, при этом результаты не зависят от возможной контаминации исследуемого материала микробными клетками во время его получения, так как они перед проведением анализа удаляются центрифугированием, существенно упрощается тестирование антигена и значительно сокращается время проведения исследования.

Формула изобретения Способ определения обсемененности желчи энтеробактериями, включающий забор желчи с последующим ее исследованием, отличающийся тем, что. с целью

повышения чувствительности способа, сокращения времени анализа и его упрощения, перед исследованием желчь центрифугируют и методом двойной иммунодиффузии выявляют наличие растворимых антигенов, сходных с антигенами Alcaligenes fecalis, и при их обнаружении определяют обсемененность желчи энтеробактериями.

Изобретение относится к медицине, а именно к определению обсемененности желчи энтеробактериями. Цель изобретения - повышение чувствительности способа, сокращение времени анализа и его упрощении. Желчь получают с помо.щью дуоденального зондирования, центрифугируют ее, виммунодиффуэии и использованием культуры алкалигенес Фекалис выявляют общие с ним растворимые антигены и при их обнаружении определяют обсеменен- ность желчи энтеробактериями. По сравнению с прототипом увеличивается чувствительность способа, сокращается время анализа. 2 ил.