Среда для культивирования, идентификации и хранения облигатно-анаэробных микроорганизмов Советский патент 1993 года по МПК C12N1/20 C12Q1/02 

рата, как ЭКД, существенно улучшает условия культивирования анаэробных микроорганизмов. Тем не менее, в 10-20% случаев, даже при наличии явных клинических проявлений, провести законченное лабораторное исследование не удавалось.

Повышение жизнеспособности облигатно- анаэробных бактерий на различных этапах микробиологического исследования, улучшение специфических культуральных свойств среды.

В состав предлагаемого питательного субстрата вводится ферментолизат биомассы микроорганизмов (ФБМ) и бычий гемоглобин (БГ)- Предлагаемый комплекс биологически активных веществ - ФБМ - представляет собой расщепленный ферментами пул микробной клетки, лишенной оболочки. Препарат ФМБ содержит, помимо пептидов и аминокислот, также витамины, но в гораздо меньших количествах по сравнению с ЭКД, что в полной мере отвечает физиологии анаэробов. Кроме того, ФБМ содержит многочисленные дериваты нуклеиновых кислот, нуклеотиды, полисахариды, фосфолипиды, микроэлементы. Таким образом, основное отличие препарата ФБМ состоит в том, что он содержит не нативные внеклеточные водорастворимые вещества (аминокислоты, витамины), а . гидролитически расщепленные соединения, многие из которых утилизируются микробной клеткой в неизмененном виде. Препарат Б Г поддерживает редуцирующие свойства среды на более высоком уровне.

Пример 1. Сухую тиогликолевую среду для контроля стерильности (11,0 г) поваренную соль (0,9 г), пептон (2,0 г), сульфат аммония (0,4 г), крахмал растворимый (1,0 г), агар (16 г для плотной или 0,4 г для полужидкой среды) растворитель в 1 л дистиллированной воды с добавлением 50,0 мг% (азот аминный) гидролизата по Хоттингеру, нагреть до полного растворения компонентов, довести рН до 7,2, Разлить по флаконам, автоклавировать при 120°С - 20 мин. Перед употреблением агар растопить, остудить, добавить 5% крови (лизированной и нелизировач- ной поровну), 0.1 мл 1%-го раствора менадиона, стерилизованного фильтрованием, 1,0 г ферментолизата биомассы микроорганизмов, простерилизованного при 116°С25мин,и 0,01 г бычьего гемоглобина в 1 мл стерильной дистиллированной воды.

Пример 2. Сухую тиогликолевую среду (14,0 г), поваренную соль (1,35 г), пептон (3,5 г), сульфат аммония (0,8 г), крахмал растворимый (2,0 г),агар (18,0 г)для плотной или 0,55 г для полужидкой среды растворить в 1 л дистиллированной воды с добавлением 100 мл% (азот аминный) гидролизата по Хоттингеру, нагреть до полного растворения компонентов, довести рН до 7,2, Разлить по флаконам, автоклавировать при 120°С 20 мин. Перед употреблением агар растопить, остудить, добавить 5% крови (лизированной и нелизированной

поровну), 0.5 мл 1 %-ного спиртового раствора менадиона, 5,5 г ферментолизата биомассы микроорганизмов и 0,59 г бычьего гемоглобина в 1 мл стерильней дистиллированной воды.

ПримерЗ. Сухую тиогликолевую среду для контроля стерильного (17,0 г) поваренную соль (1,8 г), пептон (5,0 г), сульфат аммония (1,2 г), крахмал растворимый (3,0 г), агар (20,0 г для плотной или 0,7 г для полужидкой

5 среды), растворитель в 1 мл дистиллированной воды с добавлением 150 м% (азот аминный) гидролизата по Хоттингеру, нагреть до полного растворения компонентов, довести рН до 7,2. Разлить по флаконам, автоклави0 ровать при 120°С - 20 мин. Перед употреблением агар растопить, остудить, добавить 5% крови (лизированной и нелизированной поровну), 1 мл 1 %-ного спиртового раствора менадиона, стерилизованного фильтровани5 ем, 10 г ферментолизата биомассы микроорганизмов и 1,17 г бычьего гемоглобина в 1 мл стерильной дистиллированной воды. Использовать свежеразлитую среду или редуцированную при хранении в

0 бескислородной среде при комнатной температуре не менее суток.

При использовании предложения жизнеспособность облигатно-анаэробных микроорганизмов повышается, что выражается

5 в стабильности культуральных свойств при субкультивировании, рост видимых колоний появляется на 1-2 сутки раньше, колонии - более крупные по размеру. Морфология колоний при этом остается типичной, что

0 свидетельствует об адекватности среды.

Практическое использование предлагаемой среды радикально улучшает своевременную диагностику гнойно-воспалительных осложнений у больных с хрониче5 скими заболеваниями (туберкулез, сахарный диабет и т.д.), а также служит основой надежной лабораторной коррекции лечебных мероприятий.

Формула изобретения

0 1. Среда для культивирования, идентификации и хранения облигатно-анаэробных микроорганизмов, включающая сухую тиогликолевую среду, менадион, гемсодержа- щий белок и воду, отличающаяся тем,

5 что, с целью улучшения ростовых свойств и среды и повышения жизнеспособности бактерий, она дополнительно содержит хлористый натрий, гидролизат по Хоттингеру, пептон, сульфат аммония, растворимый крахмал, агар, фермонтолиздт биомассы

5 1822875б

микроорганизмов, из гемсодержащих бел-Агар 0,4 20,0 г

ков - бычий гемоглобин, при следующемФерментолизат биомассы

соотношении компонентов, на 1 л:микроорганизмов 1,0-10,0 г

Сухая тиогликолеваяБычий гемоглобин 0.01-1,17 г

среда 11,0-17, г5 Вода До 1 л

Хлористый натрий 0,9-1,8 г2. Среда по п. 1,отличающаяся

Гидролизат по Хоттинтеру 50-150 мг%тем, что содержит менадион и агар в колиаминного азотачестве 0,0001-0,01 и 0,4-0.7 г соответственПептон 2.0-5,0 гно для полужидкой и жидкой сред, и в Сульфат аммония 0,4-1,2 г10 количестве 0.01-0,1 и 16,0-20.0 г - для плот- Растворимый крахмал 1,0-3,0 гной. Менадион 0,0001-0,1 г